Manual sobre Técnicas Moleculares - Centro Jardín Botánico de ...
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Indicaciones específicas: Disolver los substratos en 2 ml de acetona. Variar el Ph de la solución de tinción si no se obtiene buen resultado (5.5-7). Mezclar los ingredientes e incubar en oscuridad a temperatura ambiente o a 37ºC, hasta la aparición de bandas azules. Después, eliminar el tampón de tinción, lavar y fijar. Configuración del enzima: Muy variable (depende del locus y taxon) Número de isozimas: Muy variable Tampón de electroforesis recomendado: 2 Malato deshidrogenasa (MDH) Cantidad Tris -HCl 0.1 M Ph 8 50 ml DL-Ácido málico 2.0M (Neutralizado a Ph 7.5 con NaOH en pastillas) 5 ml NAD* (10 mg/ml) 0.5 ml MTT* (20 mg/ml) 0.5 ml PMS* (4 mg/ml) 0.5 ml Indicaciones específicas: Mezclar los ingredientes e incubar en oscuridad a temperatura ambiente hasta la aparición de bandas azules. Después, eliminar el tampón de tinción, lavar y fijar. Configuración del enzima: Dimérico Número de isozimas: 3 Tampón de electroforesis recomendado: 3, 4 Menadiona reductasa (MNR) Cantidad Tris -HCl 0.05 M Ph 7 o fosfato monosódico 0.1 M Ph 7 50 ml Menadiona* 40 mg NADH* 20 mg MTT* (20 mg/ml) 1 ml Indicaciones específicas: Disolver la Menadiona en 2 ml de acetona. Puede ser equivalente a DIA. Mezclar los ingredientes e incubar en oscuridad a temperatura ambiente hasta la aparición de bandas azules. Después, eliminar el tampón de tinción, lavar y fijar. Configuración del enzima: Monomérico, Tetramérico Número de isozimas: 2-4 Tampón de electroforesis recomendado: 2 6-Fosfogluconato deshidrogenasa (6PGD) Cantidad Tris -HCl 0.1 M Ph 8 50 ml Ácido 6 fosfoglucónico (Barium salt) 20 mg MgCl2 1M 1 ml NADP* (10 mg/ml) 0.5 ml MTT* (20 mg/ml) 0.5 ml PMS* (4 mg/ml) 0.5 ml 76
Indicaciones específicas: Mezclar los ingredientes e incubar en oscuridad a temperatura ambiente hasta la aparición de bandas azules. Después, eliminar el tampón de tinción, lavar y fijar. Configuración del enzima: Dimérico Número de isozimas: 2 Tampón de electroforesis recomendado: 3 Fosfoglucoisomerasa (PGI) Cantidad Tris -HCl 0.1 M Ph 8 50 ml Fructosa 6 fosfato (Disodium salt) 15 mg MgCl2 1M 0.5 ml Glucosa 6 fosfato deshidrogenasa 20 U NADP* (10 mg/ml) 0.5 ml MTT* (20 mg/ml) 0.5 ml PMS* (4 mg/ml) 0.5 ml Indicaciones específicas: Mezclar los ingredientes e incubar en oscuridad a temperatura ambiente hasta la aparición de bandas azules. Después, eliminar el tampón de tinción, lavar y fijar. Configuración del enzima: Dimérico Número de isozimas: 2 Tampón de electroforesis recomendado: 1 Fosfoglucomutasa (PGM) Cantidad Tris -HCl 0.1 M Ph 8 50 ml Glucosa 1 fosfato (Disodium salt) 25 mg MgCl2 1M 1 ml Glucosa 6 fosfato deshidrogenasa 20 U NADP* (10 mg/ml) 0.5 ml MTT* (20 mg/ml) 0.5 ml PMS* (4 mg/ml) 0.5 ml Indicaciones específicas: Mezclar los ingredientes e incubar en oscuridad a 37ºC hasta la aparición de bandas azules. Después, eliminar el tampón de tinción, lavar y fijar. Configuración del enzima: Monomérico Número de isozimas: 2 Tampón de electroforesis recomendado: 1 77
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Indicaciones específicas: Mezclar los ingredientes e incubar en oscuridad a temperatura ambiente hasta la<br />
aparición <strong>de</strong> bandas azules. Después, eliminar el tampón <strong>de</strong> tinción, lavar y fijar.<br />
Configuración <strong>de</strong>l enzima: Dimérico<br />
Número <strong>de</strong> isozimas: 2<br />
Tampón <strong>de</strong> electroforesis recomendado: 3<br />
Fosfoglucoisomerasa (PGI) Cantidad<br />
Tris -HCl 0.1 M Ph 8 50 ml<br />
Fructosa 6 fosfato (Disodium salt) 15 mg<br />
MgCl2 1M 0.5 ml<br />
Glucosa 6 fosfato <strong>de</strong>shidrogenasa 20 U<br />
NADP* (10 mg/ml) 0.5 ml<br />
MTT* (20 mg/ml) 0.5 ml<br />
PMS* (4 mg/ml) 0.5 ml<br />
Indicaciones específicas: Mezclar los ingredientes e incubar en oscuridad a temperatura ambiente hasta la<br />
aparición <strong>de</strong> bandas azules. Después, eliminar el tampón <strong>de</strong> tinción, lavar y fijar.<br />
Configuración <strong>de</strong>l enzima: Dimérico<br />
Número <strong>de</strong> isozimas: 2<br />
Tampón <strong>de</strong> electroforesis recomendado: 1<br />
Fosfoglucomutasa (PGM) Cantidad<br />
Tris -HCl 0.1 M Ph 8 50 ml<br />
Glucosa 1 fosfato (Disodium salt) 25 mg<br />
MgCl2 1M 1 ml<br />
Glucosa 6 fosfato <strong>de</strong>shidrogenasa 20 U<br />
NADP* (10 mg/ml) 0.5 ml<br />
MTT* (20 mg/ml) 0.5 ml<br />
PMS* (4 mg/ml) 0.5 ml<br />
Indicaciones específicas: Mezclar los ingredientes e incubar en oscuridad a 37ºC hasta la aparición <strong>de</strong> bandas<br />
azules. Después, eliminar el tampón <strong>de</strong> tinción, lavar y fijar.<br />
Configuración <strong>de</strong>l enzima: Monomérico<br />
Número <strong>de</strong> isozimas: 2<br />
Tampón <strong>de</strong> electroforesis recomendado: 1<br />
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