Novocastra Laboratories Ltd., Balliol Business Park West ...

Dysferlin
Lyophilisierter monoklonaler Maus-Antikörper Produkt-Nr.: NCL-Hamlet-2
Verwendungszweck
Für in-vitro-Diagnostik.
NCL-Hamlet-2 ist für den qualitativen Nachweis des humanen Dysferlin-Moleküls in gefrorenen Schnitten und Paraffinschnitten mittels
Lichtmikroskopie gedacht. Die klinische Bewertung einer vorliegenden bzw. fehlenden Färbung sollte durch morphologische Studien mit
entsprechenden Kontrollen ergänzt und im Kontext der Krankengeschichte des Patienten und anderer diagnostischer Tests von einem
qualifizierten Pathologen vorgenommen werden.
Verfahrensgrundlage
Immunhistochemische (IHC) Färbetechniken gestatten die optische Darstellung von Antigenen mittels sequentieller Anwendung eines
spezifischen Antikörpers zum Antigen (primärer Antikörper), eines sekundären Antikörpers zum primären Antikörper mit einem chromogenen
Substrat, jeweils getrennt durch dazwischen liegende Waschschritte. Die enzymatische Aktivierung des Chromogens führt zu einem
sichtbaren Reaktionsprodukt am Ort des Antigens. Die Probe kann dann mit einem Deckglas versehen werden. Die Ergebnisse werden
mithilfe eines Lichtmikroskops ausgewertet und helfen bei der Differentialdiagnose pathophysiologischer Prozesse, die mit einem bestimmten
Antigen in Verbindung stehen könnten.
Klon
Ham3/17B2
Immunogen
Synthetisches Peptid, das die Aminosäuren 349-366 (die die Exone 11 und 12 umfassen) des humanen Dysferlin-Moleküls enthält.
Spezifität
Reagiert mit dem Dysferlin-Molekül im humanen Skelettmuskel. Liegt ebenfalls in vielen anderen Geweben außer Muskelgewebe vor.
Reagenzzusammensetzung
NCL-Hamlet-2 ist ein lyophilisierter Gewebekulturüberstand, der 15 mmol/l Natriumazid als Konservierungsmittel enthält. Der Benutzer muss
den Inhalt des Fläschchens mit dem korrekten Volumen sterilen, destillierten Wassers entsprechend den Angaben auf dem Produktetikett
rekonstituieren.
Ig-Klasse
IgG2b
Gesamtproteinkonzentration Total Protein
1,0 - 8,0 g/l. Hinsichtlich der chargenspezifischen Gesamtproteinkonzentration siehe Angaben auf dem Produktetikett.
Antikörperkonzentration
Größer als oder gleich 333,0 mg/l laut ELISA-Bestimmung. Hinsichtlich der chargenspezifischen Ig-Konzentration siehe Angaben auf dem
Produktetikett.
Gebrauchsempfehlungen
Immunhistochemie (siehe D. Vorgehensweise) auf gefrorenen Schnitten. Empfohlene Verdünnung: 1:20 - 1:40 über einen Zeitraum von 60
Minuten bei 25 o C. Dies ist nur eine Empfehlung, und die Benutzer sollten ihre eigenen optimalen Arbeitsverdünnungen bestimmen. NCL-
Hamlet-2 erfordert die Fixierung der Schnitte in Azeton/Methanol im Verhältnis 1:1 über einen Zeitraum von 4 Minuten bei 25 o C vor der
Inkubation mit dem primären Antikörper.
Immunhistochemie (siehe D. Vorgehensweise) auf Paraffinschnitten. Empfohlene Verdünnung: 1:20 - 1:40 über einen Zeitraum von 60
Minuten bei 25 o C. Es wird empfohlen, das Hochtemperatur-Antigen-Retrieval mit 0,01 mol/l Citrat-Retrieval-Lösung (pH-Wert 6,0) zu
verwenden. Dies ist nur eine Empfehlung, und die Benutzer sollten ihre eigenen optimalen Arbeitsverdünnungen bestimmen.
Lagerung und Stabilität
Ungeöffneten Antikörper bei 2-8 o C lagern. Unter diesen Bedingungen kommt es bis zum Ablauf des auf dem Produktetikett angegebenen
Verfallsdatums zu keiner bedeutenden Verschlechterung der Produktleistung. Nach Ablauf des Verfallsdatums (auf dem Behälteretikett) darf
das Produkt nicht mehr verwendet werden. Der rekonstituierte Antikörper bleibt bei einer Lagertemperatur von 2-8 o C mindestens zwei Monate
lang stabil. Für eine langfristige Lagerung wird empfohlen, Aliquoten des Antikörpers bei -20 o C zu frieren (frostfreie Gefrierschränke werden
nicht empfohlen). Wiederholtes Einfrieren und Auftauen muss vermieden werden. Die Arbeitsverdünnungen müssen am Tag ihrer
Verwendung angesetzt werden. Nach Gebrauch sofort wieder bei 2-8 o C lagern. Lagerbedingungen, die von den oben genannten
Bedingungen abweichen, müssen vom Benutzer verifiziert werden.
Probenvorbereitung
Für gefrorene Gewebeschnitte müssen die Blöcke mit den Gewebeproben in Isopentan, das in flüssigem Stickstoff gekühlt wurde, eingefroren
werden (siehe Warnhinweise und Sicherheitsmaßnahmen). Die Proben erfordern keine weitere Fixierung, sollten jedoch in OCT-Compound
(Sakura, Produkt-Nr. Tissue-Tek 4583) eingebettet werden.
Für paraffineingebettete Gewebeschnitte ist das empfohlene Fixativ 10% neutral gepuffertes Formalin.
Warnhinweise und Sicherheitsmaßnahmen
Dieses Reagenz wurde aus Zellkulturüberstand zubereitet. Das Reagenz ist ein biologisches Produkt und sollte mit entsprechender Vorsicht
gehandhabt werden.
Die Molarität des Natriumazids in diesem Reagenz beträgt 15 mmol/l. Ein Sicherheitsdatenblatt (Material Safety Data Sheet (MSDS)) für
Natriumazid ist auf Anfrage erhältlich.
Die entsprechenden nationalen und lokalen Bestimmungen und Vorschriften zur Entsorgung potentiell giftiger Komponenten sind einzuhalten.
Vor und nach der Fixierung sind die Proben sowie alle Materialien, die mit ihnen in Kontakt gekommen sind, als potentiell infektiös zu
behandeln und daher mit entsprechender Vorsicht zu entsorgen. 1 Reagenzien dürfen niemals mit dem Mund pipettiert werden, und jeglicher
Kontakt der Reagenzien und Proben mit Haut und Schleimhäuten ist zu vermeiden. Falls Reagenzien oder Proben mit empfindlichen
Bereichen in Kontakt gekommen sind, müssen diese mit reichlich Wasser gespült werden. Ärztlichen Rat einholen.
Die mikrobielle Verunreinigung von Reagenzien ist zu minimieren, da ansonsten eine erhöhte unspezifische Färbung auftreten kann.
Falls die spezifizierten Inkubationszeiten oder –temperaturen nicht eingehalten werden, kann es zu fehlerhaften Ergebnissen kommen.
Jegliche Abweichungen von den angegebenen Werten müssen vom Benutzer verifiziert werden.