Notes: - BD

. Si on ne dispose pas d’autres colonies pour préparer un nouvel inoculum, diluer, en respectant les règles d’asepsie,
l’inoculum avec le volume minimum nécessaire (ne pas dépasser 1,0 mL) de sérum physiologique 0,85 % afin de
réduire la turbidité à un McFarland Nº 4. Enlever l’excédent à l’aide d’une pipette stérile afin que le volume final de
l’inoculum soit approximativement équivalent au volume initial du tube soit 2,3 ± 0,15 mL. Si l’excédent n’est pas
enlevé, l’inoculum se répandra sur la partie noire de la base rendant ainsi le panel inutilisable.
5. Prendre une base et reporter le numéro d’échantillon du patient
sur la paroi latérale.
6. Verser la totalité de la solution de l’inoculum dans la zone cible
de la base.
7. Prendre la base à deux mains et faire glisser doucement
l’inoculum le long des conduits jusqu’à ce que tous les puits
soient entièrement remplis. Faire refluer l’excédent vers la zone
cible et placer la base sur la surface de travail. A cause de la forte
concentration de cellules utilisée avec le panel BBL Crystal ANR
ID, l’inoculum doit glisser très lentement le long des conduits afin
de s’assurer qu’un remplissage adéquat des puits a eu lieu.
S’assurer de l’absence d’excédent de liquide entre les puits avant
d’aligner le couvercle.
8. Placer le couvercle de manière à ce que l’extrémité portant une
étiquette recouvre la zone cible de la base.
9. Appuyer jusqu’à ce qu’une légère résistance soit perçue. Placer
les pouces de chaque côté du couvercle, près du bord du
couvercle et à peu près au centre du panel, et appuyer
simultanément avec les deux pouces jusqu’à ce que le couvercle
soit parfaitement emboî té (on entend alors deux “déclics”).
Gélose de contrôle de pureté : à l’aide d’une anse stérile, récupérer une
goutte d’inoculum dans le tube avant ou après avoir inoculé la base et
ensemencer une gélose en boî te ou en tube incliné (tout milieu non
sélectif) pour vérifier la pureté de l’inoculum. Jeter le tube pour
l’inoculum et son bouchon dans un récipient pour déchets à risque
biologique. Incuber la boî te ou le tube pendant 24 – 48 h à une
température de 35 – 37 °C dans des conditions d’anaérobiose. La gélose
de contrôle de pureté peut également être utilisée pour effectuer des
tests supplémentaires ou une épreuve sérologique, si nécessaire.
Incubation : placer les panels ensemencés dans les plaques d’incubation.
Chaque plaque peut contenir dix panels (5 rangées de 2
panels). Tous les panels doivent être incubés face vers le bas (les
fenêtres les plus larges étant placées face vers le haut, et l’étiquette,
face vers le bas) dans un incubateur sans CO2 , entre 40 – 60 %
d’humidité. Ne pas empiler plus de deux plaques lors de l’incubation.
Le temps d’incubation pour les panels est de 4 h à une température
entre 35 – 37 °C. NOTA : la porte de l’incubateur ne doit pas être
ouverte de manière répétée durant la période d’incubation (de
préférence moins de 3 fois).
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