campañas diva-artabria i (2002 y 2003) - Universidade de Santiago ...

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3. Metodología _______________________________________________________________________________ montaje líquido miscible en hidrocarburos bencénicos como el xilol. Antes de montar las preparaciones, primero se deshidrataron con un pase en etanol absoluto y después se sumergieron en un baño de xilol. Finalmente se añadieron unas gotas de la resina, se colocó el cubreobjetos y se dejaron secar al menos durante 24 horas. 3.5.4. CORTES SEMIFINOS La técnica de cortes semifinos permite obtener cortes histológicos de 0,5 a 2 µm de grosor. Con las técnicas tradicionales de cortes semifinos se obtienen cortes independientes, pero en este trabajo se utilizó un método que permite conseguir tiras de cortes (BLUMER et al., 2002), requisito indispensable para poder estudiar y reconstruir la anatomía interna de los solenogastros. Las muestras se incluyeron en araldita, una resina epoxi sintética que polimeriza generando bloques duros de los que se pueden obtener cortes más delgados que con la parafina tradicional y que aunque tiene menor velocidad de infiltración que otras resinas, proporciona una buena conservación de la estructura celular y de los cortes. Aclarado. Para eliminar el etanol se utilizó el óxido de propileno (CH 3CHCH 2O), un disolvente orgánico que además favorece la infiltración de la resina. Las muestras se sumergieron en una solución 1:1 de etanol absoluto y óxido de propileno durante 20 minutos y después se pasaron a una solución de óxido de propileno durante 1 hora, renovándola al menos tres veces. Inclusión y preparación de los bloques. Las muestras se pasaron a una mezcla 1:1 de óxido de propileno y araldita en un recipiente cerrado durante 2 horas a temperatura ambiente. Después se abrió ligeramente la tapa y se dejaron toda la noche para que se completase la infiltración de la resina. Para la preparación de los bloques se emplearon moldes de plástico de ultramicrotomía en los que se pueden obtener hasta un total de 15 pequeños bloques con forma de un paralelepípedo (Figura 8A). Los moldes se embebieron con resina nueva y se colocaron las muestras cerca del extremo anterior. Seguidamente, se pasaron a una cámara de presión donde se sometieron a cuatro ciclos de 200 bares repartidos en 1 hora. Después se 51
Solenogastros del NW de Galicia _______________________________________________________________________________ Figura 8. A. Molde para bloques de ultramicrotomía. B-C. Pulido del bloque de araldita con cuchilla de microtomo. D. Aplicación de pegamento sobre la cara inferior del bloque en el sentido del corte. E. Ultramicrotomo con baño acoplado para el depósito de tiras de cortes histológicos. 52
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MOLUSCOS SOLENOGASTROS DE LA PLATAF
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Esta Memoria ser ha podido realizar
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A Chonny y Luis
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Agradecimientos En primer lugar qui
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