Mycotrim® RS - Irvine Scientific
Mycotrim® RS - Irvine Scientific
Mycotrim® RS - Irvine Scientific
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Mycotrim ® <strong>RS</strong><br />
Triphasic Culture System<br />
Catalog No. D303-012<br />
For use in detecting Mycoplasma pneumoniae in respiratory<br />
specimens. For in vitro diagnostic use.<br />
Zum Gebrauch in der Erkennung von Mycoplasma pneumoniae<br />
in respiratorischen Probekörpern. Zum Gebrauch in in vitro<br />
diagnostischen Verfahren.<br />
Para la detección de Mycoplasma pneumoniae en muestras del<br />
aparato respiratorio. Para uso diagnostico in vitro.<br />
Para la detección de Mycoplasma pneumoniae genito-urinarias. Para<br />
uso diagnostico in-vitro.<br />
Pour détecter Mycoplasma pneumoniae dans les prélèvements<br />
respiratoires. Pour le diagnostic in vitro.<br />
Para a utilização na detecção de Mycoplasma pneumoniae em<br />
amostras respiratórias. Para utilização em diagnóstico in vitro.
INTENDED USE<br />
Mycotrim ® <strong>RS</strong> is a complete culture system for Mycoplasma pneumoniae<br />
(M. pneumoniae) in human respiratory specimens.<br />
Mycoplasma pneumoniae is a common cause of respiratory infections.<br />
M. pneumoniae is the cause of primary atypical pneumonia,<br />
often called “walking pneumonia”. It is associated with chronic<br />
bronchitis and is thought to account for more than 20% of all<br />
pneumonia cases.<br />
Mycotrim <strong>RS</strong> is designed to selectively isolate and identify M.<br />
pneumoniae in human respiratory specimens.<br />
PRODUCT DESCRIPTION<br />
Each Mycotrim <strong>RS</strong> flask contains agar and broth specially formulated<br />
to support the growth of M. pneumoniae. When the flask is<br />
inoculated and incubated with the agar side up, the agar and broth<br />
are separated by humid air. This creates optimal conditions for the<br />
growth of M. pneumoniae on the agar surface. Antimicrobial discs<br />
are added before inoculation to prevent the growth of microorganisms<br />
other than mycoplasma.<br />
Positive cultures of M. pneumoniae lower the pH and cause a<br />
color change in the media. In specimens with high titers, this<br />
color change may occur in as little as 72 to 96 hours, while in<br />
specimens with low titers it may take 7 to 10 days. Flasks showing<br />
no color change after 72 hours are reinoculated with the enrichment<br />
broth in the flask. Once the media changes color, the flask is<br />
examined microscopically (low power) for M. pneumoniae colonies<br />
on the agar surface.<br />
STORAGE AND STABILITY<br />
Store all the Mycotrim <strong>RS</strong> components (fl asks, antimicrobial discs and<br />
Dienes stain) in the original box at 2° C to 8° C.<br />
Do not freeze.<br />
English 1/10
Mycotrim <strong>RS</strong> kit components should be used before the expiration<br />
date printed on the box.<br />
MATERIALS PROVIDED<br />
Component Qty per 12 Flask Kit<br />
Agar/Broth Flask 12<br />
Cefoperazone Sodium/Nystatin Discs 2 dishes (15 discs/dish)<br />
Thallous acetate 2 dishes (15 discs/dish)<br />
Dienes Stain 1 Vial (2.5 mL/vial)<br />
Antimicrobial Discs<br />
A single white CN antimicrobial disc yields an approximate<br />
concentration in agar and broth of:<br />
Cefoperazone sodium 100.0 μg/mL<br />
Nystatin 50.0 U/mL<br />
Each pink TA antimicrobial disc yields approximately:<br />
Thallous acetate 250.0 μg/mL<br />
Dienes stain - contains methylene blue and azure II.<br />
MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED<br />
Sterile pipets, or<br />
Sterile swabs, or<br />
Sterile bacteriological loop<br />
Sterile forceps<br />
Conventional microscope with 10x eyepieces and 10x objective or<br />
dissecting microscope with 70x to 100x magnification.<br />
Incubator capable of maintaining temperatures of 34° C to 37° C.<br />
PRECAUTIONS AND WARNINGS<br />
Do not use if the Mycotrim <strong>RS</strong> flask is cracked or if the media<br />
shows signs of contamination. The broth should be clear and<br />
reddish-colored with no signs of cloudiness.<br />
English 2/10
M. pneumoniae is killed by temperatures above 40° C (104°F)<br />
and is physiologically compromised at temperatures above 38°C<br />
(100° F).<br />
Antimicrobial effectiveness is compromised if the specimen is<br />
inoculated either before complete dispersion of the antimicrobials<br />
or after the discs have been in the Mycotrim <strong>RS</strong> flask for more<br />
than 24 hours.<br />
M. pneumoniae is a human pathogen. Proper safety precautions<br />
for handling and discarding infectious biological materials should<br />
be followed at all times.<br />
CAUTION: Federal (U.S.) law restricts this device to sale by or on<br />
the order of a physician.<br />
SPECIMEM COLLECTION AND HANDLING<br />
Specimens should be inoculated in Mycotrim <strong>RS</strong> as soon as possible<br />
after collection. If specimens cannot be inoculated promptly<br />
after collection, they are best maintained in the Mycotrans ® transport<br />
system (available from <strong>Irvine</strong> <strong>Scientific</strong>) at 15° C to 30° C.<br />
Type of<br />
Specimen Collection, Handling and Inoculation<br />
Throat Swab throat according to established<br />
practice. Place the swab in Mycotrans<br />
transport media until it can be inoculated<br />
into Mycotrim <strong>RS</strong>.<br />
Sputum Dip a sterile swab in the specimen and use<br />
as inoculum. (Place swab in Mycotrans for<br />
transport).<br />
Bronchial washings Use 1 mL of washings as inoculum.<br />
Pneumocentesis fluid Use 1 mL of fluid as inoculum.<br />
Tissue from biopsy Aseptically grind a small piece of tissue.<br />
Pipet up to 1 mL of ground tissue and<br />
washings as inoculum.<br />
English 3/10
DIRECTIONS FOR USE<br />
1. Preparation of Flask<br />
A. Loosen the flask cap 1/4 to 1/2 turn and warm the flask<br />
in the incubator (34° C to 37° C) for approximately five<br />
minutes.<br />
B. Aseptically add antimicrobial discs according to specimen<br />
type:<br />
Specimen Source Antimicrobial Discs<br />
Throat 1 CN, 1 TA<br />
Bronchial washings 1 CN, 1 TA<br />
Pneumocentesis fluid 1 CN, 1 TA<br />
Tissue from biopsy 1 CN, 1 TA<br />
Sputum 2 CN, 2 TA<br />
C. Recap the flask tightly and place it agar side down, as<br />
shown below in Figure 1, for a minimum of 30 minutes.<br />
BROTH<br />
AGAR<br />
Figure 1<br />
2. Inoculation<br />
Use aseptic technique.<br />
A. For liquid specimens such as bronchial washings, pneumocentesis<br />
fluid and washings of tissue biopsy:<br />
1. Hold the flask at about a 45° angle as shown in Figure 2<br />
and allow approximately 1.0 mL of specimen to slow flow<br />
down the center of the agar.<br />
2. As the pipet is withdrawn from the flask, press it firmly into<br />
the agar to make a deep cut in the area inoculated.<br />
English 4/10
3. Recap the flask tightly.<br />
English 5/10<br />
Figure 2<br />
B. For specimens in Mycotrans:<br />
1. Remove approximately 1.0 mL of the broth from the area<br />
near the agar/broth interface.<br />
NOTE: It is not necessary to remove the swab used to<br />
inoculate Mycotrans.<br />
2. Repeat steps 1 through 3 for liquid specimens as<br />
described in section A (above).<br />
C. For specimens on swabs such as throat or sputum specimens:<br />
1. Hold the flask at about a 45° angle (as shown in Figure 2)<br />
and streak the central area of the agar from bottom to top.<br />
2. Rinse the swab in the broth and press it against the wall<br />
of the flask to expel the specimen from the swab into the<br />
broth.
3. As the swab is withdrawn from the flask, carefully press it<br />
into the agar to make a deep cut in the center of the inoculated<br />
area. The swab will not make a clean cut; however,<br />
a jagged cut will not adversely affect the performance of<br />
Mycotrim <strong>RS</strong>.<br />
4. Recap the flask tightly.<br />
3. Incubation<br />
Incubate the flask agar side up at 34° C to 37° C for 72 hours<br />
or until the color of the media changes. Check the flask for a<br />
color change every 24 hours (see 4. Observation, below).<br />
Temperatures above 38° C will inhibit M. pneumoniae.<br />
When removing flasks from the incubator for examination,<br />
care should be taken to avoid washing growth off the agar by<br />
splashing the broth over the agar.<br />
4. Observation<br />
A. Color change<br />
The first sign of M. pneumoniae in Mycotrim <strong>RS</strong> is a color<br />
change in the media which may occur within 72 to 96 hours<br />
after inoculation. Growth of M. pneumoniae will cause the<br />
media to change from red to yellow-orange.<br />
Unlike bacteria and fungi, M. pneumoniae does not cause<br />
turbidity in the broth, even at maximum titers. Gross turbidity<br />
of visible colonies on the agar indicate bacterial or fungal<br />
overgrowth, making the color change unreliable and possibly<br />
hiding mycoplasma colonies. If no color change occurs<br />
within 72 hours, reinoculate the agar as indicated in step 5.<br />
Reinoculation, below.<br />
English 6/10
B. Colony appearance<br />
Do not use an inverted microscope.<br />
When a color change occurs within the first 72 hours, colonies<br />
are usually visible microscopically. A conventional light<br />
microscope with a low power (10x) objective lens and 10x<br />
eyepiece, or a good quality dissecting microscope with 70x to<br />
100x magnifying capability is adequate. It will be necessary<br />
to adjust the stage or nosepiece of the microscope to accommodate<br />
the depth of the Mycotrim <strong>RS</strong> flask.<br />
In specimens with very high or very low titers of ureaplasma,<br />
it may be possible to observe a color change and be unable to<br />
see microscopic colonies.<br />
To examine the flask for M. pneumoniae colonies:<br />
1. Place the flask, agar side up, on the microscope stage as<br />
indicated in Figure 3. Focus through the flask and agar<br />
to the inside surface of the agar. The cut made during<br />
inoculation marks the area inoculated and aids in focusing.<br />
2. Scan the length of the flask along both sides of the cut for<br />
colonies.<br />
AGAR<br />
BROTH<br />
10x<br />
Figure 3<br />
3. Examine suspected colonies by focusing up and down<br />
on them . Colonies may grow on the agar surface or<br />
penetrate below the agar surface. Colonies growing in the<br />
agar may not appear in sharp focus.<br />
English 7/10
M. pneumoniae colony appearance:<br />
M. pneumoniae colonies are 60 to 200 microns in diameter,<br />
about 1/10 as large as a small bacterial colony, 1 to 5 times<br />
larger than a single buccal epithelial cell, and 10 to 15 times<br />
larger than a single white blood cell. Mycoplasma colonies<br />
have a characteristic “fried egg” or “sand patty” (grainy)<br />
appearance. Epithelial cells are clearly distinguished from<br />
mycoplasma colonies by their sharp, angular margins and<br />
clear cytoplasm (often folded over upon itself).<br />
5. Reinoculation<br />
Do not open the Mycotrim <strong>RS</strong> flask.<br />
If no color change occurs after 72 hours, reinoculate the agar<br />
by tilting the flask so that the broth contacts 1/3 to 1/2 of<br />
the agar surface, as shown in Figure 4. After reinoculation,<br />
