SERION ELISAantigen - virion\serion

Manufacturer 

Fabricante 

Κατασκευαστής 

Fabricante 

Výrobce 

Institut Virion\Serion GmbH 

Friedrich-Bergius-Ring 19 

D - 97076 Würzburg, Germany 

Telefon: +49 (0) 9 31 / 30 45 0 

Fax: +49 (0) 9 31 / 30 45 100 

E-Mail: dialog@virion-serion.de 

Internet: www.virion-serion.de 

KAL200-2 

SERION ELISA antigen Candida 

YOUR 

GLOBAL 

PARTNER 

IN 

DIAGNOSTICS 

SERION ELISA antigen 

Candida 

Instructions - English 

Instrucciones de empleo - Español 

Oδηγίες χρήσης - Ελληνικά 

Instruções de emprego - Português 

Pokyny - Česky 

(Version/Versión/Έκδοση/Versão/Verze 1.12/09-1)


CONTENTS 

1 INTENDED USE 

2 DIAGNOSTIC RELEVANCE 

3 SERION ELISA antigen - TEST PRINCIPLE 

4 KIT COMPONENTS 

5 MATERIAL REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 

6 STORAGE AND STABILITY 

7 TEST PROCEDURE SERION ELISA antigen 

7.1 General Notes 

7.2 Sample Preparation and Storage 

7.3 Preparation of Kit Reagents 

7.4 Overview - Test Procedure 

7.5 Manual Test Procedure 

7.6 Automated Test Procedure 

7.7 Positive Control / Accuracy Control 

8 TEST EVALUATION 

8.1 Single-Point Quantification with the 4PL Method 

8.2 Criteria of Validity 

8.3 Calculation SERION ELISA antigen Candida 

8.4 Limits of Quantification 

8.5 Borderline Range 

8.6 Interpretation of Results 

8.7 Reference Range of healthy Individuals 

9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS 

9.1 Sensitivity and Specificity 

9.2 Reproducibility 

10 SAFETY MEASURES 

10.1 Statements of Warning 

10.2 Disposal 

11 REFERENCES 

current version No.: V 1.12/09-1 

previous version: -- 

EN 

GR ES 

CZ PT

Pos: 1 /Arbeitsanl eitung en ELISA antigen/Gültig für alle Dokumente/ELISA antigen/Allgemei ne Texte ELISA antigen/Einl eitung " Enzymimmunoassay" C andi da antigen @ 8\mod_1265790547166_18.doc @ 28520 @ 

english 2 


Enzyme-immunoassay for determination of Candida Antigen 

for in vitro diagnostic use 

Pos: 2 /Arbeitsanl eitung en ELISA antigen/Gültig für nur ei n D okument/Bestellnummer n/C andida antigen: Bestell nummer @ 11\mod_1346680555914_18.doc @ 52000 @ 

SERION ELISA antigen Candida Order Nr.: ESR200 

Pos: antigen/Allgemeine 8\mod_1265792390921_18.doc 3 /Arbeitsanleitungen Texte ELISA @ 28662 antigen/Kapitelüberschrift antigen/Gültig @ 1 für alle Dokumente/ELISA 

"Anwendungsbereich" @ 

1 INTENDED USE 

Pos: 4 /Arbeitsanl eitung en ELISA antigen/Gültig für nur ei n D okument/Anwendungsbereich/C andi da antigen: Anwendungsbereich @ 8\mod_1265794146291_18.doc @ 29056 @ 

SERION ELISA antigen Candida is a quantitative and qualitative immunoassay for the 

detection of Candida antigen in human serum or plasma. The assay is recommended for 

the detection of systemic candidosis. 

Pos: 5 /Arbeitsanl eitung en ELISA antigen/Gültig für alle Dokumente/ELISA antigen/Allgemei ne Texte ELISA antigen/Kapitelüberschrift "Diag nostische Bedeutung" @ 8\mod_1265792408092_18.doc @ 28678 @ 1 

2 DIAGNOSTIC RELEVANCE 

Pos: 6 /Arbeitsanl eitung en ELISA antigen/Gültig für nur ei n D okument/Di agnostische Bedeutung/Candida antigen: Diag nostische Bedeutung @ 11\mod_1346939232903_18.doc @ 52277 @ 

Candida albicans is an ubiquitous yeast which, like all Candida species, belongs to the 

family of yeast-like fungi. Apart from the yeast form which primarily causes superficial 

infections, so called pseudo mycelia are a further morphologic manifestation of yeast-like 

fungi. Germ tubes and the development of pseudo mycelia mainly occur in cases of 

systemic mycosis. Candida ssp. produce and excrete a range of destructive enzymes that 

enable the facultative pathogen microorganisms to penetrate mucous membrane barriers 

and blood vessels barriers. 

Candida ssp. are primarily transmitted by smear contamination from person to person. The 

primary portal of entry is the oral cavity. Changes in the fungistatic properties of the skin, 

which are a consequence of a slightly acidic pH value and the antagonistic bacterial flora, 

can facilitate the establishment of superficial candidiasis of the skin surface. Systemic 

mycosis results from colonization of mucous membranes, particularly in the 

gastrointestinal tract. 

Candida ssp. are able to adhere to the epithelia of a variety of mucosal membranes by 

adherence proteins and other cell surface structures. The schematic below shows 

hypothetical steps that may lead to disseminated infections in cases of severe underlying 

conditions. An exact description of the various stages is not practical (Fig. 1).

colonization of the 

nasopharyngeal tract 

entry into 

blood circulation 

english 3 

passing of the 

stomach lumen 

transfer to 

lymphoid system 

invasion of 

multiple organs 

Figure 1: progression of Candida-infections 

transfer to the 

intestine lumen 

persorption of 

Candida - ssp. 

Candidiasis can generally be classified into two major groups whose main characteristics 

are listed in the table below. 

Candida-infections 

superficial deep mycosis (invasive) 

localization skin, mucosa prime organs 

immunocompetence 

of the host 

risk factors pregnancy 

+ +,-/- 

diabetes 

AIDS 

dysfunction of the skin 

deficient oral hygiene 

clinical progression harmless in most cases, 

no danger of life 

chemo therapy 

iatrogene immune suppression 

central vein catheter 

radiotherapy 

high-grade burns 

surgery 

life-threatening in most cases 

therapy effective therapy effectiveness of therapy 

depends on stage of infection 

Table 1: Characteristics of Candida-infections 

EN

The diagnosis of candidiasis on the basis of serological methods is not straight forward: 

On the one hand transient yeast colonization may induce an antibody response, on the 

other hand systemic Candida mycosis in immunosuppressed patients may only lead to 

minor changes in antibody activities. Such situations make critical interpretation of 

serological findings necessary. In addition, systemic Candida-infections may not cause 

typical symptoms. 

