campañas diva-artabria i (2002 y 2003) - Universidade de Santiago ...

Solenogastros del NW de Galicia
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62ºC, se sumergieron las muestras en tres baños consecutivos de 1 hora en parafina
mantenida líquida (56-58ºC de punto de fusión).
A continuación, las muestras se pasaron a un molde plástico con parafina
limpia, se orientaron correctamente y una vez solidificada la parafina (10 a 15
minutos en frigorífico doméstico) se tallaron los bloques con un bisturí hasta obtener
una pirámide cuadrangular truncada. Los bloques tallados se unieron a un taco de
madera de un tamaño adecuado a la pinza del micrótomo.
Obtención de los cortes. Antes de proceder a seccionar los especímenes, se
limpiaron los portaobjetos, primero con un poco jabón y agua destilada, después con
etanol y finalmente con un baño en agua destilada. Se numeraron los portaobjetos y
para favorecer la adherencia de los cortes al portaobjetos, se añadieron unas gotas de
cola de carpintero diluida en 10 ml de agua destilada.
Las muestras se cortaron con un microtomo de rotación, tipo Minot,
obteniendo tiras de cortes transversales de 5 µm de grosor. Las tiras de cortes se
pasaron a los portaobjetos con ayuda de un pincel y se situaron sobre una placa
calefactora a 45ºC para que las tiras de cortes se estirasen correctamente.
Posteriormente, se secaron en una estufa a 40ºC durante 24 horas.
Desparafinado y rehidratación. Se eliminó la parafina pasando los
portaobjetos por dos baños consecutivos de 15 minutos en xilol y a continuación se
rehidrataron con baños de 1 minuto en etanol de gradación decreciente (100º y 90º) y
un baño final en agua destilada.
Tinción de los cortes y montaje de las preparaciones. Los cortes
obtenidos se tiñeron con el tricrómico de Mallory, una tinción que colorea los
núcleos de rojo a rosado, el citoplasma y el tejido conjuntivo de naranja y el colágeno
y el tejido conectivo de azul (LILLIE, 1977; LOCQUIN & LANGERON, 1985). En primer
lugar se sumergieron los portaobjetos en fucsina ácida (solución en agua destilada al
0,5%) durante 15 minutos; a continuación se orearon durante 25 minutos y se
colorearon durante 20 minutos en la solución acuosa de azul de anilina (0,5%),
naranja G (2%) y ácido fosfotúngstico (1%). Para eliminar el exceso de colorante, se
dio un pase por agua destilada seguido de otro en etanol de 96º (GIL-MANSILLA et al.,
2008). Las preparaciones se montaron con resina sintética Eukitt, un medio de
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