incubate the flask at 34° C to 37° C with the agar side up.<br />
Continue to examine the flask daily for a color change. When<br />
the color change is observed, look for typical microscopic<br />
colonies (see B. Colony Appearance, above).<br />
English 8/10<br />
Figure 4
6. Optional Use of Dienes Stain<br />
Dienes stain should only be used when the flask will no longer<br />
be incubated. The Dienes stain kills M. pneumoniae. Once<br />
stained, a flask may be stored for several months in the<br />
refrigerator.<br />
To apply Dienes stain:<br />
a. Open the flask and remove the broth with a pipet. Dispose<br />
of the broth in a suitable infectious waste container.<br />
b. Taking care not to wash the growth off of the surface of the<br />
agar, gently apply two or three drops of stain to the agar<br />
surface. Recap the flask.<br />
c. Let the flask stand agar side down for 30 minutes to allow<br />
the stain to diffuse into the agar.<br />
d. Examine the flask microscopically for colonies. M. pneumoniae<br />
will retain the stain while bacteria will decolorize<br />
and not appear stained.<br />
INTERPRETATION OF RESULTS<br />
A positive result is indicated when the color changes (in the absence<br />
of gross contamination) from red to yellow-orange and colonies are<br />
observed on the agar.<br />
Unlike bacteria and fungi, M. pneumoniae does not cause turbidity<br />
in the broth, even at maximum titers. Gross turbidity or visible<br />
colonies on the agar indicate bacterial or fungal overgrowth,<br />
making the color change unreliable and possibly hiding M.<br />
pneumoniae colonies.<br />
A negative result is reported if there is no color change within 10<br />
days after reinoculation (13 days total incubation).<br />
English 9/10
LIMITATIONS<br />
The presence of very large numbers of organisms other than M.<br />
pneumoniae may cause overgrowth even when antimicrobic discs<br />
are used. Turbid broth or colonies visible to the naked eye indicate<br />
overgrowth. Bacteria and fungi may cause a color change in the<br />
absence of M. pneumoniae. Overgrowth may hide the presence of<br />
M. pneumoniae colonies.<br />
Antimicrobial effectiveness is compromised when the specimen<br />
is inoculated before complete dispersion of the antimicrobials or<br />
when the disc has been in the Mycotrim <strong>RS</strong> flask for more than 24<br />
hours before it is inoculated.<br />
QUALITY CONTROL<br />
Each fl ask of Mycotrim <strong>RS</strong> is incubated and inspected for<br />
contamination. Each lot of Mycotrim <strong>RS</strong> is tested for its ability to<br />
maintain M. pneumoniae (ATCC #15531) and Acholeplasma laidlawii<br />
(ATCC #23206). Growth of these organisms must be demonstrated<br />
in both broth and agar media. The inhibitory activity of antimicrobial<br />
discs is tested by inoculating fl asks containing antimicrobial discs<br />
with Staphylococcus aureus (ATCC #25923), Escherichia coli (ATCC<br />
#25922), and Candida albicans (ATCC #10231). Inhibition of all three<br />
organisms must be shown after incubation for 24 hours at 34° C to 37° C.<br />
English 10/10
ANWENDUNG<br />
Mycotrim ® <strong>RS</strong> ist ein vollständiges Kultursystem zum Nachweis<br />
von Mycoplasma pneumoniae (M. pneumoniae) in menschlichen<br />
respiratorischen Probekörpern.<br />
Mycoplasma pneumoniae ist ein häufiger Grund für respiratorische<br />
Infektionen. M. pneumoniae ist der Grund für primär-atypische<br />
Lungenentzündung (oft “walking pneumonia” genannt). M.<br />
pneumoniae steht in Zusammenhang mit chronischer Bronchitis<br />
und ist angeblich der Grund für mehr als 20% von allen Fällen von<br />
Lungenentzündung.<br />
Mycotrim <strong>RS</strong> ist entwickelt worden, M. pneumoniae in menschlichen<br />
respiratorischen Probekörpern selektiv zu isolieren und zu<br />
erkennen.<br />
PRODUKTBESCHREIBUNG<br />
Jede Mycotrim <strong>RS</strong> Flasche beinhaltet Agar und Brühe, die spezifisch<br />
formuliert worden sind, das Wachsen von M. pneumoniae zu<br />
stützen. Wenn die Flasche mit der Agar-Seite nach oben beimpft<br />
und bebrütet wird, werden das Agar und die Brühe durch feuchte<br />
Luft getrennt. Das ergibt optimalen Zustand für das Wachsen (auf<br />
dem Agar) von M. pneumoniae. Antimikrobische Scheiben werden<br />
vor der Beimpfung hinzugefügt, um das Wachsen von Mikroorganismen<br />
(ausser Mycoplasma) zu verhindern.<br />
Positive Kulturen von M. pneumoniae reduzieren den pH-Wert<br />
und ergeben einen Farbwechsel im Medium. In Probekörpern mit<br />
hohen Titern kann dieser Farbwechsel so bald wie in von 72 bis<br />
zu 96 Stunden stattfinden. In Probekörpern mit niedrigen Titern<br />
kann dieses Verfahren von 7 bis 10 Tagen dauern. Flaschen, die<br />
nach 72 Stunden keinen Farbwechsel zeigen, werden mit der<br />
Anreicherungsbrühe in der Flasche wieder beimpft. So bald wie<br />
der Farbwechsel stattfindet, dann wird die Flasche mikroskopisch<br />
(niedrige Kraft) für Kolonien von M. pneumoniae auf dem Agar<br />
untersucht.<br />
Deutsch 1/11
LAGERUNG UND STABILITÄT<br />
Alle Mycotrim <strong>RS</strong> Komponenten ( Flasche, antimikrobielle<br />
Plättchen und Dienes-Färbung) sollten in der Originalverpackung<br />
bei 2-8° C gelagert werden.<br />
Bitte nicht einfrieren!<br />
Mycotrim <strong>RS</strong> Kit Komponenten sollten vor dem auf der Verpackung<br />
angegebenen Verfallsdatum verwendet werden.<br />
MATERIALIEN BEREITGESTELLT<br />
Installationssatz mit<br />
Komponenten 12-Patienten<br />
Agar/Bouillon Flasche 12<br />
Cefoperazone Natrium/<br />
Thallus Acetat 2 Teller (15 Disketten/Teller)<br />
Dienes-Färbung 1 Flasche (2.5 mL/Phiolen)<br />
Eine einzelne Schale ergibt eine weisse CN (Cefoperazone<br />
Natrium/Nystatin) ungefähre Konzentration in Agar und Brühe von:<br />
Cefoperazone Natrium 100.0 μg/mL<br />
Nystatin 50.0 U/mL<br />
Jedes rosa TA(Thallus Acetat) antimikrobische Schalen beinhalten<br />
ungefähr.<br />
Thallus Acetat 250.0 μg/mL<br />
Dienes-Färbung - enthält Methylenblau und Azur II.<br />
ERFORDERLICHE ABER NICHT IM KIT ENTHALTENE KOMPONENTEN<br />
Sterile Pipetten, oder<br />
Sterile Tupfer, oder<br />
Sterile Ösen<br />
Sterile Pinzetten<br />
Mikroskop mit 70 bis 100 facher Vergrösserung.<br />
Inkubator für Temperaturen von 34° C bis 37° C.<br />
Deutsch 2/11
VO<strong>RS</strong>ICHTSMASSNAHMEN UND WARNHINWEISE<br />
Das Produkt nicht gebrauchen, falls die Mycotrim <strong>RS</strong> Flasche<br />
gesprungen ist oder falls das Medium Anzeichen von Kontaminierung<br />
zeigt. Die Brühe soll klar und rot sein und soll keine<br />
Anzeichen von Trübheit zeigen.<br />
M. pneumoniae wird von Temperaturen über 40° C abgetötet und<br />
durch Temperaturen über 38° C physiologisch beeinträchtigt.<br />
Die antimikrobielle Wirkung wird beeinträchtigt, falls die Proben<br />
vor der vollständigen Dispersion des Antimikrobiums inokuliert<br />
werden oder falls die Plättchen länger als 24 h vorher in der<br />
Mycotrim <strong>RS</strong> Flasche waren.<br />
M. pneumoniae ist ein humane Pathogene. Professionelle Sicherheitsvorschriften<br />
zur Handhabung und Entsorgung von infektiösem<br />
biologischen Material müssen jederzeit befolgt werden.<br />
VO<strong>RS</strong>ICHT: Das Bundesgesetz (U.S.) schränkt dieses Medizinprodukt<br />
auf den Verkauf oder auf den Auftrag eines Arztes ein.<br />
PROBENSAMMLUNG UND HANDHABUNG<br />
Die Proben sollten möglichst unmittelbar nach der Entnahme<br />
inokuliert werden. Für längere Aufbewahrung wird empfohlen, sie<br />
im Mycotrans ® Transport System (erhältlich von <strong>Irvine</strong> <strong>Scientific</strong>)<br />
bei 15° C bis 30° C aufzubewahren.<br />
Probe Entnahme, Aufbewahrung und Inokulation<br />
Hals Den Hals nach dem feststehenden Verfahren<br />
betupfen. Den Tupfer in Mycotrim <strong>RS</strong> Transportnährboden<br />
lassen, bis er in Mycotrim <strong>RS</strong> beimpft<br />
werden kann.<br />
Auswurf Einen sterilen Tupfer in den Probekörper tauchen<br />
und als Inoculum gebrauchen. (Den Tupfer zum<br />
Transport in Mycotrans stellen.)<br />
Deutsch 3/11
Bronchiale<br />
Waschungen 1 ml der Waschungen als Inoculum gebrauchen.<br />
Pneumozentese<br />
Flüssigkeit 1 ml der Flüssigkeit als Inoculum gebrauchen.<br />
Biopsiegewebe Ein kleines Stück Gewebe aseptisch mahlen. Bis<br />
zu 1 ml gemahlenes Gewebe und Waschungen<br />
als Inoculum pipettieren.<br />
GEBRAUCHSANLEITUNG<br />
1. Vorbereitung der Flasche<br />
A. Den Flaschenverschluss 1/4 bis 1/2 Drehung öffnen und ca. 5<br />
Minuten in einem Inkubator bei 34°C bis 37°C erwärmen.<br />
B. Antimikrobische Scheiben zufolge die Art von Probekörper<br />
aseptisch hinzufügen:<br />
Probekörper Herkunft Antimikrobische Scheiben<br />
Hals 1 CN, 1 TA<br />
Bronchiale Waschungen 1 CN, 1 TA<br />
Pneumozentese Flüssigkeit 1 CN, 1 TA<br />
Gewebe von Biopsie 1 CN, 1 TA<br />
Auswurf 2 CN, 2 TA<br />
C. Die Flasche fest wieder bedecken und mit der Agar-Seite nach<br />
unten (siehe Figur 1) für mindestens 30 Minuten stehen lassen.<br />
BROTH<br />
AGAR<br />
Deutsch 4/11<br />
Bild 1
2. Aseptische Inokulation<br />
A. Für fl üssige Probekörper (z.B. bronchiale Waschungen, Pneumozentese<br />
Flüssigkeit, und Waschungen von Gewebebiopsie):<br />
1. Flasche ca 45° neigen, siehe Bild 2, and etwa 1 mL der<br />
Probe langsam bis zur Agarmitte fliessen lassen.<br />
2. Anschliessend die Pipette fest in den Agar pressen und<br />
einen tiefen Schnitt in die inokulierte Fläche machen.<br />
3. Flasche anschliessend fest zuschrauben.<br />
B. Für Proben in Mycotrans:<br />
1. Ca. 1 mL Bouillon aus der Grenzfläche Agar/Bouillon<br />
entnehmen<br />
2. Schritt 1-3 für flüssige Proben wiederholen. ( siehe<br />
Abschnitt A).<br />
Deutsch 5/11<br />
Bild 2
3. Proben auf Tupfern sollten in Mycotrans versandt werden und<br />
dann, wie in Abschnitt C beschrieben, verarbeitet werden.<br />
C. Für Probekörper auf Tupfern (z.B. Hals- oder Auswurfsprobekörper):<br />
1. Flasche ca. 45° neigen ( siehe Bild 2) und den zentralen<br />
Bereich des Agars von unten nach oben abstreichen.<br />
2. Den Tupfer in die Bouillon tauchen und anschliessend fest<br />
gegen die Innenwand pressen, damit die Probe in das<br />
Medium läuft.<br />
3. Danach den Tupfer fest in das Zentrum des inokulierten<br />
Agars pressen. Der Tupfer hinterlässt keinen scharfen<br />
Schnitt aber auch ein unscharfer Schnitt beeinträchtigt das<br />
Ergebnis des Mycotrim <strong>RS</strong> Tests nicht.<br />
4. Flasche fest zuschrauben.<br />
3. Inkubation<br />
Die Flasche mit der Agarseite nach oben bei 34° C – 37°C für<br />
72 h oder bis zum Farbwechsel des Mediums inkubieren. Die<br />
Flasche alle 24 h auf Farbwechsel überprüfen (siehe Punkt<br />
4. Beobachtung).<br />
Temperaturen über 38° C inhibieren das Wachstum von M.<br />
pneumoniae.<br />
Bei Kontrolle des Farbwechsels die Flaschen vorsichtig aus<br />
dem Inkubator entnehmen, um zu vermeiden, dass gewachsene<br />
Kolonien durch die Bouillon vom Agar gespült werden.<br />
4. Beobachtung<br />
A. Farbwechsel<br />
Das erste Anzeichen von M. pneumoniae in Mycotrim <strong>RS</strong><br />
ist ein Farbwechsel im Medium. Dieser Farbwechsel kann<br />
Deutsch 6/11
zwischen 72 bis zu 96 Stunden nach der Beimpfung geschehen.<br />
Der Wuchs von M. pneumoniae wird einen Farbwechsel<br />
von rot zu gelb-orange bewirken.<br />
