Novocastratm Lyophilized Mouse Monoclonal Antibody Dysferlin
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Méthodologie immunohistochimique pour l’utilisation des anticorps<br />
Novocastra TM sur des tissus musculaires congelés.<br />
Réactifs nécessaires mais non fournis<br />
1. Solvants standard utilisés en immunohistochimie.<br />
2. Tampon Tris (TBS) 50 mM, pH 7,6.<br />
3. Diluant anticorps – sérum normal dilué de façon optimale dans du TBS.<br />
4. Sérums normaux provenant de diverses espèces chez lesquelles l’anticorps secondaire est cultivé.<br />
5. Anticorps secondaire conjugué à la peroxydase - utiliser selon les recommandations du fabricant.<br />
6. Tétrachlorhydrate de 3,3’-diaminobenzidine (DAB) - utiliser selon les recommandations du fabricant.<br />
7. Milieu de montage - utiliser selon les recommandations du fabricant.<br />
Équipements nécessaires mais non fournis<br />
1. Incubateur réglé à 25 °C.<br />
2. Équipements généraux de laboratoire d’immunohistochimie.<br />
3. Ventilateur électrique pour sécher les lames à l’air.<br />
Solutions de restauration des antigènes (voir Recommandations d’utilisation)<br />
Non applicables sur des coupes congelées.<br />
Méthodologie<br />
Avant d’utiliser cette méthodologie, les utilisateurs doivent avoir été formés aux techniques immunohistochimiques.<br />
Les utilisateurs doivent déterminer les dilutions optimales des anticorps. Sauf mention contraire, toutes les étapes sont réalisées à 25 °C.<br />
1. Découper et monter des coupes de 4 à 10 µm sur des lames revêtues d’un adhésif adapté au tissu et laisser sécher à l’air pendant<br />
une heure.<br />
2. Incuber les coupes avec l’anticorps primaire dilué de façon optimale (voir Recommandations d’utilisation).<br />
3. Laver dans du tampon TBS pendant 2 fois pendant 5 minutes sous agitation légère.<br />
4. Incuber les coupes dans l’anticorps secondaire conjugué à la peroxydase approprié.<br />
5. Laver dans du tampon TBS pendant 2 fois pendant 5 minutes sous agitation légère.<br />
6. Incuber les lames dans le DAB.<br />
7. Rincer les lames à l’eau propre.<br />
8. Déshydrater, assécher et monter les coupes.<br />
Amendements apportés à la version précédente<br />
Non applicable.<br />
Date de publication<br />
5 février 2004 (CEprotocol/Frozen Muscle).<br />
NCL-Hamlet<br />
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