Novocastratm Lyophilized Mouse Monoclonal Antibody Dysferlin
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Metodologia de imunocitoquímica para utilização de anticorpos<br />
Novocastra TM em tecido de músculo congelado.<br />
Reagentes necessários mas não fornecidos<br />
1. Solventes comuns utilizados em imunohistoquímica.<br />
2. 50 mM solução salina tampão Tris (TBS) pH 7,6.<br />
3. Diluente do anticorpo – soro normal diluído em TBS.<br />
4. Soros normais da espécie em que o anticorpo secundário tenha sido desenvolvido.<br />
5. Anticorpo secundário conjugado com peroxidase – preparar conforme recomendado pelo fabricante.<br />
6. 3,3’ Tetracloridrato de diaminobenzidina (DAB) – preparar e utilizar conforme recomendado pelo fabricante.<br />
7. Meio de montagem – usar conforme recomendado pelo fabricante.<br />
Equipamento necessário mas não fornecido<br />
1. Incubador regulado para 25 ºC.<br />
2. Equipamento geral de laboratório de imunohistoquímica.<br />
3. Ventilador eléctrico para secagem das lâminas ao ar.<br />
Soluções de recuperação de antígeno (ver as Recomendações sobre a utilização)<br />
Não se aplica às secções congeladas.<br />
Metodologia<br />
Antes de intentar esta metodologia, o utilizador deve ter recebido a devida formação em técnicas de imunohistoquímica.<br />
O utilizador deve determinar quais as fórmulas de diluição ideais para os anticorpos. A não ser indicação em contrário, todas as etapas<br />
devem ser efectuadas a 25 ºC.<br />
1. Cortar e montar secções de 4–10 μm em lâminas revestidas de um tecido adesivo apropriado e secar ao ar durante pelo menos<br />
uma hora.<br />
2. Incubar as secções com anticorpo primário optimamente diluído (ver Recomendações sobre a utilização).<br />
3. Lavar em tampão TBX durante 2 x 5 minutos, agitando levemente.<br />
4. Incubar as secções num anticorpo secundário apropriado, conjugado com peroxidase.<br />
5. Lavar em tampão TBX durante 2 x 5 minutos, agitando levemente.<br />
6. Incubar as lâminas em DAB.<br />
7. Enxaguar as lâminas em água limpa.<br />
8. Desidratar, soltar e montar as secções.<br />
E. Emendas da edição anterior<br />
Não é aplicável.<br />
F. Data de emissão<br />
5 de Fevereiro de 2004 (CEprotocol/Frozen Muscle).<br />
NCL-Hamlet<br />
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