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Sistemas de Identificação BBL Crystal
Anaerobe ID Kit
UTILIZAÇÃO PRETENDIDA
O Sistema de Identificação (ID) de Anaeróbios (ANR) BBL Crystal consiste num método de identificação miniaturizado que
utiliza substratos convencionais, fluorogénicos e cromogénicos modificados. Destina-se à identificação de bactérias anaeróbias
isoladas frequentemente. 1-9
SUMÁRIO E EXPLICAÇÃO
Os primeiros relatos da utilização de micrométodos para identificação bioquímica de microrganismos datam de 1918. 10 Várias
publicações participaram a utilização de discos de papel impregnados com reagentes e de métodos utilizando micro-tubos na
diferenciação de bactérias entéricas. 10-14 O interesse nos sistemas de identificação miniaturizados levou à introdução de
vários sistemas no mercado, no início dos anos sessenta, cujas vantagens residiam na necessidade de um reduzido espaço de
armazenamento, maior prazo de validade, controlo de qualidade padronizado e facilidade de utilização.
De uma forma geral, muitos dos testes usados nos Sistemas de ID BBL Crystal consistem em modificações de métodos clássicos.
Neles se incluem testes para a fermentação, oxidação, degradação e hidrólise de vários substratos. Paralelamente, existem
substratos ligados a cromogénios e fluorogénios, como sucede no painel BBL Crystal para ID de ANR, que se destinam à
detecção de enzimas utilizados pelos microrganismos para metabolizar vários substratos. 12,15-22
O BBL Crystal ANR ID kit (Conjunto BBL Crystal para ID de ANR) é constituído por (i) tampas dos painéis para ID de ANR
BBL Crystal, (ii) bases BBL Crystal e (iii) tubos com Líquido de Inóculo BBL Crystal ANR, GP, RGP, N/H ID Inoculum Fluid (IF). A
tampa contém 29 substratos desidratados e um controlo da fluorescência em pontas de dentes de plástico. A base é dotada de
30 poços de reacção. O inóculo de teste é preparado com o líquido de inóculo e é usado para encher todos os 30 poços da
base. Quando a tampa é alinhada com a base e encaixada, o inóculo de teste rehidrata os substratos secos e inicia as reacções
do teste.
Após um período de incubação, os poços são analisados relativamente à existência de alterações de cor ou à presença de
fluorescência, consequência das actividades metabólicas dos microrganismos. O padrão das 29 reacções obtido é convertido
num número de perfil com dez dígitos, que é usado como base de identificação. 23 A base de dados BBL Crystal ANR ID
contém padrões de reacções enzimáticas e bioquímicas dos 29 substratos BBL Crystal ANR ID correspondentes a uma ampla
variedade de microrganismos. A identificação faz-se a partir de uma análise comparativa entre o padrão da reacção do isolado
testado e os padrões presentes na base de dados. No Quadro 1 faculta-se uma lista completa dos grupos que constituem a
base de dados actual.
PRINCÍPIOS DO PROCEDIMENTO
Os painéis BBL Crystal ANR ID contêm 29 substratos bioquímicos e enzimáticos secos. Utiliza-se uma suspensão bacteriana
presente no líquido de inóculo para rehidratar os substratos. Os testes usados no sistema baseiam-se na utilização e
degradação de substratos específicos pelos microrganismos, detectadas por vários sistemas indicadores. A hidrólise
enzimática de substratos fluorogénicos contendo os derivados cumarínicos 4-metilumbeliferona (4MU) ou 7-amino-4metilcumarina
(7-AMC), provoca um aumento da fluorescência, facilmente detectável por meios visuais15-19 utilizando uma
fonte de luz UV. 19-21 Após hidrólise, os substratos cromogénicos provocam alterações de cor que podem ser detectadas
visualmente. Paralelamente, existem testes que detectam a capacidade que determinado microrganismo apresenta para
hidrolisar, degradar, reduzir ou utilizar de outra forma um substrato dos Sistemas de ID BBL Crystal.
No Quadro 2 descrevem-se as reacções utilizadas pelos vários substratos e uma explicação resumida dos princípios utilizados
no sistema. A localização do painel nos quadros referidos indica a fila e coluna em que se localiza o poço (por exemplo: 1J
refere-se à Fila 1 na Coluna J).
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