Notes: - BD

Systèmes d’identification
BBL Crystal
Trousse pour l’identification des bactéries anaérobies
COMPLEXITE CLIA : HAUTE
CODES IDENTIFICATEURS DU CDC
ANALYTE : 0412
SYSTEME D’ANALYSE : 07561
APPLICATION
Le système BBL Crystal pour l’identification (ID) des bactéries anaérobies (ANR) est une méthode d’identification
miniaturisée utilisant des substrats chromogènes, fluorogènes et conventionnels modifiés. Il a pour but d’identifier les
bactéries anaérobies fréquemment isolées à partir d’échantillons cliniques.1-9
RESUME ET EXPLICATION
L’emploi de microméthodes d’identification biochimique des microorganismes remonte à 1918.10 Plusieurs publications font
état de l’utilisation de disques de papier imprégnés de réactifs et de micro-tubes pour différencier les entérobactéries.10-14
L’intérêt suscité par les systèmes d’identification miniaturisés a conduit à la commercialisation de plusieurs systèmes à la fin
des années 60. Ces derniers avaient pour avantage d’être faciles à utiliser, de ne requérir qu’un espace de stockage restreint
tout en offrant une durée de conservation prolongée et un contrôle de qualité standardisé.
En général, plusieurs des tests utilisés dans les systèmes BBL Crystal ID sont des modifications de méthodes classiques. Ils
comprennent des tests de fermentation, d’oxydation, de dégradation et d’hydrolyse de différents substrats. De plus, des
substrats sont couplés à un chromogène ou un fluorogène, comme dans le cas des panels BBL Crystal ANR ID, afin de
détecter les enzymes utilisées par les microorganismes pour métaboliser ces substrats.12,15-22
La trousse BBL Crystal ANR ID est composée (i) de couvercles pour panels BBL Crystal ANR ID, (ii) de bases BBL Crystal et (iii)
de tubes de solution BBL Crystal ANR, GP, RGP, N/H ID pour l’inoculum. Le couvercle contient 29 substrats déshydratés et un
contrôle fluorescent situés à l’extrémité de pointes de plastique. La base comprend 30 puits réactionnels. L’inoculum à tester
est préparé à l’aide de la solution pour l’inoculum et permet de remplir la totalité des 30 puits de la base. Lorsque le
couvercle est aligné avec la base et correctement emboî té, l’inoculum à tester réhydrate les substrats secs et amorce les
réactions propres aux différents tests.
Après une période d’incubation, les puits sont examinés afin de déceler des changements de coloration ou la présence d’une
fluorescence résultant de l’activité métabolique des microorganismes. L’ensemble des résultats des 29 réactions est converti
en un profil numérique de 10 chiffres servant de base à l’identification.23 Les profils réactionnels biochimiques et
enzymatiques pour les 29 substrats du système BBL Crystal ANR ID obtenus pour une large gamme de microorganismes sont
stockés dans la base de données BBL Crystal ANR ID. L’identification repose sur la comparaison entre les profils réactionnels
obtenus avec l’isolat et ceux contenus dans la base de données. La liste taxonomique complète contenue actuellement dans
la base de données est donnée au tableau 1.
PRINCIPES DE LA METHODE
Les panels BBL Crystal ANR ID contiennent 29 substrats biochimiques et enzymatiques déshydratés. Une suspension bactérienne
contenue dans la solution pour l’inoculum est utilisée pour réhydrater les substrats. Les tests utilisés dans le système reposent sur
l’utilisation et la dégradation microbienne de substrats spécifiques détectées par différents systèmes d’indicateurs. L’hydrolyse
enzymatique des substrats fluorogènes contenant des dérivés coumariniques de 4-méthylumbelliferon (4MU) ou de 7-amino-4méthylcoumarin
(7-AMC), résulte en une augmentation de la fluorescence facilement détectée 15-19 à l’aide d’une lampe à UV.19-
21 L’hydrolyse des substrats chromogènes entraîne des changements de coloration pouvant être détectés à l’oeil nu. De plus, les
systèmes BBL Crystal ID comportent d’autres tests permettant de détecter la capacité d’un organisme à hydrolyser, dégrader,
réduire ou utiliser autrement un substrat.
Les réactions impliquées dans l’utilisation des différents substrats ainsi qu’une courte explication des principes sur lesquels
repose le système figurent au tableau 2. La position dans les tableaux indique le rang et la colonne correspondant à
l’emplacement des puits dans les panels (exemple : 1J correspond au rang 1 de la colonne J).
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