Currently it is not possible to conclude that the results of different test systems for anti- 

Candida antibody detection are comparable or even exchangeable. Specificity of detected 

antibodies significantly depends on the test system (ELISA or HAT) or on the antigen 

preparation used. The detection of IgM antibodies with HAT is better than the IgG 

detection due to higher agglutination properties of IgM molecules. HAT mainly detects 

antibodies against cell wall antigens of yeast-like fungi which makes serological 

interpretation even more complex but gives the opportunity for differentiation. Changes in 

antibody concentrations may be detectable with ELISA but not with HAT, making a 

combination of the two techniques advantageous, e.g. in case of decreasing IgM antibody 

activity and simultaneously increasing IgG antibody activity. 

Currently no single technique in isolation allows for a definitive serological diagnosis of 

candidiasis. Surveillance of at risk patients and therapy control requires the use of a 

variety of methods including serology and antigen detection. The SERION ELISA antigen 

Candida test is of particular help in such situations by detecting Candida specific antigen in 

patient samples. 

Pos: 7 /Arbeitsanleitungen ELISA antigen/Gültig für alle Dokumente/ELISA 

antigen/Testprinzip/Testprinzip ELISA antigen @ 8\mod_1265792007310_18.doc @ 

28639 @ 1 

3 SERION ELISA antigen - TEST PRINCIPLE 

The ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) is an immunoassay, which is 

particularly suited to the determination of antibodies and antigens in the field of infectious 

serology. The reaction is based on the specific interaction of antibodies with their 

corresponding antigen. The test strips of the SERION ELISA antigen microtiter plate are 

coated with specific antibodies directed against the pathogen of interest. If antigens in the 

patient´s sample are present, they bind to the fixed antibody. A secondary antibody, which 

has been conjugated with the enzyme peroxidase, detects and binds to the immune 

complex. The colourless substrate hydrogen peroxide (H2O2) and the chromogen tetramethylbenzidine 

(TMB) are converted into a blue coloured product. Addition of stopping 

solution changes the colour to yellow. The signal intensity of this reaction product is 

proportional to the concentration of the antigen in the sample and is measured 

photometrically. 

Pos: 8 /Arbeitsanl eitung en ELISA antigen/Gültig für nur ei n D okument/Inhalt und Z usammensetzung/C andi da antigen: Inhalt und Zusammensetzung @ 11\mod_1346845806738_18.doc @ 52090 @ 1 

english 4

4 KIT COMPONENTS 

Test Components Pieces / 

Volume 

Break apart microtiter test strips each with eight antibody coated single wells, 

(altogether 96) MTP , 

1 frame. 

Standard serum STD , 

Candida albicans antigen in human serum supplemented with fetal calf serum (FCS); 

negative for anti-HIV Ab, HBs-Ag (Hepatitis B-Virus surface antigen) and anti-HCV Ab; 

preservative: < 0.1 % sodium azide. 

Negative control serum NEG , 

Human serum supplemented with fetal calf serum (FCS); 

negative for anti-HIV Ab, HBs-Ag (Hepatitis B-Virus surface antigen) and anti-HCV Ab; 

preservative: < 0.1 % sodium azide. 

Anti-Candida albicans conjugate (ready-to-use) PODCR , 

Anti-Candida albicans antibody conjugated to horseradish-peroxidase; 

stabilised with protein stabilisation solution containing detergent; 

preservative: 0.1 % ProClin® 300. 

Washing solution concentrate (sufficient for 1500 ml) WASH , 

TRIS-buffered salt solution with Tween 20; 30-fold concentrated; 

preservative: < 0.1 % ProClin® 300. 

Dilution buffer SAMB , 

Acid solution without preservative. 

Stopping solution STOP , 

0.5 N sulfuric acid. 

TMB-substrate solution (ready-to-use) TMB , 

TMB-hydrogen peroxide substrate solution; 

preservative: < 0.01 % Kathon CG. 

Quality control certificate with standard curve and evaluation table INFO , 

(quantification of antigens in U/ml). 


antigen/Zusätzlich benötigte Materialien/Zusätzlich benötigte Materialien @ 

8\mod_1265796058727_18.doc @ 29303 @ 1 

english 5 

12 pieces 

3 x 3 ml 

2 x 3 ml 

13 ml 

2 x 25 ml 

15 ml 

13 ml 

13 ml 

2 pieces 

EN

5 MATERIAL REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 

- common laboratory equipment 

- photometer for microtiter plates with filter, wavelength 450 nm, 

recommended reference wavelength 620 nm - 690 nm (e.g. 650 nm) 

- incubator 37 °C 

- heating block 110 °C 

- moist chamber 

- distilled water 

- Click-Clips (order no. VT120) 


antigen/Lagerung und Haltbarkeit/Lagerung und Haltbarkeit @ 

11\mod_1346935956390_18.doc @ 52260 @ 1 

english 6

6 STORAGE AND STABILITY 

Reagent Storage Stability 

Microtiter strips 

(coated with antibody) 

Control sera / 

Standard sera 

Conjugate 

unopened 

Dilution buffer unopened 

after opening at 2 – 8 °C in closed aluminum bag with 

desiccant 

Strips which are not used must be stored dry and air 

tight in the closed aluminum bag. 

english 7 

see expiry date; 

minimum shelf-life: 

4 weeks 

shelf-life in case of 

proper use and 

storage: until expiry 

date 

after opening at 2 – 8 °C see expiry date; 

ready-to-use solution at 2 – 8 °C 

Avoid contamination e.g. by using sterile tips. 

after opening at 2 – 8 °C 

Discard cloudy solutions. 

Washing solution Concentrate after opening at 2 – 8 °C 

TMB substrate 

working dilution at 2 – 8 °C 

working dilution at room temperature 

Bottles used for the working dilution should be 

cleaned regularly. Discard cloudy solutions. 

ready-to-use solution at 2 – 8 °C, 

stored protected from light 

Avoid contamination e.g. by using sterile tips. 

Discard if solution turns blue (extinction at 650 nm 

against aqua dest. > 0.2 OD). 

