Manual sobre Técnicas Moleculares - Centro Jardín Botánico de ...

aparean, y se mantienen fuertemente unidos a su hebra complementaria por su extremo 3’, a
partir de cual se producirá la reacción de polimerización o elongación. Las reacciones de
polimerización en el ADN siempre se producen en dirección 5’-3’.
El desarrollo de la reacción en cadena de la polimerasa consiste en una serie de ciclos
repetitivos (de 30 a 40) en los que se dan tres pasos: la desnaturalización de las dos hebras
del ADN (a una temperatura elevada, entre 92-95C), el apareamiento de los cebadores con
sus respectivas hebras complementarias (a una temperatura menor, que depende de la
longitud y naturaleza de los cebadores, y que suele oscilar entre 50-60C), y la elongación o
síntesis de las nuevas cadenas complementarias (a la temperatura óptima de actividad de la
ADN polimerasa, que suele ser 72C). En el primer ciclo, y durante el primer paso de
desnaturalización, las dos hebras complementarias de ADN se separan al elevar la
temperatura, en el segundo paso los cebadores se aparean con sus regiones
complementarias de cada hebra al disminuir la temperatura, en el tercer paso la ADN
polimerasa produce la elongación o síntesis de las nuevas cadenas complementarias al
elevar de nuevo la temperatura de reacción a su óptimo, lográndose al final del ciclo la
producción de dos copias de la región amplificada. En el segundo ciclo cada una de estas
copias experimentará los mismos procesos en cada uno de los pasos de desnaturalización,
apareamiento de cebadores, y elongación, por lo que al final del ciclo se dispondrá de
cuatro copias de la región amplificada. Y así sucesivamente hasta el final del último ciclo.
Al tratarse de una reacción exponencial, se obtendrán cientos de millones de copias de la
región diana tras los 30-40 ciclos de la PCR.
58