Manual sobre Técnicas Moleculares - Centro Jardín Botánico de ...

Las sondas se utilizan en las hibridaciones con fragmentos complementarios de ADN
(apareamiento de regiones complementarias monocatenarias), para ello tanto la sonda como
los fragmentos potencialmente apareantes deben hallarse en forma monocatenaria. Antes de
la hibridación, los fragmentos digeridos de las muestras deben de transferirse a una
membrana en forma monocatenaria (Southern Blot); una vez fijados en la membrana son
puestos en contacto con una solución que contiene la sonda monocatenaria dándose
entonces la hibridación ADN-ADN de la sonda con sus fragmentos complementarios.
La hibridación de las membranas con una sonda específica tiene lugar en unas condiciones
especiales de temperatura (65C) y de concentración de sales (1xSSPE), durante un tiempo
determinado (ca. 12 h), en un horno de hibridación. Se baña la membrana con la solución
que contine la sonda monocatenaria marcada y, una vez trancurrido el proceso, se lava la
membrana, eliminando el exceso de sonda, y se procede al revelado de los fragmentos
hibridados por autorradiografía, quimioluminiscencia, o fluorescencia. El resultado del
revelado muestra un patrón de bandas de hibridación en las muestras que son los RFLPs.
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