Manual sobre Técnicas Moleculares - Centro Jardín Botánico de ...
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PÁGINAS DE INTERNET DE INTERÉS - Felsenstein, J. - Phylogeny Programs Recopilación amplia de programas filogenéticos (incluidos métodos de alineamiento de secuencias de ADN) y de estudios genético-poblacionales (http://evolution.genetics.washington.edu/phylip/software.html#methods) - GenBank - National Center for Biotechnology Information Base de datos de secuencias de ADN (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/GenBank - Nickrent, D. E. - Techniques in Plant Molecular Biology Página sobre técnicas moleculares aplicadas a la taxonomía vegetal (http://www.science.siu.edu/plant-biology/nickrent/PLB420/Index.LabTechniques.html) - TreeBase - A database of phylogenetic knowledge Base de datos de matrices de secuencias de ADN y de reconstrucciones filogenéticas (http://eew228.leidenuniv.nl/treebase) BIBLIOGRAFÍA RECOMENDADA: Hillis DM, C Moritz, BK Mable. 1996. Molecular Systematics, second edition. Sinauer Inc. Sunderland, MA, USA. Hollingsworth, PM, RM Bateman, RJ Gornall. 1999. Molecular Systematics and Plant Evolution. Taylor & Francis. London and New York. Maniatis, T., E. F. Fritsch, J. Sambrook. 1982. Molecular cloning, a laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory Publ., New York. Sambrook, J., E.F. Fritsch, T. Maniatis. 1989. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press. Soltis DE, PS Soltis. 1989. Isozymes in Plant Biology. Chapman and Hill. London, UK. Soltis DE, PS Soltis, JJ Doyle. 1998. Molecular Systematics of Plants II. DNA sequencing. Kluwer. Boston, USA. (Para otras referencias bibliográficas de interés véase http://www.science.siu.edu/nickrent/PLB420/DNA.Techniques/DNA.Refs.html) 70
Anexo I : Protocolos para el estudio isoenzimático Tampón de extracción: Jose Gabriel Segarra Moragues (Universidad de Zaragoza) Solución madre 100 ml (guardar en nevera): A preparar en el momento de la extracción: Tampones de electroforesis: 1. Borato de Litio (Ashton & Braden) Tampón de electrodos: 1.12 gr/l LiOH 11.8 gr/l Ácido Bórico Tampón de gel: 1.75 gr/l Ácido Cítrico anhidro 6.2 gr/l Tris 2.42 gr/100 ml Tris 2.42 gr/100 ml Metabisulfito sódico 2 ml/100 ml MgCl2 1M 0.1 gr/100 ml EDTA Ajustar a Ph 7.5 con HCl 1 M 5 ml. solución madre 0.2 gr. PVP (Polivinilpirrolidona) 20 μl Mercaptoetanol Preparación: Mezclar 225 ml del tampón de gel con 25 ml. de tampón de electrodos y cocer el gel (10%) con 25 gr. de almidón. 71
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Anexo I : Protocolos para el estudio isoenzimático<br />
Tampón <strong>de</strong> extracción:<br />
Jose Gabriel Segarra Moragues (Universidad <strong>de</strong> Zaragoza)<br />
Solución madre 100 ml (guardar en nevera):<br />
A preparar en el momento <strong>de</strong> la extracción:<br />
Tampones <strong>de</strong> electroforesis:<br />
1. Borato <strong>de</strong> Litio (Ashton & Bra<strong>de</strong>n)<br />
Tampón <strong>de</strong> electrodos:<br />
1.12 gr/l LiOH<br />
11.8 gr/l Ácido Bórico<br />
Tampón <strong>de</strong> gel:<br />
1.75 gr/l Ácido Cítrico anhidro<br />
6.2 gr/l Tris<br />
2.42 gr/100 ml Tris<br />
2.42 gr/100 ml Metabisulfito sódico<br />
2 ml/100 ml MgCl2 1M<br />
0.1 gr/100 ml EDTA<br />
Ajustar a Ph 7.5 con HCl 1 M<br />
5 ml. solución madre<br />
0.2 gr. PVP (Polivinilpirrolidona)<br />
20 μl Mercaptoetanol<br />
Preparación: Mezclar 225 ml <strong>de</strong>l tampón <strong>de</strong> gel con 25 ml. <strong>de</strong> tampón <strong>de</strong> electrodos y cocer el gel<br />
(10%) con 25 gr. <strong>de</strong> almidón.<br />
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