• I campioni, prima e dopo la fissazione, e tutti i materiali esposti ad essi devono essere manipolati come potenziali vettori di infezione e smaltiti con le opportune precauzioni2 . Non pipettare mai i reagenti con la bocca ed evitare il contatto dei reagenti e dei campioni con la cute e le mucose. Se un reagente o un campione viene a contatto con zone sensibili, lavare abbondantemente con acqua. Consultare un medico. • Consultare la normativa nazionale, regionale o locale per lo smaltimento dei componenti potenzialmente tossici. • Ridurre al minimo la contaminazione microbica dei reagenti per non incrementare il rischio di una colorazione non specifica. • Tempi o temperature di incubazione o di riconoscimento diversi da quelli specificati possono fornire risultati erronei. Ogni eventuale modifica deve essere convalidata dall’utente. Istruzioni per l’uso L’anticorpo primario Thyroid Transcription Factor-1 (SPT24) è stato sviluppato per essere utilizzato con il sistema automatizzato Bond in associazione con il Bond Polymer Refine Detection. Il protocollo di colorazione consigliato per l’anticorpo primario Thyroid Transcription Factor-1 (SPT24) è l’IHC Protocol F. Per lo smascheramento termoindotto dell’epitopo si consiglia l’uso della Bond Epitope Retrieval Solution 1 per 20 minuti. Risultati attesi Tessuti normali Il clone SPT24 ha rilevato la proteina del fattore 1 di trascrizione tiroideo nel nucleo delle cellule epiteliali follicolari della tiroide (13/13), nei pneumociti di tipo II e nelle cellule di Clara nel polmone (9/9). È stata osservata una certa reattività anche nelle cellule gliali del cervello (3/3). Il clone SPT24 non ha colorato il TTF-1 in diversi altri tessuti normali (n=140), compresi colon (0/12), cervello (0/8), placenta (0/4), rene (0/6), prostata (0/4), testicolo (0/4), cuore (0/4), milza (0/4), cervice uterina (0/5), linfonodo (0/2), timo (0/13), lingua (0/1), endometrio (0/2), muscolo scheletrico (0/4), tonsilla (0/4), ghiandole salivari (0/4), miometrio (0/1), cordone ombelicale (0/1), uretere (0/1), bronchi (0/1), ovaio (0/4), tube di Falloppio (0/1), fegato (0/4), mammella (0/4), esofago (0/4), stomaco (0/4), midollo spinale (0/1), occhio (0/1), pancreas (0/4), ileo (0/4), ceco (0/1), retto (0/1), surrene (0/4), mesotelio (0/1), paratiroide (0/1), nervo periferico (0/3), ipofisi (0/3), midollo osseo (0/3), utero (0/3) e pelle (0/4). Tessuti tumorali Il clone SPT24 ha rilevato la proteina del fattore 1 di trascrizione tiroideo nel nucleo di 26/32 adenocarcinomi polmonari, 4/7 carcinomi polmonari a piccole cellule, 2/3 carcinomi polmonari bronchioalveolari, 6/6 carcinomi papillari della tiroide, 4/4 carcinomi midollari della tiroide, 3/3 carcinomi follicolari tiroidei, 1/1 adenoma tiroideo follicolare, 1/1 tiroidite di Hashimoto, 19/56 timomi, 1/1 tumore desmoplastico a piccole cellule rotonde, 3/38 adenocarcinomi del colon moderatamente differenziati e 1/1 carcinoma rettale. Il clone SPT24 non ha colorato il carcinoma a cellule squamose del polmone (0/18), carcinoma polmonare a grandi cellule (0/5), adenocarcinoma del colon scarsamente differenziato (0/4), adenocarcinoma del colon ben differenziato (0/3), adenocarcinoma del colon non classificato (0/3), mesotelioma (0/5), carcinoide dell’intestino tenue (0/4), carcinoide atipico del timo (1/5), tumore metastatico del timo (0/1), tumore della mammella (0/6), tumore del fegato (0/8), carcinoma a cellule renali del rene (0/5), carcinoma a cellule transizionali del rene (0/1), tecoma ovarico (0/1), tumore delle cellule della granulosa dell’ovaio (0/1), granulosa dell’ovaio di tipo giovanile (0/1), carcinoma ovarico sieroso (0/3), carcinoma ovarico mucinoso (0/2), tumore a cellule germinali dell’ovaio (0/1), carcinoma ovarico a cellule chiare (0/1), adenocarcinoma dello stomaco (0/4), adenocarcinoma del pancreas (0/2), carcinoma papillare mucinoso del pancreas (0/1), tumore delle cellule insulari del pancreas (0/1), glucagonoma del pancreas (0/1), seminoma del