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Sistemi d’identificazione BBL Crystal
Kit per l’identificazione degli anaerobi
USO PREVISTO
Il sistema BBL Crystal d’identificazione (ID) degli anaerobi (ANR) è un metodo d’identificazione miniaturizzato che utilizza
substrati convenzionali fluorogenici e cromogenici modificati. Il suo uso è previsto per l’identificazione di batteri anaerobi
frequentemente isolati da campioni clinici.1-9
SOMMARIO E SPIEGAZIONI
I micrometodi per l’identificazione biochimica di microrganismi risalgono al 1918.10 Molte pubblicazioni hanno fatto
riferimento all’uso dei metodi dei dischi di carta impregnati di reagenti e della micro-provetta per la differenziazione degli
enterobatteri.10-14 L’interesse per i sistemi d’identificazione miniaturizzati ha portato all’introduzione di diversi sistemi per uso
commerciale verso la fine degli anni sessanta. Essi si dimostrarono invero estremamente convenienti grazie al limitato spazio
richiesto per l’immagazzinaggio e la lunga durata di conservazione, nonché per la standardizzazione del controllo di qualità ed
il loro facile impiego.
In genere, molti dei test impiegati dai sistemi BBL Crystal ID non sono altro che modifiche di sistemi classici, e comprendono
test di fermentazione, ossidazione, degradazione ed idrolisi di vari substrati. In aggiunta a ciò, il collegamento di alcuni
substrati a cromogeni e fluorogeni, come nel caso del pannello BBL Crystal ANR ID, consente la rivelazione di enzimi
utilizzati dai microbi per la metabolizzazione di vari substrati.12,15-22
Il kit BBL Crystal ANR ID comprende (i) coperchi per pannelli BBL Crystal ANR ID (ii) basi BBL Crystal e (iii) provette
BBL Crystal ANR, GP, RPG,N/H ID di fluido d’inoculo (FI). Il coperchio contiene 29 substrati disidratati ed un controllo di
fluorescenza posti sulle estremità di denti di plastica. La base è dotata di 30 pozzetti di reazione. L’inoculo del test viene
preparato con il fluido d’inoculo e viene impiegato per il riempimento di tutti e 30 i pozzetti. Quando il coperchio è
allineato alla base e scatta in posizione, l’inoculo del test reidrata i substrati dando inizio alle reazioni per il test.
In seguito ad un periodo di incubazione, i pozzetti vengono esaminati per rilevare eventuali cambiamenti di colore o
presenza di fluorescenza, che sono indice di attività metaboliche dei microrganismi. Lo schema risultante dalle 29 reazioni
viene poi convertito in un numero di profilo a dieci cifre, che costituisce la base sulla quale poter procedere poi
all’identificazione.23 Gli schemi delle reazioni biochimiche ed enzimatiche per i 29 substrati del sistema BBL Crystal ANR ID
per un’ampia varietà di microrganismi sono memorizzati nella banca dati BBL Crystal ANR ID. L’identificazione deriva
appunto dall’analisi comparativa del pattern di reazioni dell’isolato testato con quelle contenute nella banca dati. Si fornisce
un elenco completo di unità tassonomiche comprendente la banca dati attuale nella Tabella 1.
PRINCIPI DELLA PROCEDURA
I pannelli BBL Crystal ANR ID contengono 29 substrati biochimici ed enzimatici disidratati Per la reidratazione dei substrati
viene utilizzata la sospensione batterica nel fluido d’inoculo. I test utilizzati dal sistema si basano sull’utilizzazione e la
degradazione microbica di substrati specifici rivelati da vari sistemi indicatori. L’idrolisi enzimatica di substrati fluorogenici
contenenti derivati di cumarina di 4-metil-umbelliferone (4MU) o 7-ammino-4-metilcumarina (7-AMC), dà luogo ad uno
sviluppo di fluorescenza facilmente visibile ad occhio nudo15-19 con una lampada a UV.19-21 I substrati cromogenici sottoposti ad
idrolisi producono cambiamenti di colore visibili ad occhio nudo. Inoltre, vi sono altri test che rivelano la capacità di un
organismo di idrolizzare, degradare, ridurre o utilizzare in altro modo un substrato del sistema BBL Crystal ID.
Le reazioni impiegate da vari substrati ed una breve spiegazione dei principi utilizzati dal sistema di identificazione sono
descritte alla Tabella 2. La posizione del pannello sulle tabelle riportate indica la fila e la colonna in cui si trova il pozzetto
(ad esempio: 1J si riferisce alla fila 1 nella colonna J).
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