24 months as of date 

of production 



of production 



of production 

6 months 



of production 

2 weeks 

1 week 



of production 

Stopping solution After opening at room temperature see expiry date 

Pos: 11 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testdurchführ ung/Ü berschrift: D urchführung @ 8\mod_1265792572851_18.doc @ 28750 @ 1 

EN

7 TEST PROCEDURE SERION ELISA antigen 

Pos: 12 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testdurchführ ung/Allgemei ne Hinweise ELISA antig en @ 11\mod_1346845965842_18.doc @ 52107 @ 2 

7.1 General Notes 

Only use SERION ELISA antigen reagents when using SERION ELISA antigen 

immunoassays. The components must not be exchanged for reagents of other 

manufacturers. Standard and control sera as well as the conjugate of SERION ELISA 

antigen immunoassays are defined exclusively for the test kit to be used and must not be 

used in other lots. Dilution buffer, washing solution, substrate and stop solution can be 

used for all SERION ELISA antigen immunoassays irrespective of the lot and the test. 

Unopened, all components of the SERION ELISA antigen tests may, if stored accordingly, 

be used up to the expiry dates given on the labels. Reagents may not be used after date of 

expiry. 

Dilution or alteration of the reagents may result in a loss of sensitivity. 

Avoid exposure of reagents to strong light during storage and incubation. Reagents must 

be tightly closed after use to avoid evaporation and contamination. 

To open the aluminium bag of the microtiter plate please cut off the top of the marked side 

only, in order to guarantee proper resealing. Do not use the strips if the aluminium bag is 

damaged or if the bag with remaining strips and desiccant was not properly resealed. 

Use aseptic techniques when removing aliquots from the reagent tubes to avoid 

contamination. To avoid false positive results ensure not to contact or splash the top-walls 

of wells while pipetting conjugate. Take care not to mix the caps of the bottles and/or vials. 

In particular, the TMB-substrate solution is sensitive to oxidising substances and heavy 

metal ions. It must be stored away from light at all times and only opened in low light 

conditions immediately prior to use. This solution is coloured light blue-green. 

Skin contact with substrate and stop solution should be avoided. 

Reproducibility of test results is dependent on thorough mixing of the reagents. Agitate the 

flasks containing control sera before use and also all samples after dilution (e.g. by using a 

vortex mixer). 

Be sure to pipette carefully and comply with the given incubation times and temperatures. 

Significant time differences between pipetting the first and last well of the microtiter plate 

when dispensing samples and control sera, conjugate or substrate can result in different 

pre-incubation times, which may influence the precision and reproducibility of the results. 

Optimum results can only be achieved if the instructions are strictly followed. 

The SERION ELISA antigen immunoassay is only valid if the lot-specific validation criteria 

on the quality control certificate are fulfilled. 

english 8

Adequate washing avoids test unspecificities. Therefore, the washing procedure should be 

carried out carefully. All of the flat bottom wells should be filled with equal volumes of 

washing buffer. At the end of the procedure ensure that the wells are free of all washing 

buffer in order to avoid uncontrolled dilution effects. Avoid foaming! 

Take care not to damage the inscription (pathogen / AG) on the microtiter test strips during 

washing and aspiration to avoid confusion. 

Pos: 13 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für nur ein Dokument/T estdurchführung/Pr obenvor ber eitung und Lagerung/Candida antigen: Probenvorbereitung und Lager ung @ 11\mod_1346846025700_18.doc @ 52141 @ 2 

7.2 Sample Preparation and Storage 

Lipaemic, hemolytic or icteric samples (serum or plasma) should only be tested with 

caution. Obviously contaminated samples should not be tested. Serum or plasma (EDTA, 

citrate, heparin) collected according to standard laboratory methods are suitable samples. 

Pos: 14 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für nur ein Dokument/T estdurchführung/Pr obenver dünnung/Candida antigen: Probenverdünnung @ 11\mod_1346846162855_18.doc @ 52209 @ 3 

7.2.1 Sample Preparation 

Before running the test, specimens (patient samples, standard and negative control) (V1) 

must be diluted in dilution buffer (V2) as follows: 

V1 + V2 = 3+1 add 300 µl sample (V1) 

english 9 

each to 100 µl dilution buffer (V2) 

After dilution and before pipetting into the microtiter plate, the samples must be mixed 

thoroughly to prepare a homogenous solution. 

Finally, the samples must be heated at 110 °C (+/- 5 °C) for 10 minutes. It is essential to 

keep both the time and temperature stated! Standard reagent vessels are not suitable for 

this thermolysis step and we recommend the use of safe-lock reaction vessels or similar 

vessels with a screw closure. 

Usage of a heating block thermostat requires controlling of the actual temperature by a 

calibrated thermometer. Consider the device-specific pre-heating period of the heating 

block. If necessary, the heating block must be adjusted to the required temperature. 

During thermolysis, a white cloudy precipitate will form and should be removed by 

centrifugation in a pre-cooled (4 °C) table top centrifuge at 10,000 × g for 10 minutes. The 

clear supernatant can then be used in the test. 

Pos: 15 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testdurchführ ung/Probenl agerung ELISA antig en @ 8\mod_1265791164461_18.doc @ 28565 @ 3 

7.2.2 Sample Storage 

The treated patient’s samples should not be stored for more than 24 hours at 2 – 8 °C. 

Untreated samples should not be stored at 2 – 8 °C for more than 7 days. Extended 

storage is possible at ≤ -20 °C. Avoid repeated freezing and thawing of samples. 

Pos: 16 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testdurchführ ung/R eagenzienvorbereitung ELISA antigen @ 11\mod_1346845998930_18.doc @ 52124 @ 2333333 

EN

7.3 Preparation of Kit Reagents 

Bring all reagents to room temperature before testing. 

7.3.1 Microtiter Test Strips 

The microtiter test strips in frames are packed with a desiccant in an aluminum bag. 

Take unrequired cavities out of the frame and put them back into the aluminum bag. 

Close bag carefully to ensure airtight conditions. 

7.3.2 Control Sera / Standard Sera 

Control and standard sera must be diluted with sample buffer and subsequently 

denatured. For each test run – independent of the number of microtiter test strips to 

be used – control and standard sera must be included. The standard sera should be 

set up in duplicate. 

7.3.3 Conjugate (ready-to-use) 

Avoid contamination of the ready-to-use conjugate, e.g. by using sterile tips. 