Im Gegensatz zu Bakterien und Pilzen, M. pneumoniae bewirkt<br />
keine Trübheit in der Brühe, sogar bei höchsten Titern. Trübheit<br />
oder sichtbare Kolonien sind Anzeichen von Pilzen- oder bakteriologische<br />
Überwuchung. Das macht den Farbwechsel unzuverlässig<br />
und kann Kolonien von Mycoplasma verstecken. Falls kein<br />
Farbwechsel innerhalb von 72 Stunden geschieht, das Agar wie in<br />
Schritt 5, Wiederbeimpfung (unten) wieder beimpfen.<br />
B. AUSSEHEN DER KOLONIEN<br />
Kein Inversionsmikroskop verwenden.<br />
Falls ein Farbwechsel innerhalb von den ersten 72 bis 96<br />
Stunden geschieht, sind Kolonien normalerweise mikroskopisch<br />
sichtbar. Ein konventionelles Lichtmikroskop mit<br />
einem Objektiv von niedriger Kraft (10x) und mit 10x Okularen,<br />
oder ein hochwertiges Seziermikroskop mit einem Vergrösserungsfaktor<br />
von 70x bis zu 100x ist passend. Es wirt nötig sein,<br />
das Mikroskop zu eichen, um die Tiefe von der Mycotrim <strong>RS</strong><br />
Flasche anzupassen.<br />
Überprüfung der Flasche auf M. pneumoniae Kolonien:<br />
1. Die Flasche, Agarseite nach oben, sieheBild 3, unter das<br />
Mikroskop legen. Die innere Oberfläche des Agars fokussieren.<br />
Der während der Inokulation gemachte Schnitt<br />
markiert den inokulierten Bereich.<br />
2. Beide Agarseiten entlang des Schnittes auf Kolonien<br />
absuchen.<br />
Deutsch 7/11
AGAR<br />
BROTH<br />
10x<br />
Bild 3<br />
3. Verdächtige Kolonien durch Fokussieren untersuchen. Die<br />
Kolonien können sowohl auf der Agaroberfläche wachsen<br />
als auch in den Agar hinein. Letztere können unter<br />
Umständen nicht scharf gesehen werden.<br />
Erscheinungsbild: M. pneumoniae Kolonie<br />
Kolonien von M. pneumoniae haben einen Durchmesser von<br />
zwischen 60 und 200 Mikrometern, ungefähr ein zehntel so<br />
gross wie eine Bakterienkolonie, von 1 bis zu 5 Mal grösser<br />
als eine einzelne bukalle Epithelzellen, und von 10 bis zu<br />
15 Mal grösser als ein einzelnes weisses Blutkörperchen.<br />
Mycoplasma Kolonien sehen wie ein “Spiegelei” aus. Epithelzellen<br />
werden von Mycoplasma Kolonien klar differenziert.<br />
Epithelzellen haben scharfe, winklige Begrenzungen und<br />
klares Zytoplasma (oft über sich gefaltet).<br />
5. Reinokulation<br />
Die Mycotrim <strong>RS</strong> Flasche darf nicht geöffnet werden.<br />
Falls nach 72 h kein Farbwechsel sichtbar ist, wird die Flasche so<br />
gedreht, dass 1/3 bis 1/2 der Agaroberfl äche durch die Bouillon<br />
benetzt werden ( siehe Bild 4). Nach der Inokulation wird die<br />
Flasche mit der Agarseite nach oben erneut bei 34°C bis 37°C<br />
inkubiert und täglich auf einen Farbwechsel überprüft. Nach<br />
Farbwechsel werden typische Kolonien unter dem Mikroskop<br />
begutachtet (siehe Erscheinungsbild, oben).<br />
Deutsch 8/11
Bild 4<br />
6. Optionale Anwendung der Dienes-Färbung<br />
Die Dienes-Färbung sollte nur angewendet werden, wenn<br />
die Flasche nicht mehr inkubiert werden soll, da die Dienes-<br />
Färbung tötet M. pneumoniae. Nach der Anfärbung kann die<br />
Flasche mehrere Monate im Kühlschrank aufbewahrt werden.<br />
Durchführung der Dienes-Färbung:<br />
a. Flasche öffnen und die Bouillon mit einer Pipette absaugen.<br />
Bouillon in einem geeigneten Behälter für infektiöse<br />
Abfälle entsorgen<br />
b. Vorsichtig, um die Kolonien nicht von der Agaroberfläche<br />
zu waschen, 2 bis 3 Tropfen Dienes-Färbung auf die<br />
Agaroberfläche applizieren und die Flasche wieder<br />
verschliessen.<br />
c. Die Flasche 30 min mit der Agarseite unten stehen lassen,<br />
damit die Farbe in den Agar diffundieren kann.<br />
Deutsch 9/11
d. Die Flasche unter dem Mikroskop auf Kolonien absuchen.<br />
M. pneumoniae und U. urealyticum bleiben gefärbt während<br />
Bakterien ungefärbt sichtbar sind.<br />
DEUTUNG VON RESULTATEN<br />
Ein positives Ergebnis wird angezeigt, falls die Farbe (im Fehlen<br />
von Kontaminierung) des Agars von rot zu gelb-orange wechselt.<br />
Im Gegensatz zu Bakterien und Pilzen, bewirkt M. pneumoniae<br />
keine Trübheit in der Brühe, sogar bei höchsten Titern. Trübheit<br />
oder sichtbare Kolonien auf der Oberfläche des Agars zeigen<br />
Pilzen- oder bakteriologische Überwuchung an. Das macht den<br />
Farbwechsel unzuverlässig und kann Kolonien von M. pneumoniae<br />
verstecken.<br />
Ein negatives Ergebnis wird angezeigt, falls es keinen Farbwechsel<br />
innerhalb von 10 Tagen nach der Wiederbeimpfung (Endzahl<br />
von Bebrütungszeit: 13 Tage) gibt.<br />
EINSCHRÄNKUNGEN<br />
In Gegenwart grosser Nummern von Organismen anders als M.<br />
Pneumonia kann Überwuchung geschehen, sogar wenn antimikrobische<br />
Scheiben gebraucht werden. Trübe Brühe oder mit blossem<br />
Auge sichtbare Kolonien zeigen Überwuchung an. Bakterien und<br />
Pilzen können einen Farbwechsel im Fehlen von M. pneumoniae<br />
bewirken. Überwuchung kann den Gegenwart von M. pneumoniae<br />
Kolonien verstecken.<br />
Antimikrobische Wirksamkeit wird beeinträchtigt, wenn der<br />
Probekörper vor der vollständigen Diffusion der antimikrobiellen<br />
Substanzen beimpft wird oder wenn die Scheibe in der Mycotrim<br />
<strong>RS</strong> Flasche für mehr als 24 Stunden vor der Beimpfung der<br />
Scheibe gewesen ist.<br />
Deutsch 10/11
QUALITÄTSKONTROLLE<br />
Jede Flasche von Mycotrim <strong>RS</strong> wird bebrütet und für Kontaminierung<br />
untersucht. Jedes Los von Mycotrim <strong>RS</strong> wird für Beibehaltefähigkeit<br />
von M. pneumoniae (ATCC #15531) und Acholeplasma<br />
Laidlawii (ATCC #23206) überprüft. Wuchs dieser Organismen<br />
muss beide in der Brühe und im Agar Medium angezeigt werden.<br />
Die wachstumhemmende Aktivität von antimikrobische Scheiben<br />
wird durch durch die Beimpfung von Flaschen überprüft, die<br />
antimikrobische Scheiben mit Staphylococcus aureus (ATCC<br />
#25923), Escherichia coli (ATCC #25922), und Candida Albicans<br />
(ATCC #10231). Hemmung von allen drei Organismen muss nach<br />
24 Stunden von Bebrütung bei von 34°C bis zu 37°C gezeigt<br />
werden.<br />
Deutsch 11/11
ISTRUZIONI D’USO<br />
Mycotrim ® <strong>RS</strong> è un sistema di coltura completo per Mycoplasma<br />
pneumoniae (M pneumoniae) in campioni respiratori umani.<br />
Mycoplasma pneumoniae è una causa comune di infezioni respiratorie.<br />
M. pneumoniae è la causa della polmonite atipica primaria,<br />
spesso chiamata “ polmonite ambulante”. Essa è associata alla<br />
bronchite cronica e si ritiene che conti per più del 20% di tutti i<br />
casi di polmonite.<br />
Mycotrim <strong>RS</strong> è disegnato per isolare selettivamente ed identifi care M.<br />
pneumoniae in campioni respiratori umani.<br />
DESCRIZIONE DEL PRODOTTO<br />
Ogni beuta di Mycotrim <strong>RS</strong> contiene agar e brodo specificamente<br />
formulato per sostenere la crescita di M. pneumoniae. Quando<br />
la beuta è inoculata ed incubata con il lato agar rivolto verso<br />
l’alto, l’agar ed il brodo sono separati da aria umida. Ciò crea<br />
le condizione ottimali per la crescita di M. pneumoniae sulla<br />
superficie dell’agar. Dischi antimicrobici vengono aggiunti prima<br />
dell’inoculazione per prevenire la crescita di altri microrganismi<br />
oltre che mycoplasma.<br />
Colture positive di M. pneumoniae abbassano il PH e causano un<br />
cambiamento di colore nel prodotto. In campioni a titoli alti, questo<br />
cambiamento di colore può verifi carsi in sole 72 - 96 ore, mentre in<br />
campioni a titoli bassi il cambiamento di colore può impiegare da<br />
7 a 10 giorni. Le beute che non presentano alcun cambiamento di<br />
colore dopo 72 ore vengono reinoculate con il brodo arricchito nella<br />
beuta. Quando il prodotto cambia colore, la beuta viene esaminata<br />
microscopicamente (a bassa potenza) per rilevare colonie di M.<br />
pneumoniae sulla superfi cie dell’agar.<br />
IMMAGAZZINAGGIO E STABILITÀ<br />
Conservare tutti i componenti di Mycotrim <strong>RS</strong> (beute, dischi<br />
antimicrobici e Diene coloranti) nella scatola originale ed a<br />
temperature da 2°C a 8°C.<br />
Italiano 1/11
Non congelare.<br />
I kit di Mycotrim <strong>RS</strong> devono essere usati prima della data di scadenza<br />
riportata sulla scatola.<br />
MATERIALI FORNITI<br />
Componente Corredo dei<br />
12 pazienti<br />
Agar/Beute del Brodo 12<br />
Sodio di Cefoperazone/<br />
Dischi della Nystatin 2 Piatti (15 discs/piatto)<br />
Acetato di tallio 2 Piatti (15 discs/piatto)<br />
Diene Colorante 1 Fiala (2.5 mL/fiala)<br />
Dischi Antimicrobici<br />
Un singolo antimicrobici CN bianchi disco rende una concentrazione<br />
di agar e brodo prossima a:<br />
Cefoperazone 100.0 μg/mL<br />
Nystatin 50.0 U/mL<br />
Ciascuno dischi antimicrobici TA rosa approssimativamente.<br />
Acetato di tallio 250.0 μg/mL<br />
Diene colorante - contiene blu di metilene e azzurre II.<br />
MATERIALI NECESSARI MA NON PROVVISTI<br />
Pipette sterili, o<br />
Scovoli sterili, o<br />
Un anello batteriologico sterile<br />
Pinze sterili<br />
Un microscopio convenzionale con 10x di oculare e 10x di<br />
obiettivo o un microscopio per dissezione con una capacità di<br />
ingrandimento da 70x a 100x.<br />
Un’incubatrice che sia capace di mantenere temperature di 34°<br />
- 37°C.<br />
Italiano 2/11
PRECAUZIONI ED AVVERTENZE<br />
Non usare se la beuta o il coperchio della beuta di Mycotrim <strong>RS</strong> è<br />
rotto o se il preparato da segni di contaminazione. Il brodo deve<br />
essere limpido e rossastro senza segni di torbidezza.<br />
M. pneumoniae e muoiono se esposti a temperature superiori a<br />
40° C (104° F) e sono fi siologicamente compromessi a temperature<br />
superiori a 38° C (100° F).<br />
L’effi cacia antimicrobica è compromessa se il campione è inoculato<br />
prima della dispersione completa degli antimicrobici o se è inoculato<br />
dopo che i dischi sono rimasti nella beuta di Mycotrim <strong>RS</strong> per più di<br />
24 ore.<br />
M. pneumoniae è un patogeno umano. Le dovute precauzioni di<br />
sicurezza devono essere seguite continuamente nel maneggiare e nel<br />
gettare materiali biologici infettivi.<br />
ATTENZIONE: La legge (U.S.) permette la vendita del prodotto solo<br />
dietro presentazione di ricetta medica.<br />
RACCOLTA DI CAMPIONI E TRATTAMENTO<br />
I campioni devono essere inoculati nel Mycotrim <strong>RS</strong> al più presto<br />
possibile dopo la raccolta. Se i campioni non possono essere inoculati<br />
prontamente dopo la raccolta, si consiglia di mantenerli nel<br />
Mycotrans ® sistema di trasporto (disponibile da <strong>Irvine</strong> <strong>Scientific</strong>)<br />
a 15°C - 30° C.<br />
Tipo di<br />
Campione Raccolta, Trattamento e Inoculazione<br />
Gola Pulire la gola con uno scovolo secondo la<br />
procedura stabilita. Conservare lo scovolo<br />
nel prodotto per il trasporto Mycotrans finché<br />
viene inoculato in Mycotrim <strong>RS</strong>.<br />
Sputo Immergere uno scovolo sterile nel campione<br />
ed usare come inoculo. (Mettere lo scovolo in<br />
Mycotrans per il trasporto).<br />
Italiano 3/11
Sciacqui bronchiali Usare 1 mL dello sciacquo come inoculo.<br />
Fluido da<br />
pneumocentesi Usare 1 mL del fl uido come inoculo.<br />
Tessuto dalla biopsia Levigare in asepsi una piccola quantità di tessuto.<br />
