campañas diva-artabria i (2002 y 2003) - Universidade de Santiago ...

3. Metodología
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orientaron correctamente las muestras y para que se completase la polimerización de
la araldita, se dejaron en una estufa a 60º como mínimo durante una noche. Nunca se
excedieron las 24 horas dentro de la estufa para evitar que la resina se endureciera en
exceso volviéndose quebradiza, lo que dificulta el pulido del bloque y la obtención de
cortes.
Tallado de los bloques. Debido al pequeño tamaño de los bloques, para
poder manipularlos con facilidad se fijaron al cabezal del microtomo. El tallado de
los bloques se realizó con una cuchilla de microtomo, siempre trabajando bajo una
lupa binocular, desbastando los laterales del molde hasta obtener una pirámide
cuadrangular truncada adecuada al tamaño de los especímenes (Figura 8B-C); para
facilitar la formación de tiras rectas, se precisa que las caras superior e inferior del
bloque sean totalmente paralelas. Después, con ayuda de una pipeta Pasteur, se
aplicaron unas gotas de pegamento Pattex compacto (Henkel, Dusseldorf, Alemania),
diluido en xilol, en la cara inferior del molde (cara de corte) y se dejo secar al aire
durante 5 minutos. Con la aplicación de las gotas de pegamento se consiguió que los
cortes consecutivos quedasen unidos formando tiras.
Preparación de las cuchillas. Se utilizaron cuchillas de vidrio histológico de 6
mm, aunque para esta técnica también se pueden emplear cuchillas de diamante; las
cuchillas de diamante generan cortes histológicos más limpios y facilitan el trabajo al
evitar el cambio de las cuchillas durante el proceso de corte. Las cuchillas de vidrio se
fijaron a un recipiente de PVC de un tamaño superior a un portaobjetos, sirviendo de
baño donde se acumularon las tiras de cortes (Figura 8E).
Para asegurar que la unión entre la cuchilla y el baño de PVC fuese
perfectamente estanca, la zona se selló con un poco de cera dental derretida. Una vez
acoplado el conjunto al ultramicrotomo se relleno el baño con agua destilada hasta
que el extremo superior de la cuchilla quedó humedecido.
Obtención de los cortes. En primer lugar se orientaron los bloques en el
ultramicrotomo, colocando la cara con pegamento hacia abajo (en el sentido del
corte). Se realizaron cortes semifinos de 2 µm de grosor y una vez obtenido el
número de tiras deseado, se introdujo un portaobjetos por la zona distal del baño.
Con la ayuda de un pincel, se colocaron las tiras sobre el portaobjetos, siempre
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