7.3.4 Wash solution 

Dilute washing buffer concentrate (V1) 1:30 with aqua dest. to a final volume of V2. 

Example: 

7.3.5 TMB Substrate (ready-to-use) 

english 10 

Buffer concentrate (V1) Final volume (V2) 

25 ml 750 ml 

1 ml 30 ml 

Avoid contamination of the ready-to-use substrate solution, e.g. by using sterile tips. 

The TMB substrate is coloured light blue-green and any solutions which exhibit a 

strong colour (extinction at 650 nm against distilled water of >0.2 OD) should be 

discarded. 

7.3.6 Stopping Solution (ready-to-use) 

Pos: 17 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testdurchführ ung/T establauf/Überschrift T establauf @ 8\mod_1265793631810_18.doc @ 28923 @ 2

7.4 Overview - Test Procedure 

Pos: 18 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testdurchführ ung/T establauf/Testablauf Candida antigen @ 11\mod_1346681847716_18.doc @ 52068 @ 

Pos: 19 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für nur ein Dokument/T estdurchführung/Testdurchführ ung/C andi da antigen: Manuelle Testdurchführ ung @ 11\mod_1346846068724_18.doc @ 52158 @ 2 

english 11 


quantitativ 

Preparation of samples, control and standard serum 

Sample dilution 

(Patient samples, control and standard serum) 

300 µl Sample + 100 µl Dilution buffer 

INCUBATION 10 min. / 110 °C 

CENTRIFUGATION 10 min. / 10,000 × g / 4 °C 

Retain supernatant, discard pellet 

 

Add supernatant from samples (100 µl) 

 


moist chamber 

 

WASH (5 x 300 µl DIL WASH ) 

 

Pipette conjugate solution PODCR (100 µl) 

 


moist chamber 

 

WASH (5 x 300 µl DIL WASH ) 

 

Pipette substrate solution TMB (100 µl) 

 


moist chamber 

 

Pipette stop solution STOP (100 µl) 

 

READ EXTINCTION at 450 nm (ref. 650 nm) 

EN

7.5 Manual Test Procedure 

1. Pretreatment of samples (patient samples, standard and control serum) as described. 

2. Place the required number of cavities in the frame and prepare a protocol sheet. 

3. Add each 100 µl of the supernatants from the standard serum (in duplicate), 

negative control and patient samples into the appropriate wells of microtiter test 

strips. Spare one well for substrate blank, e.g.: 

Candida antigen quantitative 

cavity A1 Substrate blank 

cavity B1 Negative control 

cavity C1 Standard serum 

cavity D1 Standard serum 

cavity E1 Patient sample 1.... 

4. Sample incubation for 60 minutes (+/- 3 min.) at 37 °C (+/- 1 °C) in moist chamber. 

5. After incubation wash all wells with washing solution (by automated washer or 

manually): 

- aspirate or shake out the incubation solution 

- fill each well with 300 µl washing solution 

- aspirate or shake out the washing buffer 

- repeat the washing procedure 4 times (altogether 5 times!) 

- dry by tapping the microtiter plate on a paper towel 

6. Addition of conjugate 

Add 100 µl of the ready-to-use conjugate into the appropriate wells (except 

substrate blank). 

7. Conjugate incubation for 60 minutes (+/- 3 min.) at 37 °C (+/- 1 °C) in moist 

chamber. 

8. After incubation wash all wells with washing solution (see above). 

9. Addition of substrate 

Add 100 µl of ready-to-use TMB-substrate solution into each well (including well for 

substrate blank!). 

10. Substrate incubation for 30 minutes (+/- 1 min.) at 37 °C (+/- 1 °C), protected from 

light in moist chamber. 

11. Stopping of the reaction 

Add 100 µl stopping solution into each well. Agitate the microtiter plate gently to mix. 

12. Read extinction 

Read optical density (OD) within 60 minutes at 450 nm against substrate blank, 

reference wavelength between 620 nm and 690 nm (e.g. 650 nm). 

Pos: 20 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testdurchführ ung/Automatische T estdurchführung @ 8\mod_1265792441716_18.doc @ 28694 @ 2 

english 12

7.6 Automated Test Procedure 

SERION ELISA are suited for processing on automats and evaluated for use with 

Immunomat TM and Gemini. The automated processing is performed analogous to manual 

use. Please note, that under special working-conditions internal laboratory adaptations of 

the incubation times may be necessary. 

Pos: 21 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testdurchführ ung/Positi vkontrolle / Richtig keitskontrolle @ 9\mod_1280219364971_18.doc @ 34540 @ 2 

7.7 Positive Control / Accuracy Control 

For the periodic verification of the test method, in order to fulfil the requirements of 

laboratory internal quality management systems, we recommend using SERION ELISA 

controls to determine precision and accuracy of SERION ELISA antigen test runs. The use 

of SERION ELISA controls is described in specific instruction manuals. 

Pos: 22 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testauswertung/Kapitelüberschrift: T ESTAU SWERTUN G + Erreger @ 8\mod_1265792998663_18.doc @ 28845 @ 1 

english 13 

EN

8 TEST EVALUATION 


Pos: 23 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testauswertung/T estauswertung: Ein- Punkt- Quantifizier ung @ 11\mod_1346846096430_18.doc @ 52175 @ 2 

8.1 Single-Point Quantification with the 4PL Method 

Optimised assignment of extinction signals to quantitative values is guaranteed by using 

non-linear functions, which adjust a sigmoide curve without any further transformation to 

OD-values. Determination of antigen concentrations with the SERION ELISA antigen is 

carried out by the 4 parameter logistic-log-model (4 PL) which is ideal for exact curvefitting. 

It is based on the formula: 

OD = A + 

1 + e 

english 14 

D - A 

B(C - ln Conc.) 

The parameters A, B, C, and D are representative for the exact shape of the curve: 

1. lower asymptote parameter A 

2. slope of the curve parameter B 

3. turning point parameter C 

4. upper asymptote parameter D 

For each lot the standard curve is evaluated by Institut Virion\Serion GmbH (Würzburg, 

Germany) in repeated test runs under optimal conditions. Time consuming and cost 

intensive construction of the standard curve by the user is not necessary. 

For evaluation of antigen concentrations a lot specific standard curve as well as a lot 

specific evaluation table is included with each SERION ELISA antigen test kit. The 

evaluation software SERION evaluate as well as the Microsoft ® Excel-based software tool 

SERION activity are available on request. 

