Manual sobre Técnicas Moleculares - Centro Jardín Botánico de ...

SISTEMAS ENZIMÁTICOS:
Aspartato amino transferasa (AAT=GOT) Cantidad
Tris -HCl 0.8 M 10 ml
Agua destilada 40 ml
Ácido α-cetoglutarico 100 mg
Ácido aspártico 200 mg
EDTA (opcional) 100 mg
PVP (opcional) 100 mg
Fast Blue BB salt* 100 mg
Indicaciones específicas: El Ph de la solución debe ser ajustado a 8.0 después de añadir los substratos. La
adición de cantidades variables de EDTA y PVP pueden mejorar el resultado. Mezclar el resto de ingredientes
e incubar en oscuridad a temperatura ambiente hasta la aparición de bandas verdes sobre matiz roja. Después,
eliminar el tampón de tinción, lavar y fijar.
Configuración del enzima: Dimérico
Núme ro de isozimas: 2
Tampón de electroforesis recomendado: 2
Aconitasa (ACO) Cantidad
Tris -HCl 0.1 M Ph 8 50 ml
Ácido cis -aconítico 150 mg
MgCl2 1M 1 ml
Isocitrato deshidrogenasa 0.5 ml
NADP* (10 mg/ml) 1 ml
MTT* (20 mg/ml) 0.5 ml
PMS* (4 mg/ml) 0.5 ml
Indicaciones específicas: El Ph de la solución debe ser ajustado a 8.0 después de añadir el substrato (ácido
cis -aconítico). Mezclar el resto de ingredientes e incubar en oscuridad a temperatura ambiente hasta la
aparición de bandas azules. Después, eliminar el tampón de tinción, lavar y fijar.
Configuración del enzima: Monómérico
Número de isozimas: 2
Tampón de electroforesis recomendado: 2
Alcohol deshidrogenasa (ADH) Cantidad
Tris -HCl 0.1 M Ph 8 50 ml
Etanol (95%) 3 ml
NAD* (10 mg/ml) 1.5 ml
MTT* (20 mg/ml) 0.5 ml
PMS* (4 mg/ml) 0.5 ml
Indicaciones específicas: El aumento de la cantidad de etanol puede resultar en la inhibición del enzima.
Mezclar los ingredientes e incubar en oscuridad a temperatura ambiente hasta la aparición de bandas azules.
Después, eliminar el tampón de tinción, lavar y fijar.
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