Pipettare fi no ad 1 mL di tessuto levigato<br />
e di tessuto sciacquato come inoculatore.<br />
ISTRUZIONI PER L’USO<br />
1. Preparazione della beuta<br />
A. Allentare il tappo della beuta da 1/4 fino a 1/2 di giro e<br />
riscaldare la beuta in un’incubatrice (da 34° C a 37° C)<br />
per circa 5 minuti.<br />
B. . Aggiungere dischi antimicrobici in asepsi secondo il tipo di<br />
campione:<br />
Origine del Campione Dischi Antimicrobici<br />
Gola 1 CN, 1 TA<br />
Sciacqui bronchiali 1 CN, 1 TA<br />
Fluido da pneumocentesi 1 CN, 1 TA<br />
Tessuto da biopsia 1 CN, 1 TA<br />
Sputo 2 CN, 2 TA<br />
C. Richiudere la beuta fermamente e lasciarla con il lato agar<br />
rivolto verso il basso, vedi fi gura 1, per un minimo do 30 minuti.<br />
BROTH<br />
AGAR<br />
2. Inoculazione<br />
Usare come tecnica in asepsi.<br />
A. Per campioni liquidi come sciacqui bronchiali, fluido da<br />
pneumocentesi e sciacqui di tessuto da biopsia:<br />
Italiano 4/11<br />
Figura 1
1. Tenere la beuta ad un angolatura di circa 45° e permettere<br />
che circa 1.0 mL di campione scorrano lentamente raggiungendo<br />
il centro dell’agar.<br />
2. Quando la pipetta è stata rimossa dalla beuta, premerla<br />
fermamente dentro l’agar per causare un taglio profondo<br />
nell’area inoculata.<br />
3. Richiudere la beuta ermeticamente.<br />
Figura 2<br />
B. Per campioni in Mycotrans :<br />
1. Rimuovere circa 1.0 mL del brodo dall’area vicino all’<br />
interfaccia dell’agar/brodo.<br />
2. Ripetere le fasi da 1 a 3 per i campioni liquidi come descritto<br />
nella sezione A (vedi sopra).<br />
3. I campioni su scovoli possono essere trasportati intatti nel<br />
Mycotrans e poi elaborati come descritto nella sezione C (vedi<br />
sotto).<br />
Italiano 5/11
C. Per campioni su scovoli come campioni da gola o di sputo:<br />
1. Tenere la beuta ad un angolatura di circa 45° (vedi figura<br />
2) e rigare l’area centrale dell’agar dal basso all’alto.<br />
2. Risciacquare lo scovolo nel brodo e premerlo contro la parete<br />
della beuta per espellere il campione dallo scovolo e versarlo<br />
nel brodo.<br />
3. Quando lo scovolo viene ritirato dalla beuta, premerlo con<br />
cura dentro l’agar in modo da creare un taglio profondo nel<br />
cento dell’area inoculata. Lo scovolo non farà un taglio pulito;<br />
nonostante ciò, un taglio ineguale non avrà un effetto avverso<br />
sulla prestazione di Mycotrim <strong>RS</strong>.<br />
4. Richiudere la beuta ermeticamente.<br />
3. Incubazione<br />
Incubare la beuta con il lato agar rivolto verso l’alto a 34°<br />
C - 37° C per 72 ore o finché il colore del preparato cambia.<br />
Controllare la beuta ogni 24 ore per un cambiamento di colore<br />
(vedi sotto 4. Osservazione).<br />
Temperature superiori a 38° C inibiscono M. pneumoniae.<br />
Nel rimuovere le beute dall’incubatrice per l’evalutaione bisogna<br />
far attenzione per evitare di sciacquare via parte della crescita<br />
dell’agar facendo scorrere il brodo sopra l’agar.<br />
4. Osservazione<br />
A. Cambiamento di colore<br />
Il primo segno di M. pneumoniae in Mycotrim <strong>RS</strong> è un<br />
cambiamento di colore nel preparato che può avvenire da 72<br />
a 96 ore dopo l’inoculazione. La crescita di M. pneumoniae fa<br />
cambiare il colore del preparato da rosso a giallo - arancio.<br />
Italiano 6/11
Diversamente da batteri o funghi, M. pneumoniae non causa<br />
torbidezza nel brodo, anche a titoli massimi. Intensa torbidezza<br />
o colonie visibili sull’agar indicano una sovracrescita di batteri o<br />
funghi, rendendo il cambiamento di colore inaffi dabile e possono<br />
nascondere colonie di mycoplasma. Se nessun cambiamento di<br />
colore avviene entro 72 ore, reinoculare l’agar come indicato nella<br />
fase 5, Reinoculazione, vedi sotto.<br />
B. Apparenza della colonia<br />
Non usare un microscopio rovesciato.<br />
Quando un cambiamento di colore avviene entro le prime 72<br />
- 96 ore, le colonie sono genericamente visibili microscopicamente.<br />
Un microscopio a luce convenzionale con una<br />
lente di obiettivo a bassa potenza (10x) e 10x di oculare o un<br />
microscopio per dissezione di buona qualità con una capacità<br />
di ingrandimento di 70x - 100x è adeguato. Sarà necessario<br />
aggiustare il piano o il pezzo nasale del microscopio per accomodare<br />
la profondità della beuta di Mycotrim <strong>RS</strong>.<br />
Per esaminare la beuta per colonie di M. pneumoniae:<br />
1. Mettere la beuta, con il lato agar rivolto verso l’alto,<br />
sul piano del microscopio come indicato nella figura 3.<br />
Focalizzare attraverso la beuta e l’agar all’interno della<br />
superficie dell’agar. Il taglio fatto durante l’inoculazione<br />
segna l’area inoculata e aiuta la focalizzazione.<br />
2. Analizzare la lunghezza della beuta lungo entrambi i lati del<br />
taglio in cerca di colonie.<br />
3. Esaminare le presunte colonie focalizzandole su e giù. Le<br />
colonie possono crescere sulla superficie dell’agar e sotto<br />
la superficie dell’agar. Le colonie che crescono nell’agar<br />
possono non apparire perfettamente a fuoco.<br />
Italiano 7/11
AGAR<br />
BROTH<br />
10x<br />
Figura 3<br />
Apparenza della colonia di M. pneumoniae:<br />
Le colonie di M. pneumoniae hanno un diametro di 60<br />
- 200 micron, sono circa 1/10 della grandezza di una piccola<br />
colonia batterica, sono da 1 a 5 volte più grandi di una singola<br />
cellula epiteliale buccale, e da 10 a 15 volte più grandi di un<br />
singolo globulo bianco. Le colonie di Mycoplasma hanno<br />
un aspetto caratteristico di “uova fritte” o di “una polpetta di<br />
sabbia” (granulare). Le cellule epiteliali si distinguono chiaramente<br />
da colonie di Mycoplasma per via dei loro margini acuti<br />
ed angolari e del loro citoplasma limpido (spesso ripiegato su<br />
se stesso).<br />
5. Reinoculazione<br />
Non aprire la beuta di Mycotrim <strong>RS</strong>.<br />
Se un cambiamento di colore non avviene dopo 72 ore, reinoculare<br />
l’agar inclinando la beuta cosicché il brodo venga a contatto<br />
con 1/3 - 1/2 della superficie dell’agar, vedi figura 4. Dopo la<br />
reinoculazione, incubare la beuta a 34°C - 37°C con il lato agar<br />
rivolto verso l’alto. Continuare ad esaminare la beuta giornalmente<br />
in cerca di un cambiamento di colore. Quando si nota un<br />
cambiamento di colore, cercare colonie microscopiche tipiche<br />
(vedi sopra, fase B. Aspetto della colonia).<br />
Italiano 8/11
Figura 4<br />
6. Uso Opzionale del Diene Colorante<br />
Il Diene colorante deve essere usato solo quando la beuta non<br />
verrà più incubata. Il Diene colorante distrugge M. pneumoniae.<br />
Una volta colorata, la beuta può essere conservata per diversi<br />
mesi in frigorifero.<br />
Per applicare il Diene colorante:<br />
a. Aprire la beuta e rimuovere il brodo con una pipetta. Gettare<br />
il brodo in un contenitore apposita per rifiuti infetti.<br />
b. Facendo cura a non sciacquare la crescita dalla superfi cie,<br />
applicare gentilmente due o tre gocce del colorante alla<br />
superfi cie dell’agar. Richiudere la beuta.<br />
c. Posizionare la beuta con il lato agar rivolto verso il basso per<br />
30 minuti per permettere che il colorante si diffonda all’interno<br />
dell’agar.<br />
d. Esaminare la beuta microscopicamente per colonie. M.<br />
pneumoniae trattiene il colorante mentre i batteri si decolorano<br />
e non appaiono colorati.<br />
Italiano 9/11
INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI<br />
Un risultato positivo è indicato da un cambiamento di colore (in<br />
assenza di intensa contaminazione) da rosso a giallo - arancio e<br />
se si osservano colonie sull’agar.<br />
Diversamente da batteri o funghi, M. pneumoniae non causa<br />
torbidezza nel brodo, anche a titoli massimi. Intensa torbidezza<br />
o colonie visibili sull’agar indicano una sovracrescita di batteri o<br />
funghi, rendendo il cambiamento di colore inaffidabile e possono<br />
nascondere colonie di M. pneumoniae.<br />
Un risultato negativo è riportato se nessun cambiamento di colore<br />
avviene entro 10 giorni dopo la reinoculazione (13 giorni di totale<br />
incubazione).<br />
LIMITAZIONI<br />
La presenza di elevate quantità di organismi diversi da M.<br />
pneumaoniae può causare una sovracrescita anche se vengono<br />
usati dischi antimicrobici. Un brodo torbido o colonie visibili a<br />
occhio nudo indicano una sovracrescita. Batteri e funghi possono<br />
causare un cambiamento di colore in assenza di M. pneumoniae.<br />
Una sovracrescita può nascondere la presenza di colonie di M.<br />
pneumoniae.<br />
L’efficacia antimicrobica è compromessa quando il campione è inoculato<br />
prima della completa dispersione degli agenti antimicrobici<br />
o quando il disco rimane nella beuta di Mycotrim <strong>RS</strong> per più di 24<br />
ore prima dell’inoculazione.<br />
Italiano 10/11
CONTROLLO DI QUALITÀ<br />
Ogni beuta di Mycotrim <strong>RS</strong> è incubata e testata per contaminazione.<br />
Ogni partita di Mycotrim <strong>RS</strong> è testata per la sua abilità<br />
di mantenere M. pneumoniae (ATCC #15531) ed Acholeplasma<br />
Laidlawii (ATCC #23206). La crescita di questi organismi deve<br />
essere dimostrata sia nel brodo che nel preparato agar. L’attività<br />
inibitoria dei dischi antimicrobici è testata inoculando beute<br />
contenenti dischi antimicrobici con Staphyloccus aureus (ATCC<br />
#25923), Colibacillo (ATCC #25922) e Candida Albicans (ATCC<br />
#10231). L’inibizione di tutti e tre gli organismi deve essere<br />
dimostrata dopo un’incubazione di 24 ore a 34°C - 37°C.<br />
Italiano 11/11
APLICACIÓN<br />
Mycotrim ® <strong>RS</strong> es un sistema de cultivo completo para Mycoplasma<br />
pneumoniae (M. pneumoniae) a partir de muestras humanas del<br />
sistema respiratorio.<br />
M. pneumoniae es una causa común de infecciones respiratorias.<br />
M. pneumoniae es la causa de la pneumonía primaria atípica.<br />
Está asociada a la bronquitis crónica y se lo considera responsable<br />
de más del 20% de los casos de pneumonía.<br />
Mycotrim <strong>RS</strong> está diseñado para el aislamiento selectivo e<br />
identificación M. pneumoniae a partir de muestras del aparato<br />
respiratorio.<br />
DESCRIPCIÓN DEL PRODUCTO<br />
Cada frasco de Mycotrim <strong>RS</strong> contiene agar y un caldo especialmente<br />
formulado para permitir el crecimiento de M pneumoniae.<br />
Cuando el frasco es inoculado e incubado con el agar hacia<br />
arriba, el agar y el caldo están separados por aire húmedo. Esto<br />
crea condiciones óptimas para el crecimiento de M. pneumoniae<br />
en la superficie del agar. Antes de la inoculación, se añaden<br />
discos de antimicrobianos para evitar el crecimiento de otros<br />
microorganismos distintos de M pneumoniae.<br />
En los cultivos positivos para M. pneumoniae se produce un<br />
aumento de pH que provoca un cambio de color en el medio. En<br />
el caso de muestras con alta carga de patógeno, este cambio de<br />
color puede ocurrir en tan sólo 72 a 96 horas, mientras que en las<br />
de baja carga, puede tardar de 7 a 10 días. Los frascos que no<br />
muestran cambio de color después de 72 horas son re-inoculados<br />
con caldo enriquecido dentro del mismo frasco. Al producirse<br />
el cambio de color, se examina el frasco al microscopio (a bajo<br />