To compensate for normal test variations and also for test run control a standard serum is 

used in each individual test run. For this control serum a reference value with a validity 

range is determined by the quality control of the producer. Within this range a correct 

quantification of antigen concentration is ensured. 

Pos: 24 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testauswertung/T estg ültig keitskriteri en @ 8\mod_1265793547923_18.doc @ 28907 @ 2

8.2 Criteria of Validity 

- The substrate blank must be < 0.25 OD. 

- The negative control must produce a negative test result. 

- By use of quantitative SERION ELISA antigen tests the mean OD-value (after 

subtraction of the substrate blank!) of the standard serum must be within the validity 

range, which is given on the lot specific quality control certificate. 

- The variation of OD-values of the standard serum may not be higher than 20 %. 

If these criteria are not met, the test is not valid and must be repeated. 

Pos: 25 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testauswertung/Auswertung: Ü berschrift @ 8\mod_1265792620271_18.doc @ 28766 @ 2 

8.3 Calculation SERION ELISA antigen Candida 

Pos: 26 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testauswertung/Nichtautomatisi erte Auswertung ELISA antigen @ 11\mod_1346846114323_18.doc @ 52192 @ 3 

8.3.1 Non-automated Evaluation 

For the SERION ELISA antigen test evaluation a lot-specific quality control certificate with 

standard curve and an evaluation table is included in the test kit. The substrate blank must 

be substracted from all OD values prior to evaluation. 

antigen/Testauswertung/Testauswertung 11\mod_1346849110626_18.doc Pos: 27 /Arbeitsanleitungen ELISA @ 52243 antigen/Gültig @ Methoden für @ alle Dokumente/ELISA 

Method 1: Qualitative Evaluation 

To fix the cut-off ranges multiply the mean value of the measured standard OD with the 

numerical data of the quality control certificate (see special case formulas), e.g.: 

OD = 0.502 x MW(STD) with upper cut-off 

OD = 0.352 x MW(STD) with lower cut-off 

If the measured mean absorbance value of the standard serum is 0.970 OD, the range of 

the cut-off is in between 0.341 - 0.487 OD. 

Method 2: Continuous Determination of Antigen Activities using the Standard Curve 

So called interassay variations (day to day deviations and laboratory to laboratory 

deviations) are compensated by multiplication of the current measured value obtained with 

a patient’s sample with the correction factor F. This factor is calculated as follows: 

F = 

english 15 

OD-reference value (of standard serum) 

OD-current value (of standard serum) 

EN

The procedure is necessary to adjust the current test level of the user with the lot-specific 

standard curve. First, daily deviations have to be corrected by calculating the correction 

factor F. 

1. The mean of the two OD-values of the standard serum has to be calculated and 

checked that it is within the given validity range. 

2. Calculation of the factor F: the given reference value is divided by the mean of the 

extinction of the standard serum: 

F = reference value extinction STD serum / mean value extinction STD serum. 

3. All measured values of patient samples are multiplied by F. 

4. Antigen activities in IU/ml or U/ml can be determined from the standard curve with 

the corrected values. 

Pos: 28 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testauswertung/Automatische Auswertung @ 8\mod_1265792721689_18.doc @ 28782 @ 3 

8.3.2 Automatic Test Evaluation with Software SERION evaluate 

After input of the four parameters and the reference value of the standard serum, antigen 

activities are calculated online from processed and measured SERION ELISA antigen test 

runs by the evaluation software SERION evaluate. 

If the optical density of the standard is out of the valid range, the following message will 

appear. 

„Standard values out of ranges in following groups: Group 1-24.” or 

„Standard values differ more than 20 % in following groups: Group 1-24.” 

In such cases the test run is invalid and should be repeated. 

Parameters and reference value need to be changed only if there is a change of lot 

(evaluation table shows parameters and reference values). Correct input of the lot specific 

data can be checked on the basis of the standard serum activity (in IU/ml or U/ml) 

assigned to the standard serum. The calculated mean value of the units has to correspond 

to the unit value indicated on the lot specific certificate. There is an automatic correction of 

the measured values. In the standard version the printout displays the following: 

Pos: 29 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testauswertung/Quantifizi erungsgrenzen @ 8\mod_1265793123986_18.doc @ 28861 @ 2 

Sample code 

OD-value 

U/ml 

Evaluation 

english 16

8.4 Limits of Quantification 

The limits of quantification are specified on the quality control certificate of the SERION 

ELISA antigen test. The linearity of dilution within this range has been demonstrated in 

comprehensive evaluation studies. In case a patient sample shows a test result above the 

upper limit of quantification, the sample may be tested at a higher dilution. The thereby 

determined antigen activity must be multiplied by the additional dilution factor. 

Pos: 30 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testauswertung/Grenzwertbereich @ 9\mod_1280134439293_18.doc @ 34518 @ 2 

8.5 Borderline Range 

The borderline range of the SERION ELISA antigen Candida test is specified on the 

quality control certificate and indicates the range for borderline test results. Values 

obtained, when testing a patient’s sample, which fall below this range indicate a negative 

test result; values above the borderline range are interpreted positive. In cases where the 

results are within the borderline range a definitive interpretation of the result is not 

possible. In such cases, the test should be repeated in parallel with a follow-up sample 

taken one to two weeks later (serum pair). 

Pos: 31 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testauswertung/Kapitelüberschrift: Inter pretati on der Ergebnisse @ 8\mod_1265792956649_18.doc @ 28813 @ 2 

8.6 Interpretation of Results 

Pos: 32 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für nur ein Dokument/T estauswertung/Candi da antigen/Candi da antig en: Interpr etation der Ergebni sse @ 11\mod_1346846245660_18.doc @ 52226 @ 

Positive test results for patient samples indicate a Candida fungemia. Results can only be 

interpreted in combination with the clinical picture and other detection methods. 

A result can be considered as positive when at least 2.6 units are measured in the test. 

Such a result indicates that the sample contains the quantity of Mannan that is associated 

with 2.6 ng of Candida protein. However, it cannot distinguish between live or dead 

organisms, respectively. 

Negative test results do not exclude an acute infection, especially if high antibody titers are 

found. In such cases it may be that the antigen is completely masked by antibodies and 

even the denaturing procedure during sample preparation is not sufficient to allow 

detection of the antigen. In addition, the point in time during an infection when a sample is 

obtained, an unsuitable sample, poor sample preparation and storage can all lead to a 

negative result. 

