Info - Leica Biosystems

Χρόνοι ή θερμοκρασίες επώασης διαφορετικές από εκείνες που καθορίζονται ενδέχεται να δώσουν εσφαλμένα αποτελέσματα. Τυχόν
τέτοιες μεταβολές πρέπει να επικυρώνονται από το χρήστη.
Ποιοτικός Έλεγχος
Τυχόν διαφορές στην επεξεργασία των ιστών και τις τεχνικές διαδικασίες στο εργαστήριο του χρήστη ενδέχεται να προκαλέσουν
σημαντική μεταβλητότητα στα αποτελέσματα, καθιστώντας αναγκαία την τακτική εκτέλεση εσωτερικών ελέγχων επιπλέον των ακόλουθων
διαδικασιών.
Οι μάρτυρες θα πρέπει να είναι φρέσκα δείγματα νεκροψίας/βιοψίας/χειρουργικά δείγματα, τα οποία είναι μονιμοποιημένα σε φορμόλη,
επεξεργασμένα και εγκλεισμένα σε κηρό παραφίνης, το συντομότερο δυνατό με τον ίδιο τρόπο με το(α) δείγμα(τα) του ασθενούς.
Θετικός Μάρτυρας Ιστού
Χρησιμοποιείται για να υποδεικνύει σωστά παρασκευασμένους ιστούς και σωστές τεχνικές χρώσης.
Θα πρέπει να περιλαμβάνεται ένας θετικός μάρτυρας ιστού για κάθε σύνολο συνθηκών εξέτασης σε κάθε εκτέλεση χρώσης.
Ένας ιστός με ασθενή θετική χρώση είναι πιο κατάλληλος από έναν ιστό με ισχυρή θετική χρώση για βέλτιστο έλεγχο ποιότητας και για
την ανίχνευση πολύ μικρών επιπέδων τυχόν αποδόμησης των αντιδραστηρίων. 2
Συνιστώμενος ιστός θετικού μάρτυρα είναι το μελάνωμα.
Εάν ο θετικός μάρτυρας ιστού δεν παρουσιάζει θετική χρώση, τα αποτελέσματα με τα δείγματα της εξέτασης θα πρέπει να θεωρούνται
άκυρα.
Αρνητικός Μάρτυρας Ιστού
Θα πρέπει να εξετάζεται μετά τον θετικό μάρτυρα ιστού για την επαλήθευση της ειδικότητας της επισήμανσης του αντιγόνου-στόχου από
το πρωτοταγές αντίσωμα.
Συνιστώμενος ιστός αρνητικού μάρτυρα είναι ο νεφρός.
Εναλλακτικά, η ποικιλία διαφόρων κυτταρικών τύπων που υπάρχουν στις περισσότερες τομές ιστών παρέχει συχνά θέσεις αρνητικού
μάρτυρα, αλλά αυτό πρέπει να επαληθεύεται από το χρήστη.
Μη ειδική χρώση, εάν υπάρχει, έχει συνήθως διάχυτη εμφάνιση. Ενδέχεται επίσης να παρατηρηθεί σποραδική χρώση του συνδετικού
ιστού σε τομές από ιστούς που έχουν μονιμοποιηθεί με υπερβολική ποσότητα φορμόλης. Χρησιμοποιείτε άθικτα κύτταρα για την
ερμηνεία των αποτελεσμάτων της χρώσης. Νεκρωτικά ή εκφυλισμένα κύτταρα παρουσιάζουν συχνά μη ειδική χρώση. 3 Ενδέχεται να
παρατηρηθούν ψευδώς θετικά αποτελέσματα λόγω μη ανοσολογικής δέσμευσης των πρωτεϊνών ή των προϊόντων αντίδρασης του
υποστρώματος. Ενδέχεται επίσης να προκληθούν από ενδογενή ένζυμα, όπως η ψευδοϋπεροξειδάση (ερυθροκύτταρα), η ενδογενής
υπεροξειδάση (κυτόχρωμα C) ή η ενδογενής βιοτίνη (π.χ. ήπαρ, μαστός, εγκέφαλος, νεφρός) ανάλογα με τον τύπο ανοσοχρώσης που
χρησιμοποιείται. Για τη διαφοροποίηση της ενδογενούς ενζυμικής δραστικότητας ή της μη ειδικής δέσμευσης των ενζύμων από ειδική
ανοσοαντιδραστικότητα, είναι δυνατό να χρωματιστούν αποκλειστικά επιπλέον ιστοί ασθενών με χρωμογόνο υποστρώματος ή ενζυμικά
σύμπλοκα (αβιδίνη-βιοτίνη, στρεπταβιδίνη, σημασμένο πολυμερές) και υπόστρωμα-χρωμογόνο, αντίστοιχα. Εάν παρουσιαστεί ειδική
χρώση στον αρνητικό μάρτυρα ιστού, τα αποτελέσματα με τα δείγματα ασθενούς θα πρέπει να θεωρούνται άκυρα.
Αρνητικός Μάρτυρας Αντιδραστηρίου
Χρησιμοποιείτε έναν μη ειδικό αρνητικό μάρτυρα αντιδραστηρίου αντί του πρωτοταγούς αντισώματος με μια τομή κάθε δείγματος
ασθενούς για την αξιολόγηση μη ειδικής χρώσης και για να επιτρέπεται καλύτερη ερμηνεία της ειδικής χρώσης στη θέση του αντιγόνου.
