Manual sobre Técnicas Moleculares - Centro Jardín Botánico de ...

Indicaciones específicas: Disolver los substratos en 2 ml de acetona. Variar el Ph de la solución de tinción si
no se obtiene buen resultado (5.5-7). Mezclar los ingredientes e incubar en oscuridad a temperatura ambiente
o a 37ºC, hasta la aparición de bandas azules. Después, eliminar el tampón de tinción, lavar y fijar.
Configuración del enzima: Muy variable (depende del locus y taxon)
Número de isozimas: Muy variable
Tampón de electroforesis recomendado: 2
Malato deshidrogenasa (MDH) Cantidad
Tris -HCl 0.1 M Ph 8 50 ml
DL-Ácido málico 2.0M (Neutralizado a Ph 7.5 con NaOH en pastillas) 5 ml
NAD* (10 mg/ml) 0.5 ml
MTT* (20 mg/ml) 0.5 ml
PMS* (4 mg/ml) 0.5 ml
Indicaciones específicas: Mezclar los ingredientes e incubar en oscuridad a temperatura ambiente hasta la
aparición de bandas azules. Después, eliminar el tampón de tinción, lavar y fijar.
Configuración del enzima: Dimérico
Número de isozimas: 3
Tampón de electroforesis recomendado: 3, 4
Menadiona reductasa (MNR) Cantidad
Tris -HCl 0.05 M Ph 7 o fosfato monosódico 0.1 M Ph 7 50 ml
Menadiona* 40 mg
NADH* 20 mg
MTT* (20 mg/ml) 1 ml
Indicaciones específicas: Disolver la Menadiona en 2 ml de acetona. Puede ser equivalente a DIA. Mezclar
los ingredientes e incubar en oscuridad a temperatura ambiente hasta la aparición de bandas azules. Después,
eliminar el tampón de tinción, lavar y fijar.
Configuración del enzima: Monomérico, Tetramérico
Número de isozimas: 2-4
Tampón de electroforesis recomendado: 2
6-Fosfogluconato deshidrogenasa (6PGD) Cantidad
Tris -HCl 0.1 M Ph 8 50 ml
Ácido 6 fosfoglucónico (Barium salt) 20 mg
MgCl2 1M 1 ml
NADP* (10 mg/ml) 0.5 ml
MTT* (20 mg/ml) 0.5 ml
PMS* (4 mg/ml) 0.5 ml
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