Pos: 33 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testauswertung/Kapitelüberschrift: R eferenzber eich gesunder Pr obanden @ 8\mod_1265792966477_18.doc @ 28829 @ 2 

8.7 Reference Range of healthy Individuals 

Pos: 34 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für nur ein Dokument/T estauswertung/Candi da antigen/Candi da antig en: R efer enzbereich g esunder Probanden @ 11\mod_1346681759863_18.doc @ 52051 @ 

Testing of random blood donor sera, collected in the region of southern Germany, with the 

SERION ELISA antigen Candida test resulted in the following distribution. From 103 sera 

tested with the SERION ELISA antigen Candida test, 92 (89.3 %) were negative, six sera 

(5.8 %) gave a positive result and five samples (4.9 %) were determined to be borderline. 

Pos: 35 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Leistungsmer kmal e/Kapitelüberschrift Leistungsmer kmale @ 8\mod_1265793732010_18.doc @ 28956 @ 1 

english 17 

EN

9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS 

Pos: 36 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Leistungsmer kmal e/Kapitelüberschrift: Sensiti vi tät und Spezifität @ 8\mod_1265793737103_18.doc @ 28988 @ 2 

9.1 Sensitivity and Specificity 

Pos: 37 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für nur ein Dokument/Leistungsmer kmale/Candi da antig en/Candi da antig en: Sensiti vität und Spezifität @ 11\mod_1346681729877_18.doc @ 52017 @ 

The SERION ELISA antigen Candida test was validated by the analysis of 148 serum 

samples from blood donors and 93 specimens from patients, who showed signs of 

candidiasis during intensive care treatment, in comparison to the results obtained with a 

commercially avaliable assay of a leading European manufacturer. Sera classified as 

borderline were not included in the calculation of sensitivity and specificity values. 

Performance Characteristics Sensitivity Specificity 

SERION ELISA antigen Candida > 99.9 % 97.8 % 

In another internal study, cross-reactivity with the species Candida guillermondii, Candida 

glabrata, Candida krusei, Candida parapsilosis and Candida tropicalis with the SERION 

ELISA antigen Candida was demonstrated in order to guarantee a comprehensive 

Candida diagnosis. 

Due to a similiarity of mannan with hydroxyethylstarch (HES), which is used in plasma 

expanders for treatment of circulatory failure (hypovolemic, hemorrhagic and septic 

shock), potential cross-reactivity was assessed. However, no cross-reaction with HES was 

measureable when using the SERION ELISA antigen Candida test. 

Pos: 38 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Leistungsmer kmal e/Kapitelüberschrift Pr äzisi on @ 8\mod_1265793734510_18.doc @ 28972 @ 2 

9.2 Reproducibility 

Pos: 39 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für nur ein Dokument/Leistungsmer kmale/Candi da antig en/Candi da antig en: Pr äzision @ 11\mod_1346681737927_18.doc @ 52034 @ 

Intraassay reproducibility was determined by testing sera of different reactivities 20 times 

in one test run. Interassay reproducibility was determined by testing sera of different 

reactivities in 10 independent test runs. 

english 18 

Standard deviation 

Coefficient of Variation (CV %) = x 100 

SERION ELISA antigen Candida: 

Sample 

Mean Value 

(OD) 

Intraassay 

(CV %) 

Mean value 

Mean Value 

(OD) 

Interassay 

(CV %) 

negative 0.223 9.6 0.225 7.3 

borderline 0.507 2.4 0.476 5.3 

positive 1.413 2.5 1.356 2.7 

positive 2.851 2.0 2.442 8.1

Pos: 40 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Allgemeine T exte ELISA antigen/Sicherheitsmaßnahmen @ 8\mod_1265797262616_18.doc @ 29413 @ 122 

10 SAFETY MEASURES 

10.1 Statements of Warning 

The SERION ELISA antigen is designed for use by qualified personnel who are familiar 

with good laboratory practice. 

All kit reagents and human specimens should be handled carefully, using established good 

laboratory practice. 

- This kit contains human blood components. Although all control- and cut-off sera 

have been tested and found negative for anti-HIV-ab, HBs-Ag (Hepatitis B-Virussurface 

Antigen) and anti-HCV-ab, they should be considered potentially infectious. 

- Do not pipette by mouth. 

- Do not smoke, eat or drink in areas in which specimens or kit reagents are handled. 

- Wear disposable gloves, laboratory coat and safety glasses while handling kit 

reagents or specimens. Wash hands thoroughly afterwards. 

- Patient’s material and other potentially infectious material should be 

decontaminated after the test run. 

- Reagents should be stored safely and be unaccessible to unauthorized access e.g. 

children. 

10.2 Disposal 

Please observe the relevant statutory requirements! 

Pos: 41 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Liter atur /Kapi tel überschrift: Literatur @ 8\mod_1265793744978_18.doc @ 29004 @ 1 

english 19 

EN

11 REFERENCES 

Pos: 42 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für nur ein Dokument/Liter atur/C andida antigen: Literatur @ 8\mod_1265797355862_0.doc @ 29429 @ 

[1] Fegeler, W. (1992) Möglichkeiten einer differenzierten Candida-Serologie. 

Pilzdialog 4, 61-2. 

[2] Fegeler, W., Kipp, F. (2004) Candida- und Aspergillus-Antikörper-ELISA – 

Erwartungs-werte positiver Antikörpernachweise aus Seren der klinischmykologischen 

Routine-diagnostik. Mycoses 47, 41–7. 

[3] Fukazawa, Y. (1989) Antigenic structure of Candida albicans. Immunochemical 

basis of the serologic specificity of the mannans in yeasts. Immunol. Serol. 47, 37- 

62. 

[4] Jones, J.M. (1990) Laboratory Diagnosis of Invasive Candidiasis. Clin. Microbiol. 

Rev. 3, 32-45. 

[5] Matthews, R.C., Burnie, J.P., Tabaqchali, S. (1987) Isolation of Immunodominant 

Antigens from Sera of Patient with Systemic Candidiasis and Characterization of 

Serological Response to Candida albicans. J. Clin. Microbiol. 25, 230-7. 

[6] Müllensiefen, M., Ringelmann, R. (1991) Labor-Diagnostik systemischer 

Candidosen. Lab. med. 15, 410-3. 

[7] Repentigny, L. (1989) Serological Techniques for Diagnosis of Fungal Infections. 

Eur. J. Clin. Microbio. Infec. 8, 362-75. 

