Manual sobre Técnicas Moleculares - Centro Jardín Botánico de ...

PCR (Amplificados para posterior secuenciación):
Fórmula de la reacción (ul):
Las fórmulas pueden modificarse; por ejemplo, con una Taq de muy alta calidad pudiese agregarse solo
0,25 ul en lugar de 1 ul; puede jugarse en general con todos los parámetros buscando la combinación que en
la práctica nos de los mejores resultados con nuestro grupo de estudio. En cualquier caso, la cantidad total
de mezcla se mantiene ajustando la cantidad de agua. La cantidad de ADN está en función de su
concentración y calidad, pudiendo agregarse más de 1ul si es necesario.
ndhF ITS trnL-F
10x buffer 5 5 5
MgCl2 (25 nM) 3 3 3
dNTP (10 mM) 4 2,5 4
ddH2O 31 32,5 31
Cebador 1 (10 mM) 2,5 2,5 2,5
Cebador 2 (10 mM) 2,5 2,5 2,5
Taq 1 1 1
__________________________________________
TOTAL: 49ul 49ul 49ul
ADN 1ul 1ul 1ul
Programas de PCR:
ndhF:
94ºC por 3 min al principio, seguido de
35 ciclos de lo siguiente:
92ºC - 1 min (desnaturalización)
45ºC - 1 min (anillamiento o apareamiento)
72ºC - 1,5 min (extensión)
entonces:
72ºC - 7 min
4ºC…(para mantener las muestras frias)
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