Ιστός Ασθενούς
Εξετάστε τελευταία τα δείγματα ασθενούς που έχουν χρωματιστεί με το NCL-L-HMB45. Η ένταση της θετικής χρώσης θα πρέπει να
εκτιμάται στα πλαίσια τυχόν μη ειδικής χρώσης υποβάθρου του αρνητικού μάρτυρα αντιδραστηρίου. Όπως συμβαίνει με οποιαδήποτε
ανοσοϊστοχημική εξέταση, ένα αρνητικό αποτέλεσμα σημαίνει ότι το αντιγόνο δεν ανιχνεύτηκε, όχι ότι το αντιγόνο δεν υπήρχε στα
κύτταρα/στον ιστό που εξετάστηκε. Εάν είναι απαραίτητο, χρησιμοποιήστε μια σειρά αντισωμάτων για την αναγνώριση ψευδώς
αρνητικών αντιδράσεων.
Αναμενόμενα Αποτελέσματα
Φυσιολογικοί ιστοί
Ο Δείκτης Μελανώματος (κλώνος HMB45) ανέδειξε κοκκιώδη κυτταροπλασματική χρώση σε μελανοκύτταρα της βασικής στιβάδας της
επιδερμίδας. Όλοι οι υπόλοιποι φυσιολογικοί ιστοί ήταν αρνητικοί. (Συνολικός αριθμός φυσιολογικών ιστών που αξιολογήθηκαν = 51).
Ανώμαλη ιστού
Ο Δείκτης Μελανώματος (κλώνος HMB45) χρωμάτισε 19/126 μη φυσιολογικούς ιστούς που αξιολογήθηκαν, συμπεριλαμβανομένων
όγκων του δέρματος (18/83, μεταξύ των οποίων 17/20 κακοήθη μελανώματα, 1/10 καρκινώματα του ιδρωτοποιού αδένα, 0/17
ακανθοκυτταρικά καρκινώματα, 0/14 βασικοκυτταρικά καρκινώματα, 0/9 δερματοϊνοσαρκώματα, 0/3 κακοήθη σβανώματα, 0/3
μεταστατικά αδενοκαρκινώματα, 0/2 αδενοκυστικά καρκινώματα, 0/1 αδενοκαρκίνωμα σμηγματογόνου αδένα, 0/1 ινοσάρκωμα,
0/1 λειομυοσάρκωμα, 0/1 αναπλαστικό αδιαφοροποίητο σάρκωμα και 0/1 μικτό ακανθοκυτταρικό/βασικοκυτταρικό καρκίνωμα),
κυανών σπίλων (1/1), καρκινωμάτων του θυρεοειδούς (0/4), καρκινωμάτων του πνεύμονα (0/4), καρκινωμάτων των ωοθηκών (0/4),
καρκινωμάτων του ήπατος (0/4), λεμφωμάτων (0/3), κολοορθικών αδενοκαρκινωμάτων (0/3), καρκινωμάτων του μαστού (0/2), όγκων
του εγκεφάλου (0/2), ακανθοκυτταρικών καρκινωμάτων του οισοφάγου (0/2), ακανθοκυτταρικών καρκινωμάτων του λάρυγγα (0/2),
μεταστατικών καρκινωμάτων αγνώστου προέλευσης (0/2), γαστρικών αδενοκαρκινωμάτων (0/2), παγκρεατικών αδενοκαρκινωμάτων
(0/2), αδενοκαρκινωμάτων του προστάτη (0/2), νεφροκυτταρικών καρκινωμάτων (0/2) και ακανθοκυτταρικών καρκινωμάτων του
τραχήλου (0/2). (Συνολικός αριθμός μη φυσιολογικών ιστών που αξιολογήθηκαν = 126).
Το NCL-L-HMB45 συνιστάται για χρήση ως μέρος μιας σειράς αντισωμάτων για τη διάγνωση των μελανωμάτων.
Γενικοί Περιορισμοί Η ανοσοϊστοχημεία είναι μια διαγνωστική διεργασία πολλαπλών βημάτων, η οποία αποτελείται από ειδικευμένη
εκπαίδευση στην επιλογή των κατάλληλων αντιδραστηρίων, επιλογή ιστού, μονιμοποίηση και επεξεργασία, προετοιμασία της πλάκας
IHC και ερμηνεία των αποτελεσμάτων της χρώσης.
Η χρώση του ιστού εξαρτάται από το χειρισμό και την επεξεργασία του ιστού πριν από τη χρώση. Τυχόν εσφαλμένη μονιμοποίηση,
κατάψυξη, απόψυξη, πλύση, στέγνωμα, θέρμανση, τομή ή μόλυνση με άλλους ιστούς ή υγρά ενδέχεται να παράγει μορφώματα,
παγίδευση αντισώματος ή ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα. Τυχόν ασυνεπή αποτελέσματα ενδέχεται να οφείλονται σε παραλλαγές των
μεθόδων μονιμοποίησης και εγκλεισμού ή σε εγγενείς ανωμαλίες εντός του ιστού. 4
Τυχόν υπερβολική ή ατελής αντίχρωση ενδέχεται να διακυβεύσει τη σωστή ερμηνεία των αποτελεσμάτων.
Η κλινική ερμηνεία οποιασδήποτε χρώσης ή της απουσίας της θα πρέπει να συμπληρώνεται με μορφολογικές μελέτες που
χρησιμοποιούν σωστούς μάρτυρες και θα πρέπει να αξιολογείται στα πλαίσια του κλινικού ιστορικού του ασθενούς και άλλων
διαγνωστικών εξετάσεων από ειδικευμένο παθολογοανατόμο.
HMB45-L-CE
Page 24