[8] Robert Koch-Institut (2008) Epidemiologisches Bulletin 29. 

[9] Ruhnke, M., Rosseau, S., Graf, B. (2004) Invasive Pilzinfektionen auf der Intensivstationen. 

Arzneimitteltherapie 22, 360-70. 

[10] Rüchel, R., Debusmann, F. (2008) Serologie in der Diagnostik von Mykosen. 

Chemother. J. 17, 264-6. 

[11] Sendid, B., Poirot, J.L., Tabouret, M., Bonnin, A., Caillot, D., Camus, D., Poulain, D. 

(2002) Combined detection of mannanaemia and antimannan antibodies as a 

strategy for the diagnosis of systemic infection caused by pathogenic Candida 

species. Med. Microbiol. 51, 433-42. 

[12] Sendid, B. et al. (2006) Candidaemia and antifungal therapy in a French University 

Hospital: rough trends over a decade and possible links. Infect. Dis. 6, 80. 

[13] Tietz, H.-J., Tausch, I. (1993) Differenzierte Candidaserologie auf dem Prüfstand. 


[14] Walsh, T.J. et al. (1991) Detection of Circulating Candida Enolase by Immunoassay 

in Patients with Cancer and Invasive Candidiasis. New Engl. J. Med. 324, 1026-31. 

[15] Werle, E., Kappe, R., Fiehn, W., Sonntag, H.-G. (1994) Nachweis von Anti- 

Candida-Antikörpern der Klassen IgM, IgG und IgA mittels Enymimmunoassays in 

sequentiellen Serumproben hospitalisierter Patienten. Mycoses 36, 71-8. 

[16] Zöller, L., Krämer, I., Kappe, R., Sonntag, H.G. (1991) Enzyme Immuno Assay for 

Invasive Candida Infections: Reactivity of somatic Antigens of Candida albicans. J. 

Clin. Microbiol. 29, 1860-7. 

=== Ende der Liste für T extmar ke Inhalt === 

english 20


CONTENIDO 

1 USO PREVISTO 

2 PERTINENCIA DIAGNÓSTICA 

3 SERION ELISA antigen – PRINCIPIO DE LA PRUEBA 

4 COMPONENTES DEL KIT 

5 MATERIAL NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO 

6 CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD 

7 PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA SERION ELISA antigen 

7.1 Notas generales 

7.2 Preparación y conservación de la muestra 

7.3 Preparación de reactivos del kit 

7.4 Visión general- procedimiento de la prueba 

7.5 Procedimiento de pruebas manual 

7.6 Procedimiento automatizado 

7.7 Control positivo / control de exactitud 

8 EVALUACIÓN DE LAS PRUEBAS 

8.1 Cuantificación de punto simple con el método 4PL 

8.2 Criterios de validez 

8.3 Cálculos del SERION ELISA antigen Candida 

8.4 Límites de cuantificación 

8.5 Intervalo dudoso 

8.6 Interpretación de resultados 

8.7 Intervalos de referencia de individuos sanos 

9 CARACTERÍSTICAS DE FUNCIONAMIENTO 

9.1 Sensibilidad y especificidad 

9.2 Reproducibilidad 

10 MEDIDAS DE SEGURIDAD 

10.1 Declaraciones de advertencia 

10.2 Eliminación 

11 BIBLIOGRAFÍA 

Nº de la versión actual: V 1.12/09-1 

Versión previa: -- 

ES


español 2 


Enzimoinmunoensayo para la determinación de antígeno de Candida 

Para uso diagnóstico in vitro 


SERION ELISA antigen Candida Nº de pedido: ESR200 

Pos: 3 /Arbeitsanl eitung en ELISA antigen/Gültig für alle Dokumente/ELISA antigen/Allgemei ne Texte ELISA antigen/Kapitelüberschrift " Anwendungsber eich" @ 8\mod_1265792390921_28.doc @ 28664 @ 1 

1 USO PREVISTO 


SERION ELISA antigen Candida es un inmunoensayo cuantitativo y cualitativo para la 

detección de antígeno de Candida en el suero humano o plasma. El ensayo está 

recomendado para la detección de candidiasis sistémica. 


2 PERTINENCIA DIAGNÓSTICA 


Candida albicans es un hongo ubicuo que, como todas las especies de Candida, 

pertenece a la familia de los hongos de tipo de levadura. Dejando aparte la forma de 

hongo que causa principalmente infecciones superficiales, los así llamados 

pseudomicelios son otra manifestación morfológica de los hongos de tipo levadura. En 

casos de micosis sistémica aparecen principalmente tubos germinales y el desarrollo de 

pseudomicelios. Candida produce y excreta una serie de enzimas destructoras que 

capacitan al posible microorganismo patógeno para penetrar en los vasos sanguíneos y 

las barreras de las mucosas. 

Las especies Candida ssp. se transmiten principalmente mediante contaminación por 

suciedad de una persona a otra, siendo la principal vía de entrada la cavidad oral. Los 

cambios en las propiedades fungistáticas de la piel, que son una consecuencia del valor 

pH ligeramente ácido y de la flora bacteriana antagonista, pueden facilitar el 

establecimiento de candidiasis superficial en la superficie de la piel. La micosis sistémica 

es el resultado de la colonización de las membranas mucosas y en particular del tracto 

gastrointestinal. 

Candida ssp. puede adherirse a los epitelios de una gama de membranas mucosas 

mediante proteínas de adherencia y a otras estructuras de la superficie celular. El 

esquema a continuación muestra los pasos hipotéticos que pueden conducir a infecciones 

diseminadas en caso de condiciones subyacentes severas. Una descripción exacta de los 

diversos estadíos no es práctica (figura 1).