aumento) para diferenciar las colonias de M pneumoniae en la<br />
superficie del agar.<br />
Español 1/11
ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD<br />
Almacene todos los componentes del Mycotrim <strong>RS</strong> ( frascos, discos<br />
antimicrobiales y colorante de Dienes ) en la caja original, de 2° C<br />
a 8° C.<br />
No lo congele.<br />
Mycotrim <strong>RS</strong> y los componentes del kit deben ser usados antes de<br />
la fecha de caducidad impresa en la caja.<br />
LOS MATERIALES PROPORCIONARON<br />
Componente Kit de 12 pacientes<br />
Agar/Frasco del caldo 12<br />
Sodio de Cefoperazona/<br />
Discos del la Nistatina 2 Platos (15 discos/plato)<br />
Acetato de talosa 2 Platos (15 discos/plato)<br />
Dienes Stain 1 Frasco (2.5 mL/frasco)<br />
Discos de Antimicrobianos<br />
Un disco CN blanco permite alcanzar una concentración aproximada<br />
en agar y caldo de :<br />
Cefoperazona 100.0 μg/mL<br />
Nistatina 50.0 U/mL<br />
Cada antimicrobianos TA rosa cada una.<br />
Acetato de talosa 250.0 μg/mL<br />
Colorante Dienes - contiene azul de metileno y azul II.<br />
MATERIAL NECESARIO NO INCLUIDO EN EL KIT<br />
Pipetas estériles, o<br />
Hisopos estériles, o<br />
Asa bacteriológica estéril<br />
Pinzas estériles<br />
Microscopio convencional con oculares 10x y objetivos 10x,<br />
o lupa binocular con aumento de 70x a 100x.<br />
Incubador capaz de mantener temperaturas entre 34°C a 37°C.<br />
Español 2/11
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS<br />
No use Mycotrim <strong>RS</strong> si el frasco o los tapones están agrietados o<br />
si los medios muestran signos de contaminación. El caldo debe<br />
ser claro y de color rojizo, sin signos de turbidez.<br />
M. pneumoniae se destruyen con temperaturas superiores a 40° C<br />
(104° F ), y resultan fisiológicamente alterados a temperaturas por<br />
encima de los 38° C ( 100° F ).<br />
La eficacia antimicrobiana se ve disminuida en dos casos: si la<br />
muestra es inoculada antes de la completa dispersión de los<br />
antimicrobianos, o si se inocula después de que los discos hayan<br />
estado en el frasco de Mycotrim <strong>RS</strong> más de 24 horas.<br />
M. pneumoniae es un patógeno humanos. Deberían seguirse las<br />
precauciones de seguridad apropiadas para el manejo y desecho<br />
de materiales biológicos potencialmente infecciosos.<br />
Advertencia: las leyes federales (U.S.) prohiben la venda de este<br />
producto si no es bajo la supervisión de un médico.<br />
RECOLECCIÓN Y PROCESADO DE MUESTRAS<br />
Las muestras deben ser inoculadas en Mycotrim <strong>RS</strong> en el plazo<br />
más breve posible después de su obtención. Si esto no es posible,<br />
es mejor mantenerlas en el medio de transporte Mycotrans ®<br />
(disponible en <strong>Irvine</strong> <strong>Scientific</strong>) de 15° C a 30° C.<br />
Tipo de<br />
Muestra Obtención y Procesado<br />
Frotis de Garganta Haga el frotis de la garganta de acuerdo a los<br />
procedimientos establecidos. Mantenga el<br />
hisopo en medio de transporte Mycotrans hasta<br />
que pueda ser inoculado en Mycotrim <strong>RS</strong><br />
Esputo Sumerja un hisopo estéril en la muestra y<br />
úselo para inocular. (Mantenga el hisopo en<br />
Mycotrans para transportarlo)<br />
Español 3/11
Lavados Bronquiales Use hasta 1mL de fl uido para inocular.<br />
Fluido de<br />
Pneumocentesis Use hasta 1mL de fl uido para inocular.<br />
Tejido de Biopsia Asépticamente, muela una pequeña pieza de<br />
tejido. Pipetee hasta 1 mL del tejido molido +<br />
lavados y úselo para inocular.<br />
INSTRUCCIONES DE USO<br />
1. Preparación del Frasco<br />
A. Afloje el tapón del frasco de ¼ a ½ vuelta y atempere<br />
el frasco en el incubador entre 34° C y 37° C durante<br />
aproximadamente 5 minutos.<br />
B. Asépticamente añada los disco antimicrobianos según el<br />
tipo de muestra:<br />
Origen de la muestra Disco antimicrobiano<br />
Garganta 1 CN, 1 TA<br />
Lavados bronquiales 1 CN, 1 TA<br />
Fluidos de pneumocentesis 1 CN, 1 TA<br />
Tejido de biopsia 1 CN, 1 TA<br />
Esputo 2 CN, 2 TA<br />
C. Coloque el frasco con el agar hacia abajo, como se muestra en<br />
la fi gura #1, durante un mínimo de 30 minutos.<br />
BROTH<br />
AGAR<br />
Español 4/11<br />
Figura 1
2. Inoculación<br />
Manipule en condiciones asépticas.<br />
A. Para muestras líquidas tales como lavados bronquiales,<br />
fluidos de pneumocentesis y lavados de tejidos de biopsia:<br />
1. Sostenga el frasco en un ángulo aproximado de 45° como<br />
se muestra en la figura No. 2, y deje fluir aproximadamente<br />
1.0 mL, lentamente hacia abajo, al centro del agar.<br />
2. Mientras va sacando la pipeta del frasco, presione<br />
firmemente sobre el agar para hacer un corte profundo en<br />
el área inoculada.<br />
3. Vuelva a tapar el frasco herméticamente.<br />
Figura 2<br />
B. Para muestras en Mycotrans:<br />
1. Retire aproximadamente 1.0 mL de caldo del área cercana<br />
a la interfase del agar/caldo.<br />
2. Repita los pasos del 1 al 3, para muestras líquidas, como<br />
las descritas en la sección A (arriba).<br />
Español 5/11
3. Las muestras en hisopos pueden ser transportadas intactas<br />
en Mycotrans, y procesadas más tarde como se describe en<br />
la sección C (abajo).<br />
C. Para muestras en hisopo, tales como muestras procedentes<br />
de garganta o esputo:<br />
1. Sostenga el frasco en un ángulo aproximado de 45° (como<br />
se muestra en la figura No. 2) y haga una raya en el área<br />
central del agar, del fondo hacia el cuello del frasco.<br />
2. Enjuague el hisopo en el caldo y presiónelo contra la<br />
pared del frasco para liberar la muestra contenida en el<br />
mismo, de forma que caiga sobre el caldo.<br />
3. Conforme se va sacando el hisopo del frasco, presiónelo<br />
cuidadosamente sobre el agar para hacer un corte profundo<br />
en el centro del área inoculada. El hisopo no va a<br />
hacer un corte limpio; pero de cualquier manera, el corte<br />
imperfecto no va a afectar en forma adversa el funcionamiento<br />
del Mycotrim <strong>RS</strong>.<br />
4. Tape el frasco de nuevo herméticamente.<br />
3. Incubación<br />
Incube el frasco con el agar hacia arriba durante 24 horas de<br />
34°C a 37°C, o hasta que cambie el color del medio. Revise<br />
el frasco cada 24 horas para ver si hay algún cambio de color<br />
( ver paso 4. Observación a continuación).<br />
Temperaturas superiores a 38°C inhibirán M. pneumoniae.<br />
Cuando saque los frascos del incubador para su observación,<br />
debe tener cuidado de no provocar salpicaduras de caldo que<br />
podrían arrastrar las colonias crecidas sobre el agar.<br />
Español 6/11
4. Observación<br />
A. Cambio de color<br />
El primer signo de M.pneumoniae en el Mycotrim <strong>RS</strong>, es un<br />
cambio de color en el medio que puede ocurrir entre 72 y<br />
96 horas después de la inoculación. El crecimiento de M.<br />
pneumoniae provocará un cambio de color del medio de rojo a<br />
amarillo-anaranjado.<br />
A diferencia de las bacterias y hongos, M pneumoniae no<br />
provoca turbidez en el caldo, incluso a concentraciones máximas.<br />
Una turbidez elevada o colonias visibles sobre el agar,<br />
indican contaminación por bacterias u hongos. Esto hace que<br />
el cambio de color no sea un indicador fiable y es posible que<br />
enmascare la presencia de colonias de mycoplasma. Si no se<br />
produce un cambio de color en 72 horas, re-inocule el agar<br />
como se indica en el paso 5. Reinoculación, a continuación.<br />
B. Aspecto de la colonia<br />
No use microscopio invertido.<br />
Cuando se produce el cambio de color dentro de las primeras<br />
72 a 96 horas, las colonias pueden observarse normalmente<br />
con el microscopio. Un microscopio óptico convencional con<br />
objetivos y oculares 10x, o un microscopio de disección de<br />
buena calidad con capacidad de aumento de 70x a 100x, son<br />
adecuados. Ajuste la altura de la platina para que permita la<br />
colocación del frasco de Mycotrim <strong>RS</strong>.<br />
Para examinar la presencia de colonias de mycoplasma en<br />
el frasco:<br />
1. Coloque el frasco con el agar hacia arriba, sobre la platina<br />
del Microscopio como se indica en la figura 3. Enfoque a<br />
través del frasco y el agar hacia la superficie interior del<br />
agar. El corte hecho durante la inoculación marca el área<br />
inoculada y ayuda a enfocar.<br />
Español 7/11
2. Revise ambos lados del corte a lo largo del frasco, para ver si<br />
hay colonias.<br />
3. Examine las colonias sospechosas enfocando varios<br />
planos. Las colonias pueden crecer en la superficie del<br />
agar o penetrar por debajo de la superficie del mismo. Las<br />
colonias que penetran debajo de la superficie pueden ser<br />
difíciles de enfocar.<br />
AGAR<br />
BROTH<br />
10x<br />
Figura 3<br />
Aspecto de las colonias de M. pneumoniae:<br />
Las colonias de M. pneumoniae tienen un diámetro de 60<br />
a 200 micras, cerca de 1/10 del tamaño de una colonia<br />
pequeña de bacterias, de 1 a 5 veces más grande que una<br />
célula epitelial bucal aislada, y de 10 15 veces mayor que<br />
un leucocito. Las colonias de micoplasma tienen un aspecto<br />
característico de “huevo frito” o “granulado”. Las células epiteliales<br />
se distinguen claramente de las colonias de micoplasma<br />
por sus bordes angulosos y su citoplasma claro (a menudo<br />
doblado sobre si mismo).<br />
5. Reinoculación<br />
No abra el frasco de Mycotrym <strong>RS</strong>.<br />
Si no se produce un cambio de color después de 72 horas,<br />
reinocule el agar inclinando el frasco para que el caldo<br />
haga contacto de 1/3 a ½ de la superficie del agar, como se<br />
muestra en la figura 4. Después de la re-inoculación, incube el<br />
frasco entre 34° C y 37° C con el agar hacia arriba. Continúe<br />
Español 8/11
examinando el frasco diariamente para ver si el color cambia.<br />
Cuando se observe cambio de color, busque colonias microscópicas<br />
típicas (vea sección B. Apariencia de la colonia).<br />
Figura 4<br />
6. Uso Opcional del Colorante Dienes<br />
El colorante Dienes sólo debe ser utilizado cuando no se va a<br />
seguir incubando el frasco. El colorante Dienes es letal para<br />
micoplasmas. Una vez teñido, el frasco puede ser almacenado en<br />
el refrigerador durante algunos meses.<br />
Para aplicar el colorante Dienes:<br />
a. Abra el frasco y aspire el caldo con una pipeta. Tire el<br />
caldo en un contenedor para residuos infecciosos.<br />
b. Deposite cuidadosamente, para evitar arrastrar las<br />
colonias, dos o tres gotas de colorante sobre la superficie<br />
del agar. Cierre el frasco.<br />
c. Deje reposar el frasco con el agar hacia abajo unos 30<br />
minutos para permitir que colorante difunda en el agar.<br />
Español 9/11
d. Examine microscópicamente el frasco para localizar colonias.<br />
M.pneumoniae retendrá el colorante mientras que las<br />
bacterias aparecerán sin tinción.<br />
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS<br />
El cambio de color de rojo a amarillo-anaranjado, y la observación<br />
de colonias en el agar es un indicador de resultado positivo<br />
(en ausencia de contaminación).<br />
A diferencia de bacterias y hongos, no causa turbidez en el caldo,<br />
aun a concentraciones máximas. Una turbidez elevada o colonias<br />
