Novocastratm Lyophilized Mouse Monoclonal Antibody Dysferlin
Novocastratm Lyophilized Mouse Monoclonal Antibody Dysferlin
Novocastratm Lyophilized Mouse Monoclonal Antibody Dysferlin
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
Immunhistochemisches Vorgehen beim Einsatz von Novocastra TM-<br />
Antikörpern für gefrorenes Muskelgewebe.<br />
A. Zusätzlich benötigte, aber nicht mitgelieferte Reagenzien<br />
1. In der Immunhistochemie übliche Standardlösungsmittel.<br />
2. 50 mmol/l Tris-gepufferte physiologische Kochsalzlösung (Tris-Buffered Saline, TBS) pH-Wert 7,6.<br />
3. Antikörper-Verdünnungsmittel – optimal in TBS verdünntes Normalserum.<br />
4. Normalseren der Spezies, in denen der sekundäre Antikörper gezüchtet wird.<br />
5. Sekundärer, peroxidase-konjugierter Antikörper – gemäß den Empfehlungen des Herstellers zu verwenden.<br />
6. 3,3’-Diaminobenzidintetrahydrochlorid (DAB) - gemäß den Empfehlungen des Herstellers anzusetzen und zu verwenden.<br />
7. Eindeckmedium - gemäß den Empfehlungen des Herstellers zu verwenden.<br />
Zusätzlich benötigte, aber nicht mitgelieferte Ausrüstung<br />
1. Inkubator, auf 25 o C eingestellt.<br />
2. Übliche immunhistochemische Laborausstattung.<br />
3 Elektroventilator zum Lufttrocknen von Objektträgern.<br />
Antigen-Retrieval-Lösungen (siehe Gebrauchsempfehlungen)<br />
Nicht für gefrorene Schnitte zutreffend.<br />
Vorgehensweise<br />
Vor Anwendung dieser Methodik müssen die Benutzer in immunhistochemischen Techniken unterrichtet werden.<br />
Die Benutzer müssen die optimale Verdünnung für die Antikörper bestimmen. Sofern nicht anderweitig vorgegeben, werden alle Schritte bei<br />
Raumtemperatur (25 oC) durchgeführt.<br />
1. Schnitte von 4–10 μm schneiden und auf Objektträgern aufbringen, die mit einem geeigneten Gewebehaftmaterial beschichtet sind,<br />
und mindestens eine Stunde lang an der Luft trocknen lassen.<br />
2. Die Schnitte mit optimal verdünntem primären Antikörper inkubieren (siehe Gebrauchsempfehlungen)<br />
3. Die Schnitte in TBS-Puffer 2 x 5 Minuten lang mit sanfter Kippbewegung spülen.<br />
4. Die Schnitte mit einem entsprechenden peroxidase-konjugierten, sekundären Antikörper inkubieren.<br />
5. Die Schnitte in TBS-Puffer 2 x 5 Minuten lang mit sanfter Kippbewegung spülen.<br />
6. Die Objektträger in DAB inkubieren.<br />
7. Die Objektträger mit sauberem Wasser abspülen.<br />
8. Die Schnitte dehydrieren, säubern und aufbringen.<br />
E. Änderungen zur vorhergehenden Ausgabe<br />
Keine.<br />
F. Ausgabedatum<br />
5. Februar 2004 (CEprotocol/Frozen Muscle).<br />
NCL-Hamlet<br />
Page 24