testicolo (0/3), tumore misto a cellule germinali del testicolo (0/1), carcinoma embrionale del testicolo (0/1), astrocitoma cerebrale (0/1), papilloma del plesso coroideo cerebrale (0/1), melanoma (0/3), carcinoma a cellule basali della pelle (0/1), carcinoma a cellule squamose della pelle (0/2), carcinoma a cellule squamose del pene (0/2), carcinoma a cellule squamose dell’esofago (0/2), carcinoma a cellule squamose della laringe (0/1), carcinoma a cellule squamose della lingua (0/2), carcinoma squamoso della cervice uterina (0/1), carcinoma dell’intestino tenue (0/1), tumore stromale gastrointestinale (GIST) (0/1), sarcoma sinoviale (0/1), leiomiosarcoma (0/1), sarcoma di Ewing (0/1), rabdomiosarcoma a cellule fusiformi (0/1), tumore fibroso omentale (0/1), carcinoma a cellule transizionali della vescica (0/2), carcinoma a piccole cellule della vescica (0/1), linfoma a grandi cellule B (0/1), oncocitoma surrenale (0/2), adenoma surrenale (0/1), ganglioneuroma (0/1), adenocarcinoma della prostata (0/1), iperplasia prostatica benigna (0/1), sarcoma endometriale stromale (0/1), adenocarcinoma endometriale (0/1), carcinoma endometriale a cellule chiare (0/1), feocromocitoma (0/1), paraganglioma (0/1), né il tumore della cervice uterina (0/2). Il Thyroid Transcription Factor-1 (clone SPT24) è raccomandato per l’identificazione di TTF-1 in tessuti normali e neoplastici e per l’uso nella diagnosi come parte di un pannello di anticorpi. Limitazioni specifiche del prodotto Il Thyroid Transcription Factor-1 (SPT24) è stato ottimizzato da <strong>Leica</strong> <strong>Biosystems</strong> per l’uso con il Bond Polymer Refine Detection e con i reagenti ausiliari Bond. Gli utenti che modificano le procedure raccomandate devono assumersi la responsabilità dell’interpretazione dei risultati relativi ai pazienti in tali circostanze. I tempi del protocollo possono variare in base alle variazioni nella fissazione del tessuto e nell’efficienza del potenziamento dell’antigene e devono essere definiti in modo empirico. Nell’ottimizzazione delle condizioni di riconoscimento e dei tempi del protocollo si devono impiegare dei controlli negativi del reagente. Soluzione problemi Per i provvedimenti consultare il riferimento bibliografico n. 3. Per riferire una colorazione inusuale rivolgersi al distributore locale o all’ufficio di zona di <strong>Leica</strong> <strong>Biosystems</strong>. Ulteriori informazioni Ulteriori informazioni sull’immunocolorazione con i reagenti Bond si trovano in “Uso dei reagenti Bond” nella documentazione per l’utente Bond, ai titoli Principio della procedura, Materiali necessari, Preparazione del campione, Controllo di qualità, Verifica del saggio, Interpretazione della colorazione, Leggenda dei simboli e delle etichette e Limitazioni generali. PA0364 Page 9
Bibliografia 1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992. 2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P. 3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996. 4. Berghmans T, Mascaux C, Martin B et al. Prognostic role of thyroid transcription factor-1 in stage III non-small cell lung cancer. Lung Cancer. 2006; 52(2): 219-224. 5. Penman D, Downie I, Roberts F. Positive immunostaining for thyroid transcription factor-1 in primary and metastatic colonic adenocarcinoma: a note of caution. Journal of Clinical Pathology. 2006; 59:663-664. 6. Comperat E, Zhang F, Perrotin C et al. Variable sensitivity and specificity of TTF-1 antibodies in lung metastatic adenocarcinoma of colorectal origin. Modern Pathology. 2005; 18(10):1371-1376. 7. Pan C-C, Chen PC-H, Tsay S-H et al. Cytoplasmic immunoreactivity for thyroid transcription factor-1 in hepatocellular carcinoma: a comparative immunohistochemical analysis of four commercial antibodies using a tissue array technique. American Journal of Clinical Pathology. 2004; 121(3):343-349. ProClin 950 è un marchio di fabbrica di Supelco, società del gruppo Sigma-Aldrich. Data di pubblicazione 22 aprile 2013 PA0364 Page 10