visibles sobre el agar, indican contaminación por bacterias u<br />
hongos. Esto hace que el cambio de color no sea un indicador<br />
fiable y es posible que enmascare la presencia de colonias de M.<br />
pneumoniae.<br />
Se considera resultado negativo si no hay cambio de color dentro<br />
de los 10 días siguientes a la reinoculación (13 días de incubación<br />
en total).<br />
LIMITACIONES<br />
La presencia de un inóculo demasiado alto de microorganismos<br />
distintos de M. pneumoniae podría provocar contaminación aún<br />
cuando se empleen discos antimicrobianos. Un caldo turbio o colonias<br />
visibles a simple vista indican contaminación. Las bacterias<br />
y los hongos pueden causar cambio de color en ausencia de M.<br />
pneumoniae. La aparición de contaminaciones puede enmascarar<br />
la presencia de M. pneumoniae.<br />
La efectividad antimicrobiana se ve mermada cuando la muestra<br />
es inoculada antes de que se complete la difusión del antimicrobiano,<br />
o cuando los discos han estado en el frasco de Mycotrim<br />
<strong>RS</strong> más de 24 horas antes de proceder a su inoculación.<br />
Español 10/11
CONTROL DE CALIDAD<br />
Cada frasco de Mycotrim <strong>RS</strong> es incubado y se verifica la ausencia<br />
de contaminación. Para cada lote de Mycotrim <strong>RS</strong> se comprueba<br />
su capacidad de permitir el crecimiento de M. pneumoniae (ATCC<br />
# 15531) y Acheloplasma laidlawii (ATCC # 23206). El crecimiento<br />
de estos organismos debe ser demostrado en ambos medios:<br />
caldo y agar. La actividad inhibidora de los discos antimicrobianos<br />
es comprobada frente a Staphylococcus aureus (ATCC # 25923),<br />
Escherichia coli (ATCC # 25922) y Candida albicans (ATCC #<br />
10231). La inhibición de estos tres organismos debe ser demostrada<br />
después de 24 horas de incubación a 34-37° C.<br />
Español 11/11
UTILISATION<br />
Mycotrim ® <strong>RS</strong> est un système complet de culture de Mycoplasma<br />
pneumoniae (M. pneumoniae) dans les prélèvements respiratoires<br />
humains.<br />
M. pneumoniae est une cause commune d’infections respiratoires.<br />
M. pneumoniae est la cause de la pneumonie atypique primaire<br />
souvent appelée “pneumonie ambulatoire”. Il est associé à des<br />
bronchites chroniques et on pense qu’il est responsable de 20%<br />
de tous les cas de pneumonie.<br />
Mycotrim <strong>RS</strong> est conçu pour isoler et identifier sélectivement M.<br />
pneumoniae dans les prélèvements respiratoires humains.<br />
DESCRIPTION DU PRODUIT<br />
Chaque flacon Mycotrim <strong>RS</strong> contient une agar et un bouillon de<br />
culture spécialement formulés pour favoriser le développement<br />
de M. pneumoniae. Quand le flacon est ensemencé et incubé,<br />
côté agar en haut, l’agar et le bouillon de culture sont séparés<br />
par de l’air humide. Ceci crée les conditions optimum pour le<br />
développement de M. pneumoniae sur la surface de l’agar. Des<br />
disques anti-microbiens sont ajoutés avant l’ensemencement pour<br />
prévenir le développement de microorganismes autres que les<br />
mycoplasmes.<br />
Les cultures positives de M. pneumoniae font baisser le pH et<br />
induisent un changement de couleur du milieu de culture. Dans<br />
les prélèvements avec une concentration élevés, ce changement<br />
de couleur peut se manifester après 72 ou 96 heures, alors<br />
que dans les prélèvements à basse concentration ce processus<br />
peut prendre jusqu’à 7 ou 10 jours. Les flacons de culture ne<br />
montrant aucun changement de couleur après 72 heures sont<br />
ré-ensemencé avec le bouillon de culture enrichi, dans le flacon.<br />
Une fois que le milieu change de couleur, le flacon est examiné au<br />
microscope (faible grossissement) pour détecter des colonies de<br />
M. pneumoniae sur la surface de l’agar.<br />
Français 1/10
STOCKAGE ET STABILITÉ<br />
Conserver tout les composants de Mycotrim <strong>RS</strong> (flacons, disques<br />
antimicrobiens et colorant de Dienes) dans la boite d’origine entre<br />
2 et 8° C.<br />
Ne pas congeler.<br />
Les composants du kit Mycotrim <strong>RS</strong> doivent être utilisés avant la<br />
date d’expiration imprimée sur la boite.<br />
MATÉRIAUX FOURNIS<br />
Composant Kit de 12 patients<br />
Agar/Flacon le bouillon de culture 12<br />
Sodium de Cefoperazone/<br />
Disques de Nystatin 2 boîtes (15 disques/boîte)<br />
Acétate de Thallous 2 boîtes (15 disques/boîte)<br />
Colorant de Dienes 1 fiole (2.5 mL/fiole)<br />
Disques Antimicrobiens<br />
Chaque disque donne une antimicrobiens CN blancs concentration<br />
approximative (dans l’agar et le bouillon de culture) de:<br />
Cefoperazone de sodium 100.0 μg/mL<br />
Nystatin 50.0 U/mL<br />
Chaque disques antimicrobiens TA roses aboutissent approximatives:<br />
Acétate de Thallous 250,0 μg/ml<br />
Colorant de Dienes - contiennent du bleu de méthylène et de l’azure II.<br />
MATÉRIEL REQUIS MAIS NON FOURNI<br />
Pipette stérile, ou<br />
Ecouvillons stériles, ou<br />
Anse bactériologique stérile<br />
Pince stérile<br />
Microscope conventionnel avec des oculaires 10X et des objectifs<br />
10X ou une loupe binoculaire avec un pouvoir agrandissant<br />
de 70 à 100X.<br />
Une étuve capable de maintenir une température de 34 à 37°C.<br />
Français 2/10
PRÉCAUTIONS ET MISE EN GARDE<br />
Ne pas utiliser les flacons Mycotrim <strong>RS</strong> ni leurs bouchons s’ils<br />
sont fêlés ou si le milieu montre des signes de contamination. Le<br />
bouillon de culture doit être clair et de couleur rougeâtre avec<br />
aucun signe de trouble.<br />
M. pneumoniae est tué par des températures supérieures à 40°C<br />
(104 °F) et physiologiquement compromis à des températures<br />
supérieures à 38°C (100°F).<br />
L’efficacité des disques antimicrobiens est altérée si<br />
l’ensemencement a lieu avant la dispersion des agents antimicrobiens<br />
ou si les disques sont restés dans le flacon Mycotrim <strong>RS</strong><br />
plus de 24 heures.<br />
M. pneumoniae est un pathogène humain. Les mesures de sécurité,<br />
pour la manipulation et l’élimination du matériel biologique<br />
infectieux, doivent être suivies tout le temps.<br />
ATTENTION : La loi fédérale (U.S.) limite la vente de ce dispositif<br />
aux médecins ou sur ordre d’un médecin.<br />
RECUEIL ET MANIPULATION DES PRÉLÈVEMENTS<br />
Les prélèvements doivent être utilisés pour ensemencer Mycotrim<br />
<strong>RS</strong> le plus rapidement possible après leur recueil. S’il est impossible<br />
d’utiliser les prélèvements, juste après leur recueil, le mieux<br />
est de les maintenir dans le système de transport Mycotrans ®<br />
(disponible, par <strong>Irvine</strong> <strong>Scientific</strong>) entre 15° et 30° C.<br />
Type de<br />
Prélèvement Recueil, Manipulation et Ensemencement<br />
Gorge Récurer la gorge à l’aide d’un écouvillon selon la<br />
pratique en vigueur. Placer l’écouvillon dans le milieu<br />
de Mycotrans jusqu’à l’ensemencement de Mycotrim<br />
<strong>RS</strong><br />
Crachat Plonger un écouvillon dans le prélèvement et<br />
l’utiliser pour ensemencer. (Placer l’écouvillon dans<br />
Mycotrans pour le transporter).<br />
Français 3/10
Lavage des<br />
bronches Utiliser 1 ml du prélèvement de lavage pour<br />
ensemencer.<br />
Liquide de<br />
pneumocentèse Utiliser 1 ml de liquide pour ensemencer.<br />
Tissu de biopsie Broyer stérilement une petite pièce de tissu. Prélever<br />
jusqu’à 1 ml de tissu broyé (avec son extrait) et<br />
l’utiliser pour ensemencer.<br />
CONSEILS D’UTILISATION<br />
1. Préparation des flacons de culture<br />
A. Desserrer les bouchons des flacons ¼ ou ½ tour et<br />
préchauffer les flacons dans une étuve (34°C à 37°C)<br />
pendant cinq minutes environ.<br />
B. Déposer de façon stérile un disque anti-microbien selon le<br />
type de prélèvement :<br />
Source du prélèvement Disque antimicrobien<br />
Gorge 1CN, 1TA<br />
Lavage des bronches 1CN, 1TA<br />
Liquide de pneumocentèse 1CN, 1TA<br />
Tissu de biopsie 1CN, 1TA<br />
Crachat 2CN, 2TA<br />
C. Fermer le flacon et le placer coté agar en bas comme dans<br />
la figure 1, laisser dans cette position pendant au moins<br />
30 minutes.<br />
BROTH<br />
AGAR<br />
Français 4/10<br />
Figure 1
2. Ensemencement<br />
Manipuler stérilement<br />
A. Pour les prélèvements liquide comme le liquide de lavage des<br />
bronches, le liquide de pneumocentèse et le milieu de lavage<br />
de tissu de biopsie:<br />
1. Tenir le flacon à un angle de 45° comme sur la figure 2 et<br />
permettre à 1 ml de prélèvement de couler lentement au<br />
milieu de l’agar.<br />
2. Au fur et à mesure que la pipette est retirée du flacon<br />
presser fermement sur l’agar pour créer un profond sillon<br />
dans la région ensemencée.<br />
3. Bien fermer le flacon.<br />
Figure 2<br />
B. Pour les prélèvements dans Mycotrans:<br />
1. Prélever environ 1 ml de bouillon de culture de la région<br />
d’interface entre l’agar le bouillon.<br />
Remarque : il n’est pas nécessaire d’enlever l’écouvillon ayant<br />
servis à ensemencer Mycotrans<br />
Français 5/10
2. Reprendre les étapes 1 à 3 du paragraphe A ci-dessus.<br />
C. Pour les prélèvements sur écouvillons comme les prélèvements<br />
de gorge et les crachats:<br />
1. Tenir le flacon à un angle de 45° environ (comme sur la<br />
figure 2) et faire des rayures dans la partie centrale de<br />
l’agar commençant par le fond vers le col du flacon.<br />
2. Rincer l’écouvillon dans le bouillon de culture et le presser<br />
contre la paroi du flacon pour libérer le prélèvement dans<br />
le bouillon.<br />
3. En retirant l’écouvillon du flacon, le presser soigneusement<br />
sur l’agar pour créer un profond sillon dans la<br />
région ensemencée. L’écouvillon ne créera pas un sillon<br />
parfait ; un sillon denté n’affectera pas négativement la<br />
performance de Mycotrim <strong>RS</strong>.<br />
4. Bien fermer le flacon.<br />
3. Incubation<br />
Incuber les flacons côté agar en haut entre 34° C et 37°C<br />
pendant 72 heures ou jusqu’à ce que la couleur du milieu<br />
change. Examiner la couleur du milieu dans les flacons toutes<br />
les 24 heures (voir le paragraphe 4. Observation ci-dessous).<br />
Les températures supérieures à 38° C inhiberont M. pneumoniae.<br />
En sortant les flacons de l’étuve pour l’observation, faire attention<br />
d’éviter de déloger, par les mouvements du bouillon de<br />
culture sur l’agar, le tapis de microorganismes.<br />
4. Observation<br />
A. Changement de couleur<br />
Le premier signe de M. pneumoniae dans Mycotrim <strong>RS</strong> est<br />
un changement de couleur du milieu de culture qui peut<br />
survenir dans les 72 à 96 heures après l’ensemencement. La<br />
Français 6/10
croissance de M. pneumoniae provoquera un changement de<br />
couleur du milieu du rouge au jaune orangé.<br />
A la différence des bactéries et des champignons, M. pneumoniae<br />
ne cause pas de turbidité dans le bouillon de culture, même aux<br />
concentrations maximales. Une turbidité élevée et des colonies<br />
visibles sur l’agar indiquent une surcroissance de bactéries ou<br />
de champignons, rendant non fi able le changement de couleur<br />
et cachant éventuellement des colonies de mycoplasmes. Si au<br />
bout de 72 heures aucun changement de couleur n’est observé,<br />
