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CLIA-KOMPLEXITÄT: HOCH
CDC-IDENTIFIZIERUNGSCODES
ANALYTE: 0412
TESTSYSTEM: 07561
BBL Crystal Identifizierungssysteme
Testsystem zur Identifizierung von Anaerobiern
VERWENDUNGSZWECK
Das BBL Crystal Testsystem zur Identifizierung (ID) von Anaerobiern (ANR) ist eine miniaturisierte Identifizierungsmethode, die
modifizierte konventionelle, fluorogene und chromogene Substrate verwendet. Es dient zur Identifizierung häufig isolierter
anaerober Bakterien aus klinischen Proben.1-9
ZUSAMMENFASSUNG UND ERKLÄRUNG
Bereits im Jahr 1918 wurde über Mikromethoden zur biochemischen Identifizierung von Mikroorganismen berichtet.10
Mehrere Veröffentlichungen berichteten über die Verwendung von reagenzien-imprägnierten Papierplättchen und
Mikroröhrchen zur Differenzierung von Enterobakterien.10-14 Das Interesse an miniaturisierten Identifizierungssystemen
führte zur Einführung mehrerer kommerzieller Systeme Ende der 60er Jahre; ihre Vorteile waren ihr geringer Platzbedarf,
längere Haltbarkeit, standardisierte Qualitätskontrolle und einfache Handhabung.
Im allgemeinen sind viele der in den BBL Crystal ID-Systemen verwendeten Tests Modifizierungen klassischer Methoden.
Darunter befinden sich Tests zum Nachweis von Gärung, Oxydation, Abbau und Hydrolyse verschiedener Substrate.
Außerdem gibt es, wie im BBL Crystal ANR-ID-Panel, chromogen- und fluorogengebundene Substrate zum Nachweis von
Enzymen, die von Mikroorganismen zur Metabolisierung verschiedener Substrate verwendet werden.12,15-22
Das BBL Crystal ANR-ID-Testsystem besteht aus (i) Deckeln für die BBL Crystal ANR-ID-Panels, (ii) BBL Crystal Untersätzen und
(iii) Röhrchen mit BBL Crystal ANR, GP, RGP, N/H-ID-Inokulumsflüssigkeit (IF) für Anaerobier. Der Deckel enthält 29
dehydrierte Substrate und eine Fluoreszenskontrolle auf den Spitzen von Plastikzapfen. Der Untersatz besitzt 30
Reaktionsvertiefungen. Das Test-Inokulum wird mit der Inokulumsflüssigkeit zubereitet und in alle 30 Vertiefungen des
Untersatzes gefüllt. Wenn der Deckel mit dem Untersatz ausgerichtet und eingerastet wird, rehydriert das Test-Inokulum
die getrockneten Substrate und leitet die Testreaktion ein.
Nach der Inkubationszeit werden die Vertiefungen auf Farbumschläge und Fluoreszenz untersucht, die durch metabolische
Aktivität der Mikroorganismen entstehen. Das sich ergebende Muster der 29 Reaktionen wird in eine zehnziffrige
Profilnummer umgewandelt, die als Basis für die Identifizierung dient.23 Biochemische und enzymatische Reaktionsmuster
für die 29 BBL Crystal ANR-ID-Substrate für eine Vielzahl von Mikroorganismen sind in der BBL Crystal ANR-ID-Datenbank
gespeichert. Die Identifizierung erfolgt durch eine Vergleichsanalyse vom Reaktionsmuster des Testisolats mit den in der
Datenbank gespeicherten Reaktionsmustern. Eine vollständige Liste der Taxa, die in der derzeitigen Datenbank gespeichert
sind, befindet sich in Tabelle 1.
VERFAHRENSPRINZIP
Die BBL Crystal ANR-ID-Panels enthalten 29 getrocknete biochemische und enzymatische Substrate. Zur Rehydrierung der
Substrate dient eine Bakteriensuspension in der Inokulumsflüssigkeit. Die im Identifizierungssystem verwendeten Tests
basieren auf mikrobieller Nutzung und mikrobiellem Abbau spezifischer Substrate, die von verschiedenen Indikatorsystemen
nachgewiesen werden. Enzymatische Hydrolyse von fluorogenen Substraten, die Cumarinderivate von 4-Methylum-Belliferon
(4MU) oder 7-Amino-4-Methylcumarin (7-AMC) enthalten, führen zu intensiverer Fluoreszenz, die visuell15-19 leicht mit einer
UV-Lampe nachgewiesen werden kann.19-21 Bei Hydrolyse produzieren chromogene Substrate Farbumschläge, die visuell
nachgewiesen werden können. Zusätzlich sind andere Tests vorhanden, die die Fähigkeit eines Organismus zur Hydrolyse, zum
Abbau, zur Reduzierung oder zur anderen Nutzung eines Substrats im BBL Crystal ID-System.
Tabelle 2 enthält eine Beschreibung der von verschiedenen Substraten erzeugten Reaktionen sowie eine kurze Beschreibung
der im System angewandten Prinzipien. “Panel-Position” in den genannten Tabellen gibt die Reihe und die Spalte der
Vertiefung an (Beispiel: 1J bezieht sich auf Reihe 1 in Spalte J).
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