Ver/Abrir - Repositorio Digital - Instituto Politécnico Nacional
Ver/Abrir - Repositorio Digital - Instituto Politécnico Nacional Ver/Abrir - Repositorio Digital - Instituto Politécnico Nacional
Clase II. En tubos de 50 ml, se colocaron 10 ml de DMEM 1% antibiótico-antimicótico con colagenasa Tipo I o II al 0.3%. Los tubos se ajustaron en el Orbital Shaker a 37° C a 250 rpm durante 4 horas, vigilando el avance en la digestión. Al finalizar las 4 hrs, de digestión se centrifugaron a 300 x g durante 12 minutos. Después de la centrifugación con una pipeta Pasteur se absorbió el sobrenadante cuidando el botón celular y fue resuspendido golpeando gentilmente el tubo agregando 5 ml de PBS sin Calcio ni Magnesio con 1% antibiótico-antimicótico. Nuevamente se centrifugó a 300 x g por 12 minutos. Con una pipeta Pasteur desechamos el sobrenadante y agregaremos 5 ml de DMEM 10% SBF 1% antibiótico-antimicótico. Para realizar el conteo celular se utilizó la técnica de azul tripano la cual se lleva a cabo de la siguiente manera: se agregan 10 μl de suspensión celular y 10 μl del colorante en una placa de 96 pozos homogeneizando la mezcla. Se agregan 10 μl de la mezcla a cada uno de los pozos de la cámara de Neubauer. Contando las células viables y no viables (las células no viables se tiñen con el colorante azul). El cálculo de la población celular se obtiene de acuerdo a la siguiente fórmula: (número de células)(Factor de Dilución[2 en este caso]) x (ml de la solución celular) = x104. Al finalizar el procedimiento de extracción las células se sembraron en cajas de cultivo de tipo T (Falcon BD, Biosciences) de acuerdo con el siguiente criterio: de 250 – 500 mil células recuperadas en cajas T25 con 5 ml de medio; de 500 – 1.5 millones de células en cajas T75 con 10 ml de medio; mas de 1.5 millones de 21
células en cajas T175 con 20 ml de medio. Las células se incubaron a 37°C y 5% CO2, cambiando el medio de cultivo cada 2 días. 6.4.2 Pasaje celular de menisco Cuando los cultivos en monocapa llegaron a confluencia después de 7 a 10 días, se cosecharon las células de la siguiente manera: se aspiró el medio con pipeta Pasteur de la caja de cultivo y se agregó tripsina-EDTA y esperamos 5 minutos exactamente mientras se monitorea el desprendimiento de la capa celular. Ya desprendida la monocapa, se colocó en tubos de 50 ml y se agrega 5 ml de PBS/albúmina al 2.5% y se centrífuga a 300 x g por 6 minutos. 6.4.3 Construcción del menisco de bioingeniería. Se sembraron alrededor de 10 millones de células por constructo meniscal, y se utilizaron dos polímeros para generar el sustituto de menisco, el primero que forma el centro del mismo y se constituye de PGA y el segundo, envuelve al primero y se compone de celulosa oxidada. El constructo de PGA se cubrió con la celulosa oxidada y se le dio forma y medida dependiendo de cada caso. 6.5 Procedimiento anestésico. Los sujetos de estudio se indujeron con Xilazina intramuscular a 0.8mg x kg, y se realizó una sedación leve con la infusión intravenosa de 5 mgr x kg de Ketamina. Acto seguido, se colocó a la oveja en decúbito lateral y se realizó la preparación de aproximadamente 20 cm de la región lumbar en donde se quitó la lana, se hizo 22
- Page 1: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
- Page 4 and 5: Noviembre de 2011 Este trabajo fue
- Page 6 and 7: 6.6.1 Técnica quirúrgica del tras
- Page 8 and 9: supuestos mecánicos del aparato lo
- Page 10 and 11: II. RELACIÓN DE FIGURAS Y TABLAS T
- Page 12 and 13: trasplantados por US y evaluación
- Page 14 and 15: 1. INTRODUCCIÓN Los meniscos son e
- Page 16 and 17: Con respecto a seguridad los desenl
- Page 18 and 19: En población joven, la lesión a l
- Page 20 and 21: ultraestructurales de los meniscos
- Page 22 and 23: Tanto la meniscectomía parcial com
- Page 24 and 25: antígenos de histocompatibilidad (
- Page 26 and 27: 3. JUSTIFICACION La lesión a los m
- Page 28 and 29: 4. HIPOTESIS ¿Es posible desarroll
- Page 30 and 31: 7. Corroborar la localización anat
- Page 32 and 33: (grupo 2); grupo de trasplante de m
- Page 36 and 37: un lavado con isodine espuma y alco
- Page 38 and 39: c. Calificación histológica modif
- Page 40 and 41: Despejando: 2 (1.8) 2 (1.96 + 1.282
- Page 42 and 43: Figura 1. Evaluación por microscop
- Page 44 and 45: 7.3.2 Evaluación Histológica Los
- Page 46 and 47: Grafica 1. Evaluación histológica
- Page 48 and 49: 8. DISCUSION En este estudio demost
- Page 50 and 51: colágena de los implantes de bioin
- Page 52 and 53: tejido similar al menisco nativo a
- Page 54 and 55: un solo tiempo. Nuestro grupo ha te
- Page 56 and 57: 9. Englund M, Lohmander LS. Risk fa
- Page 58 and 59: G, et al. Meniscal allograft transp
- Page 60 and 61: cartilage injuries in 1309 knee art
- Page 62 and 63: 12. ANEXOS Tabla 1. Clasificación
- Page 64 and 65: Tabla 4. Variables dependientes Var
- Page 66 and 67: Tabla 6. Descripción de los sujeto
- Page 68 and 69: Derrame sinovial (%) Hipertrofia si
células en cajas T175 con 20 ml de medio. Las células se incubaron a 37°C y 5%<br />
CO2, cambiando el medio de cultivo cada 2 días.<br />
6.4.2 Pasaje celular de menisco<br />
Cuando los cultivos en monocapa llegaron a confluencia después de 7 a 10 días,<br />
se cosecharon las células de la siguiente manera: se aspiró el medio con pipeta<br />
Pasteur de la caja de cultivo y se agregó tripsina-EDTA y esperamos 5 minutos<br />
exactamente mientras se monitorea el desprendimiento de la capa celular. Ya<br />
desprendida la monocapa, se colocó en tubos de 50 ml y se agrega 5 ml de<br />
PBS/albúmina al 2.5% y se centrífuga a 300 x g por 6 minutos.<br />
6.4.3 Construcción del menisco de bioingeniería.<br />
Se sembraron alrededor de 10 millones de células por constructo meniscal, y se<br />
utilizaron dos polímeros para generar el sustituto de menisco, el primero que forma<br />
el centro del mismo y se constituye de PGA y el segundo, envuelve al primero y<br />
se compone de celulosa oxidada.<br />
El constructo de PGA se cubrió con la celulosa oxidada y se le dio forma y medida<br />
dependiendo de cada caso.<br />
6.5 Procedimiento anestésico.<br />
Los sujetos de estudio se indujeron con Xilazina intramuscular a 0.8mg x kg, y se<br />
realizó una sedación leve con la infusión intravenosa de 5 mgr x kg de Ketamina.<br />
Acto seguido, se colocó a la oveja en decúbito lateral y se realizó la preparación<br />
de aproximadamente 20 cm de la región lumbar en donde se quitó la lana, se hizo<br />
22
Change language