ré-ensemencer l’agar comme indiqué au paragraphe 5, Ré-ensemencement,<br />
ci-dessous.<br />
B. Apparence des colonies<br />
Ne pas utiliser un microscope inversé.<br />
Quand un changement de couleur est visible dans les premières<br />
72 à 96 heures, les colonies sont en général visibles<br />
au microscope. Un microscope optique classique avec un<br />
objectif à faible grossissement 10x et des oculaires 10x ou<br />
une loupe binoculaire de bonne qualité, avec un pouvoir<br />
agrandissant de 70 x à 100X, sont adéquats. Il faudra ajuster<br />
la platine du microscope pour accommoder la profondeur des<br />
flacons Mycotrim <strong>RS</strong>.<br />
Pour examiner les fl acons pour l’existence de colonies de M.<br />
pneumoniae :<br />
1. Placer le flacon sur la platine du microscope, côté agar<br />
en haut comme indiqué sur la figure 3. Ajuster la mise<br />
au point sur l’intérieur de l’agar. Le sillon crée durant<br />
l’ensemencement sert de repère et facilite la mise au<br />
point.<br />
2. Balayer le fl acon le long des deux cotés du sillon à la recherche<br />
de colonies.<br />
Français 7/10
3. Examiner les éventuelles colonies en ajustant la mise au point.<br />
Les colonies peuvent se développer à la surface de l’agar ou<br />
pénétrer sous cette dernière. Les colonies qui pénètrent sous la<br />
surface de l’agar peuvent être diffi ciles à mettre au point.<br />
AGAR<br />
BROTH<br />
10x<br />
Figure 3<br />
Apparence des colonies M. pneumoniae:<br />
Les colonies M. pneumoniae sont de 60 à 200 microns de diamètre,<br />
environ le 1/10 de la taille d’une petite colonie bactérienne, 1 à 5 fois<br />
la taille d’une seule cellule épithéliale de la bouche et 10 à 15 fois<br />
plus large qu’une cellule blanche du sang. Les colonies de mycoplasme<br />
ont l’aspect caractéristique “d’œuf sur le plat” ou de “pâté de<br />
sable” (granuleux). Les cellules épithéliales peuvent être distinguées<br />
des colonies de mycoplasme par leur forme, leurs bords angulaires<br />
et leur claire cytoplasme (souvent plié sur lui même).<br />
5. Ré-ensemencement<br />
Ne pas ouvrir les flacons Mycotrim <strong>RS</strong><br />
Si aucun changement de couleur ne survient au bout de 72<br />
heures, ré-ensemencer l’agar en faisant pencher le fl acon<br />
de façon à ce que le bouillon de culture soit en contact avec<br />
1/3 ou ½ de la surface de l’agar comme sur la fi gure 4. Après<br />
ré-ensemencement, incuber le fl acon entre 34°C et 37°C, côté<br />
agar en haut. Examiner le fl acon quotidiennement pour détecter<br />
tout changement de couleur. Quand le changement de couleur<br />
est observé, chercher au microscope les colonies typiques. (Voir<br />
paragraphe B. Apparence des colonies, ci-dessus).<br />
Français 8/10
Figure 4<br />
6. Utilisation optionnelle du colorant de Dienes<br />
Le colorant de Dienes doit être utilisé uniquement quand les<br />
fl acons ne seront plus incubés. Le colorant de Dienes tue M.<br />
pneumoniae. Une fois colorés, les fl acons peuvent être conservés<br />
pendant quelques mois au réfrigérateur.<br />
Application du colorant de Dienes :<br />
a. Ouvrir le flacon et aspirer le bouillon de culture avec une<br />
pipette. Jeter le bouillon dans un récipient adéquat pour<br />
déchets infectieux.<br />
b. En faisant attention d’éviter de déloger de l’agar le tapis<br />
de microorganismes, soigneusement déposer deux ou trois<br />
gouttes de colorant à la surface de l’agar. Fermer le fl acon.<br />
c. Laisser reposer le flacon, côté agar en bas, pendant 30<br />
minutes pour permettre au colorant de diffuser dans l’agar.<br />
d. Examiner le flacon au microscope pour chercher les<br />
colonies. M. pneumoniae va retenir le colorant alors que<br />
les bactéries vont se décolorer et apparaîtront incolores.<br />
Français 9/10
INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS<br />
Un résultat positif est indiqué par le changement de couleur (en<br />
l’absence de grande contamination) du rouge au jaune orangé et<br />
quand les colonies sont observées sur l’agar.<br />
A la différence des bactéries et des champignons, M. pneumoniae<br />
ne cause pas de turbidité dans le bouillon de culture, même aux<br />
concentrations maximales. Une turbidité élevée et des colonies<br />
visibles sur l’agar indiquent une surcroissance de bactéries ou<br />
de champignons, rendant non fiable le changement de couleur et<br />
cachant éventuellement des colonies de M. pneumoniae.<br />
Un résultat négatif est rapporté en cas d’absence de changement<br />
de couleur 10 jours après le ré-ensemencement (13 jours<br />
d’incubation totale).<br />
LIMITES<br />
La présence d’un grand nombre d’organismes autres que M. pneumoniae<br />
peut causer une surcroissance de microorganismes, même<br />
quand les disques antimicrobiens sont utilisés. Un bouillon de culture<br />
trouble ou des colonies visibles à l’œil nu indique une surcroissance.<br />
Les bactéries et les champignons peuvent causer un changement de<br />
couleur en l’absence de M. pneumoniae. Une surcroissance élevée<br />
peut cacher la présence des colonies de M. pneumoniae.<br />
L’efficacité antimicrobienne est affectée quand l’ensemencement a<br />
lieu avant la diffusion complète du produit antimicrobien ou quand<br />
le disque a été placé dans le flacon Mycotrim <strong>RS</strong> plus de 24 heures<br />
avant l’ensemencement.<br />
CONTRÔLE DE QUALITÉ<br />
Chaque flacon de Mycotrim <strong>RS</strong> est incubé et inspecté pour une<br />
éventuelle contamination. Chaque lot de Mycotrim <strong>RS</strong> est testé<br />
pour sa capacité de maintenir M. pneumoniae (ATCC<br />
Français 10/10<br />
# 15531)<br />
et Acholeplasma taidlawii (ATCC # 23206). La croissance de ces<br />
organismes doit être démontrée dans l’agar et le bouillon de<br />
culture. L’activité inhibitrice des disques antimicrobiens est testée<br />
en ensemençant des flacons contenant des disques antimicrobiens<br />
avec Staphylococcus aureus (ATCC # 25923), Escherichia coli<br />
(ATCC # 25922) et Candida albicans (ATCC # 10231). L’inhibition des<br />
trois organismes doit être évidente après une incubation pendant 24<br />
heures entre 34°C et 37°C.
MODO DE UTILIZAÇÃO<br />
Mycotrim ® <strong>RS</strong> é um sistema de cultura completo para Mycoplasma<br />
pneumoniae (M. Pneumoniae) em amostras respiratórias<br />
humanas.<br />
O Mycoplasma pneumoniae é uma causa comum de infecções<br />
respiratórias. O M. Pneumoniae é causa de pneumonia primária<br />
atípica, vulgarmente conhecida como “pneumonia andante”. Está<br />
associado a bronquites crónicas e pensa-se que seja o responsável<br />
por mais de 20 % de todos os casos de pneumonia.<br />
Mycotrim <strong>RS</strong> foi concebido para isolar e identifi car selectivamente o<br />
M. Pneumoniae em amostras respiratórias humanas.<br />
DESCRIÇÃO DO PRODUTO<br />
Cada recipiente de Mycotrimâ <strong>RS</strong> contém agar e um caldo<br />
especialmente formulado para manter o crescimento de M.<br />
Pneumoniae. Quando o recipiente é inoculado e incubado com o<br />
agar para cima, o agar e o caldo estão separados por ar húmido.<br />
Isto cria condições óptimas para o crescimento de M. Pneumoniae<br />
à superfície do agar. Antes da inoculação, adicionam-se discos<br />
de antimicrobianos para evitar o crescimento de outros microorganismos,<br />
que não o micoplasma.<br />
Culturas positivas para M. Pneumoniae baixam o pH e causam<br />
uma alteração de cor no Meio. Em amostras com elevada concentração,<br />
esta alteração de cor poderá ocorrer num espaço de<br />
tempo entre 72 a 96 horas, enquanto que em amostras com baixa<br />
concentração, poderá demorar entre 7 e 10 dias. Os recipientes<br />
que não apresentam alteração de cor após 72 horas são re-inoculados<br />
com caldo enriquecido dentro do mesmo recipiente. Assim<br />
que o meio apresente alteração de cor, o recipiente é examinado<br />
microscopicamente (baixa ampliação) para a presença de colónias<br />
de M. Pneumoniae à superfície do agar.<br />
Português 1/11
ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE<br />
Conservar todos os compostos de Mycotrim <strong>RS</strong> (recipientes, discos<br />
antimicrobianos, corante de Dienes) na caixa original, entre 2° C e<br />
8° C.<br />
Não congelar.<br />
Os componentes do kit do Mycotrim <strong>RS</strong> devem ser utilizados<br />
antes da data de expiração impressa na caixa.<br />
MATERIAIS FORNECIDOS<br />
Compostos Jogo de<br />
12 pacientes<br />
Agar/Recipientes<br />
do Caldo 12<br />
Sódio de Cefoperazone/<br />
Disques de Nystatin 2 prato (15 discs/pratos)<br />
Thallous acetate 2 prato (15 discs/pratos)<br />
Corante de Dienes 1 frasco (2.5 mL/frasco)<br />
Iscos Antimicrobianos<br />
Cada um CN disco antimicrobianos branco com uma concentração<br />
aproximada de agar e caldo de :<br />
Cefoperazone 100.0 μg/mL<br />
Nystatin 50.0 U/mL<br />
Cada TA disco antimicrobial cor-de-rosa rendem cada um de:<br />
Thallous acetate 250.0 μg/mL<br />
Corante de Dienes - contem azul de metileno e azul II.<br />
MATERIAIS REQUERIDOS MAS NÃO INCLUÍDOS<br />
Pipetas estéreis, ou<br />
Cotonetes estéreis, ou<br />
Ansa bacteriológica estéril, ou<br />
Pinças estéreis<br />
Português 2/11
Microscópio convencional com oculares 10x e objectivas 10x, ou<br />
microscópio de dissecção com ampliação de 70x a 100x.<br />
Incubadora apta a manter temperaturas de 34°C a 37°C.<br />
PRECAUÇÕES E ADVERTÊNCIAS<br />
Não utilizar Mycotrim <strong>RS</strong> se o recipiente ou a respectiva tampa<br />
estiverem quebradas ou apresentarem sinais de contaminação. O<br />
caldo deve ser límpido e apresentar coloração avermelhada, sem<br />
sinais de turvação.<br />
O M. pneumoniae é destruído a temperaturas acima dos 40° C<br />
(104° F) , e fica fisiologicamente comprometido a temperaturas<br />
acima dos 38° C (100° F).<br />
A actividade antimicrobiana fica comprometida se a amostra for<br />
inoculado, quer antes da dispersão dos discos estar completa, ou<br />
depois dos discos terem permanecido no recipiente de Mycotrim<br />
<strong>RS</strong> por mais de 24 horas.<br />
O M. pneumoniae é um agente patogénico humanos. Deve<br />
utilizar-se todas as precauções de segurança sempre que se<br />
manipule ou descarte materiais biológicos infecciosos.<br />
Atenção: A venda deste produto é feita exclusivamente sob<br />
prescrição médica (U.S. lei).<br />
RECOLHA E MANIPULAÇÃO DOS AMOSTRAS<br />
Os amostras devem ser inoculadas em Mycotrim <strong>RS</strong> o mais rapidamente<br />
possível após a recolha. Se as amostras não poderem<br />
ser inoculadas logo após a sua recolha, é preferível mantê-las no<br />
sistema de transporte Mycotrans ® (disponível na <strong>Irvine</strong> <strong>Scientific</strong>)<br />
entre15° C e 30° C.<br />
Português 3/11
Tipo de<br />
Amostra Recolha, Manipulação e Inoculação<br />
Garganta Utilize um cotonete de acordo com a<br />
prática. Coloque o cotonete em sistema de<br />
transporte Mycotrans até ser inoculado no<br />
Mycotrim <strong>RS</strong>.<br />
Expectoração Envolva um cotonete estéril na amostra e<br />
uso para inocular. (Coloque o cotonete em<br />
sistema de transporte Mycotrans)<br />
Lavagem brônquica Utilize 1 mL de lavagem para inocular.<br />
Fluído de<br />
Pneumocentese Utilize 1 mL de fluído para inocular.<br />
