Manual sobre Técnicas Moleculares - Centro Jardín Botánico de ...
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conservadas que sean flanqueantes de las zonas repetitivas, y prueba de los cebadores diseñados mediante amplificaciones por PCR de una selección de muestras en estudio. Cada zona de microsatélites para la cual se diseñan los pares de cebadores PCR directo y reverso es un locus único del genoma nuclear que puede contener distintas unidades de repetición entre las regiones flanqueantes conservadas. Los distintos alelos que pueda presentar cada una de esas regiones microsatélites van a consistir en un número diferente de la misma unidad de repetición, lo que les conferirá una distinta movilidad electroforética en el gel de poliacrilamida (o capilar). Los individuos homocigotos para un determinado alelo mostrarán una única banda amplificada, mientras que los heterocigotos mostrarán dos bandas (en taxones diploides), por tratarse de marcadores codominantes. El muestreo de los individuos representantes de la población permitirá conocer los genotipos presentes en la población, la variabilidad alélica de cada locus, y las frecuencias poblacionales de esos alelos. La técnica de los microsatélites presenta la ventaja de proporcionar alelos codominantes y de ser altamente fiable. Al tratarse de alelos genómicos del ADN repetitivo no se ven alterados por efectos transcripcionales, como las isoenzimas, ni están aparentemente afectados por presiones selectivas. Ello los convierte en marcadores neutros altamente resolutivos. Si bien su empleo es muy eficaz en estudio de genética poblacional de poblaciones actuales, no se recomienda su utilización en estudios filogenéticos, ya que la misma tasa de variabilidad mutacional tan elevada que presentan los hace impropios para reconstrucciones evolutivas históricas. Entre los ejemplos de estudios genético poblacionales llevados acabo con microsatélites nucleares están los desarrollados en los grupos ibéricos endémicos del género Limonium (Plumbaginaceae) y Borderea (Dioscoreaceae). 68
CONSERVACIÓN DE LA FLORA ENDÉMICA Y AMENAZADA Todas las técnicas moleculares de análisis de los genomas vegetales comentadas anteriormente pueden ser aplicadas a los estudios genéticos de plantas endémicas y amenazadas de distintas regiones florísticas. Las reconstrucciones filogenéticas basadas en secuencias de nucleótidos del ADN son una de las herramientas más empleadas en la clasificación evolutiva (y también sistemática) de las angiospermas. El emplazamiento filogenético de muchos taxones amenazados puede servir para conocer a sus co-taxones o poblaciones no amenazadas más próximos, que pueden actuar como fuente de reclutamiento de individuos en programas de reintroducción o de reforzamiento de poblaciones. Los estudios genético poblacionales conducidos mediante análisis de marcadores moleculares permiten conocer los niveles de variabilidad genética actual de las poblaciones de especies amenazadas o endémicas, deducir eventos que tuvieron lugar en su historia pretérita, y predecir algunos efectos del futuro dinamismo genético. El conocimiento de los parámetros genético poblacionales y de la estructura poblacional permiten establecer estrategias de protección de plantas en grave riesgo de extinción así como seleccionar a los individuos potencialmente más idóneos para experimentos de cruzamientos dirigidos. 69
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CONSERVACIÓN DE LA FLORA ENDÉMICA Y AMENAZADA<br />
Todas las técnicas moleculares <strong>de</strong> análisis <strong>de</strong> los genomas vegetales comentadas<br />
anteriormente pue<strong>de</strong>n ser aplicadas a los estudios genéticos <strong>de</strong> plantas endémicas y<br />
amenazadas <strong>de</strong> distintas regiones florísticas.<br />
Las reconstrucciones filogenéticas basadas en secuencias <strong>de</strong> nucleótidos <strong>de</strong>l ADN son una<br />
<strong>de</strong> las herramientas más empleadas en la clasificación evolutiva (y también sistemática) <strong>de</strong><br />
las angiospermas. El emplazamiento filogenético <strong>de</strong> muchos taxones amenazados pue<strong>de</strong><br />
servir para conocer a sus co-taxones o poblaciones no amenazadas más próximos, que<br />
pue<strong>de</strong>n actuar como fuente <strong>de</strong> reclutamiento <strong>de</strong> individuos en programas <strong>de</strong> reintroducción<br />
o <strong>de</strong> reforzamiento <strong>de</strong> poblaciones.<br />
Los estudios genético poblacionales conducidos mediante análisis <strong>de</strong> marcadores<br />
moleculares permiten conocer los niveles <strong>de</strong> variabilidad genética actual <strong>de</strong> las poblaciones<br />
<strong>de</strong> especies amenazadas o endémicas, <strong>de</strong>ducir eventos que tuvieron lugar en su historia<br />
pretérita, y pre<strong>de</strong>cir algunos efectos <strong>de</strong>l futuro dinamismo genético. El conocimiento <strong>de</strong> los<br />
parámetros genético poblacionales y <strong>de</strong> la estructura poblacional permiten establecer<br />
estrategias <strong>de</strong> protección <strong>de</strong> plantas en grave riesgo <strong>de</strong> extinción así como seleccionar a los<br />
individuos potencialmente más idóneos para experimentos <strong>de</strong> cruzamientos dirigidos.<br />
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