Tecido de Biópsia Assepticamente triture uma pequena porção<br />
de tecido. Pipete até 1 mL de tecido triturado<br />
+ lavado e utilize-o para inocular.<br />
INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO<br />
1. Preparação do Recipiente<br />
A. Desenrosque a tampa do recipiente ¼ a ½ de volta e<br />
aqueça o recipiente numa incubadora durante aproximadamente<br />
5 minutos entre 34° C e 37° C.<br />
B. Assepticamente, adicione um disco antimicrobiano ao<br />
recipiente de acordo coma amostra:<br />
Fonte da amostra Discos Antimicrobianos<br />
Garganta 1 CN 1 TA<br />
Lavagem brônquica 1 CN 1 TA<br />
Fluído de Pneumocentese 1 CN 1 TA<br />
Tecido de biópsia 1 CN 1 TA<br />
Expectoração 2 CN 2 TA<br />
C. Coloque o recipiente com o agar para baixo, como se<br />
mostra na figura 1, durante um tempo mínimo de 30<br />
minutos.<br />
Português 4/11
BROTH<br />
AGAR<br />
Figura 1<br />
2. Inoculação<br />
Utilização de técnicas de assepsia.<br />
A. Para amostras líquidos tais como lavagens brônquicas, fluído<br />
de pneumocentese e lavados de biópsias de tecido:<br />
1. Coloque o recipiente num ângulo aproximado de 45° como<br />
mostra a figura 2, e deixe que aproximadamente 1.0 mL<br />
flua lentamente até baixo, para o centro do agar.<br />
2. Assim que retire a pipeta do recipiente, pressione firmemente<br />
sobre o agar para fazer um corte profundo na área<br />
inoculada.<br />
3. Volte a tapar o recipiente firmemente.<br />
Português 5/11<br />
Figura 2
B. Para amostras em Mycotrans :<br />
1. Remova aproximadamente 1.0 mL do caldo da área<br />
circundante à interface do agar/caldo.<br />
NOTA: Não é necessário retirar o cotonete utilizado para inocular<br />
Mycotrans<br />
2. Repita os passos de 1 a 3, para amostras líquidos, como os<br />
descritos na secção A (em cima).<br />
C. Para amostras em cotonete, tais como garganta ou expectoração:<br />
1. Coloque o recipiente num ângulo aproximado de 45°<br />
(como se mostra na figura 2) e faça um corte na área central<br />
do agar, desde o fundo do recipiente até à superficíe.<br />
2. Lave a cotonete no caldo e pressione-a contra a parede<br />
do recipiente para expelir a amostra contida na cotonete,<br />
e transferi-la para o caldo.<br />
3. Conforme for retirando a cotonete do recipiente,<br />
cuidadosamente pressione-a sobre o agar para fazer um<br />
corte profundo no centro da área inoculada. A cotonete<br />
não vai fazer um corte perfeito; de qualquer forma, o<br />
corte imperfeito não vai afectar adversamente o funcionamento<br />
do Mycotrim <strong>RS</strong>.<br />
4. Tape o recipiente, firmemente.<br />
3. Incubação<br />
Incubar o recipiente com agar para cima durante 72 horas<br />
entre 34°C e 37°C, ou até que a cor do meio sofra alteração.<br />
Observe o recipiente todas as 24 horas para verificar se<br />
houve alteração de cor ( ver 4. Observação. Abaixo).<br />
Temperaturas acima de 38°C inibem o M. pneumoniae.<br />
Português 6/11
Quando retirar os recipientes da incubadora para examinação,<br />
deve ter cuidado para não remover a cultura que cresce<br />
sobre o agar, salpicando o caldo sobre o agar.<br />
4. Observação<br />
A. Alteração de cor<br />
O primeiro sinal de M. pneumoniae no Mycotrans <strong>RS</strong>, é uma<br />
alteração de cor no meio, a qual pode ocorrer entre 72 e 96<br />
horas depois da inoculação.<br />
O crescimento M. pneumoniae provoca uma alteração de cor no<br />
meio de cultura de vermelho para amarelo-alaranjado.<br />
Ao contrário das bactérias e fungos, o M. pneumoniae não causa<br />
turvação no caldo, ainda que esteja em elevadas concentrações.<br />
Turvação forte de colónias visíveis sobre o agar, indicam<br />
sobrepopulação de bactérias ou fungos, tornando a alteração<br />
de cor não confi ável e possivelmente escondendo colónias de<br />
micoplasma. Se a alteração de cor não ocorrer dentro de 72<br />
horas, re-inocule o agar como se havia indicado no passo 5.<br />
Reinoculação.<br />
B. Aparência da colónia<br />
Não utilize microscópio invertido.<br />
Quando ocorrer alteração de cor dentro das primeiras 72<br />
a 96 horas, as colónias podem observar-se normalmente<br />
ao microscópio. Um microscópio convencional de luz com<br />
uma ampliação baixa, com objectivas e oculares 10x, ou um<br />
microscópio de dissecção de boa qualidade com capacidade<br />
de ampliação de 70x a 100x. Vai ser necessário ajustar as<br />
oculares do microscópio para adaptá-las à profundidade do<br />
recipiente de Mycotrim <strong>RS</strong>.<br />
Para examinar o recipiente para colónias de M. pneumoniae:<br />
Português 7/11
1. Coloque o recipiente com o agar para cima sobre a placa<br />
do microscópio como se indica na figura 3. Foque através<br />
do recipiente e agar até à superficie interior do agar. O<br />
corte feito durante a inoculação, marca a área inoculada e<br />
ajuda na focagem.<br />
2. Observe ambos os lados do corte ao longo do recipiente,<br />
para verificar a presença de colónias.<br />
3. Examine as colónias suspeitas focando por cima e por<br />
baixo das mesmas. As colónias podem crescer na superfície<br />
do agar ou penetrar por baixo da mesma. As colónias<br />
que penetram por baixo da superfície não podem ser bem<br />
focadas.<br />
AGAR<br />
BROTH<br />
10x<br />
Figura 3<br />
Aparência de colónias de M. pneumoniae:<br />
As colónias de M. pneumoniae apresentam entre 60 a 200<br />
microns de diâmetro, cerca de 1/10 do tamanho de uma colónia<br />
pequena de bactérias, 1 a 5 vezes maior que uma célula<br />
epitelial bucal, e 10 a 15 vezes maiores que um leucócito.<br />
As colónias de micoplasma têm uma aparência característica<br />
de “ovo estrelado” ou uma aparência “granulosa”. As células<br />
epiteliais distinguem-se das colónias de micoplasma pelas<br />
suas margens em forma de ângulos agudos e citoplasma<br />
transparente.<br />
5. Reinoculação<br />
Não abra o recipiente de Mycotrim <strong>RS</strong>.<br />
Português 8/11
Se não ocorrer alteração de cor após 72 horas, re-inocular<br />
o agar inclinando o recipiente para que o caldo esteja em<br />
contacto com 1/3 a 1/2 da superfície do agar, como se mostra<br />
na figura 4. Após a re-inoculação, incubar o recipiente entre<br />
34° C e 37° C com o agar para cima. Continue observando<br />
o recipiente diariamente para ver alguma alteração de cor.<br />
Quando observar alteração de cor, procure colónias microscópicas<br />
típicas (veja secção B. Aparência das colónias).<br />
Figura 4<br />
6. Utilização Opcional do Corante Dienes<br />
O corante Dienes deverá ser utilizado apenas quando o<br />
recipiente já não for mais incubado. O corante Dienes mata<br />
o M. pneumoniae. Uma vez corado, o recipiente pode ser<br />
armazenado durante alguns meses no frigorífico.<br />
Para aplicar o corante Dienes:<br />
a. Abra o recipiente e deite o caldo utilizando uma pipeta.<br />
Descarte o caldo para um contentor de lixo infeccioso.<br />
b. Tenha cuidado para não salpicar e eliminar a cultura da<br />
superfície do agar, suavemente aplique duas ou três gotas<br />
de corante na superficie do agar. Tape o recipiente.<br />
Português 9/11
c. Deixe que o recipiente repouse com o agar para baixo<br />
durante 30 minutos para permitir a difusão do corante no<br />
agar.<br />
d. Examine o recipiente microscopicamente para ver se<br />
houve formação de colónias. O M. pneumoniae retêm<br />
o corante, enquanto que as bactérias descoram apresentando-se<br />
incolores.<br />
INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS<br />
A alteração de cor é um indicador de resultado positivo (na ausência<br />
de contaminação forte), de vermelho para amarelo-alaranjado<br />
e são observadas colónias no agar.<br />
Ao contrário de bactérias e fungos, o M. pneumoniae não causa<br />
turvação do caldo, ainda que em concentrações elevadas. Turvação<br />
forte ou colónias visíveis no agar indicam crescimento de<br />
fungos ou bactérias, o que provoca uma alteração de cor não confiável<br />
e possivelmente o ocultar de colónias de M. pneumoniae.<br />
Um resultado negativo é notificado se não há alteração de<br />
cor dentro dos 10 dias seguintes à re-inoculação (13 dias de<br />
incubação no total).<br />
LIMITAÇÕES<br />
A presença de um número demasiado grande de organismos que<br />
não o M. pneumoniae poderá causar o sobrecrescimento ainda<br />
que se utilizem discos antimicrobianos. Caldo turvo ou colónias<br />
visíveis à vista indicam sobrecrescimento. Bactérias e fungos<br />
podem provocar alteração de cor na ausência de M. pneumoniae.<br />
O sobrecrescimento forte poderá ocultar a presença de colónias<br />
de M. pneumoniae.<br />
A actividade antimicrobiana fica comprometida quando a amostra<br />
é inoculada antes que a dispersão do disco antimicrobiano esteja<br />
completa, ou quando os discos tenham permanecido no recipiente<br />
de Mycotrim <strong>RS</strong> por mais de 24 horas antes de ser inoculado.<br />
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CONTROLE DA QUALIDADE<br />
Cada recipiente de Mycotrim <strong>RS</strong> é incubado e verificado para<br />
contaminação. Cada lote de Mycotrim <strong>RS</strong> é testado para a sua<br />
capacidade de manter o M. pneumoniae (ATCC # 15531) E Acholeplasma<br />
laidlawii (ATCC # 23206). O crescimento destes organismos<br />
deve ser demonstrado em ambos os meios: caldo e agar. A<br />
actividade inibidora dos discos antimicrobianos é testada através<br />
da inoculação de recipientes contendo os discos antimicrobianos<br />
com Staphylococcus aureus (ATCC # 25923), Escherichia coli<br />
(ATCC # 25922) e Candida albicans (ATCC # 10231). A inibição<br />
destes três organismos deve ser demonstrada após 24 horas de<br />
incubação entre 34° C e 37° C.<br />
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RELATED IRVINE SCIENTIFIC PRODUCTS<br />
Catalog #<br />
MYCOTRIM ® GU D300-012<br />
Triphasic Culture System for the detection of<br />
Mycoplasma pneumoniae and Ureaplasma<br />
urealyticum in human genitourinary specimens<br />
MYCOTRIM ® TC T500-000<br />
Triphasic Culture System for the detection of<br />
Mycoplasma in cell culture specimens<br />
MYCOTRANS ® D305-012<br />
For use in the transport of specimens for<br />
Mycoplasma and Ureaplasma culture<br />
Ureaplasma urealyticum Control D301-004<br />
Mycoplasma pneumoniae Control D302-004<br />
MYCOTRIM ® is a registered trademark of <strong>Irvine</strong> <strong>Scientific</strong>.<br />
MYCOTRANS ® is a registered trademark of <strong>Irvine</strong> <strong>Scientific</strong>.
REFERENCES<br />
1. Klein JO, Mycoplasma Infections. Ch. 12, Infectious Diseases<br />
of the Fetus and Newborn Infant:. 3rd Ed. 1990, W.B. Saunders<br />
Company, Philadelphia.<br />
2. Clyde WA, Mycoplasma pneumoniae Respiratory Disease<br />
Symposium: Summation and Significance. Yale J. Biol and<br />
Med. 1983, 56:523-527.<br />
3. Garibaldi RA, Epidemiology of Community-Acquired Respiratory<br />
Tract Infections in Adults: Incidence,Etiology, and Impact.<br />
Am J. of Med. 1985, 78 (Suppl 6B) : 32-37.
European Representative<br />
MPIE<br />
Schutweg 13a<br />
5145 NP Waalwijk, The Netherlands<br />
See instructions<br />
for use.<br />
2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588<br />
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PN 40206 Rev. 5