Colonización del 

tracto nasofaríngeo 

entrada en la 

circulación sanguínea 

Figura 1: progresión de infecciones por cándida 

español 3 

Paso al lumen 

estomacal 

transferencia al 

sistema linfático 

invasión de 

múltiples 

órganos 

transferencia al 

lumen intestinal 

persopción de 

células de 

cándida 

La candidiasis se puede clasificar por lo general en dos grupos principales cuyas 

características más importantes se enumeran en la tabla a continuación. 

infecciones por Cándida 

superficial micosis profunda (invasiva) 

localización piel, mucosas órganos principales 

inmunocompetencia 

del hospedador 

factores de riesgo embarazo 

+ +,-/- 

diabetes 

SIDA 

disfunción de la piel 

deficiente higiene bucal 

progresión clínica inocuo en la mayoría de los casos, 

no es potencialmente mortal 

quimioterapia 

inmunosupresión iatrogénica 

catéter venoso central 

radioterapia 

quemaduras de alto grado 

cirugía 

potencialmente mortal en la 

mayoría de los casos, 

tratamiento tratamiento eficaz la eficacia del tratamiento 

depende del estadío de la 

infección 

Tabla 1: Características de las infecciones por Cándida 

ES

El diagnóstico de una candidiasis basándose en métodos serológicos no es fácil en 

absoluto. Por un lado la colonización pasajera por el hongo puede inducir una respuesta 

de anticuerpos, mientras que, por otro lado, la micosis sistémica por Candida en pacientes 

inmunodeprimidos puede dar como resultado únicamente cambios mínimos en las 

actividades de los anticuerpos. Tales situaciones hacen necesaria la interpretación crítica 

de los resultados serológicos. Además, las infecciones sistémicas por Candida pueden no 

producir síntomas típicos. 

Actualmente no es posible concluir que los resultados de diferentes sistemas de pruebas 

para la detección de anticuerpos de Candida sean comparables o siquiera 

intercambiables. La especificidad de los anticuerpos detectados depende 

significativamente del sistema de pruebas (ELISA o HAT) o de la preparación de 

antígenos utilizados. La detección de anticuerpos IgM con HAT es mejor que la detección 

de IgG debido a las propiedades de aglutinación mayores de las moléculas de IgM. HAT 

detecta principalmente anticuerpos frente a antígenos de la pared celular de hongos de 

tipo levadura lo que hace la interpretación serológica aún más compleja pero proporciona 

la oportunidad de una diferenciación. 

Los cambios en las concentraciones de anticuerpos pueden ser detectables con ELISA 

pero no con HAT, haciendo ventajosa una combinación de ambas técnicas, p.ej. en caso 

de disminución de la actividad de anticuerpo IgM y simultáneamente aumento de la 

actividad de anticuerpo IgG. 

En la actualidad no existe una técnica única en aislamiento para un diagnóstico serológico 

definitivo de la candidiasis. La vigilancia de los pacientes en riesgo y el control de la 

terapia requieren el uso de diversos métodos, incluida la serología y la detección de 

antígenos. La prueba SERION ELISA antigen Candida resulta de particular ayuda en tales 

situaciones gracias a la detección de antígenos específicos de Candida en muestras de 

pacientes. 

Pos: antigen/Testprinzip/Testprinzip 28641 7 @ /Arbeitsanleitungen 1 

ELISA ELISA antigen/Gültig antigen @ für 8\mod_1265792007310_28.doc alle Dokumente/ELISA @ 

3 SERION ELISA antigen – PRINCIPIO DE LA PRUEBA 

El ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) es un inmunoensayo, que es 

particularmente apropiado para la determinación de anticuerpos y antígenos en el campo 

de la serología de las enfermedades infecciosas. La reacción está basada en la 

interacción específica de los anticuerpos con su antígeno correspondiente. Las tiras de 

prueba de la placa de microtitulación SERION ELISA antigen están recubiertas con 

anticuerpos específicos dirigidos frente al patógeno de interés. Si hay presencia de 

antígenos en la muestra del paciente, se unen al anticuerpo fijado. Un anticuerpo 

secundario, que ha sido conjugado con la enzima peroxidasa, detecta el complejo inmune 

y se une a éste. El sustrato incoloro del peróxido de hidrógeno (H2O2) y el cromógeno 

tetrametilbenzidina (TMB) se convierten en un producto de color azul. La adición de 

solución de parada cambia el color a amarillo. La intensidad de la señal de este producto 

de reacción es proporcional a la concentración del antígeno en la muestra y se mide por 

fotometría. 

Zusammensetzung/Candida 11\mod_1346845806738_28.doc Pos: 8 /Arbeitsanleitungen ELISA antigen: @ 52092 antigen/Gültig Inhalt @ 1 

und Zusammensetzung für nur ein Dokument/Inhalt @ und 

español 4

4 COMPONENTES DEL KIT 

Componentes de la prueba partes / 

Volumen 

Pocillos de microtitulación en tiras separables, cada una de ellas con ocho 

pocillos individuales recubiertos de anticuerpo 

(En total son 96) MTP , 

1 bastidor. 

Suero patrón STD , 

Antígeno de Candida albicans en suero humano complementado con suero fetal de 

ternera (FCS) 

negativo para Ac anti-VIH, Acs HB (HBs-Ag, antígeno de superficie del virus de la 

hepatitis B) y Ac anti-VHC; 

conservante: azida sódica < 0,1 %. 

Suero control negativo NEG , 

Suero humano complementado con suero fetal de ternera (FCS) 

negativo para Ac anti-VIH, Acs HB (HBs-Ag, antígeno de superficie del virus de la 

hepatitis B) y Ac anti-VHC; 

conservante: azida sódica < 0,1 %. 

Conjugado anti-Candida albicans (listo para usar) PODCR , 

Conjugado de anticuerpo anti-Candida albicans con peroxidasa de rábano picante; 

estabilizado con solución de estabilización de proteínas que contiene detergente; 

conservante: ProClin® 300 0,1 %. 

Concentrado de dilución de lavado (suficiente para 1500 ml) WASH , 

Solución salina tamponada TRIS con Tween 20, concentración 30x 

conservante: ProClin® 300 < 0,1 %. 

Solución amortiguadora de dilución SAMB , 

Solución ácida sin conservantes. 

Solución de parada STOP , 

Ácido sulfúrico 0,5 N. 

Solución sustrato TMB (listo para usar) TMB , 

Solución sustrato peróxido de hidrógeno TMB, 

conservante: Kathon CG < 0,01 %. 

Certificado de control de calidad con curva patrón y tabla de evaluación INFO , 

(cuantificación de antígenos en U/ml). 



8\mod_1265796058727_28.doc @ 29305 @ 1 

español 5 

12 partes 

3 x 3 ml 

2 x 3 ml 

13 ml 

2 x 25 ml 

15 ml 

13 ml 

13 ml 

2 partes 

ES

5 MATERIAL NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO 

- equipo habitual de laboratorio 

- fotómetro para placas de microtitulación con filtro, longitud de onda 450 nm, 

longitud de onda de referencia recomendada 620 nm - 690 nm (p.ej., 650 nm) 

- incubador a 37 °C 

- bloque térmico 110 °C 

- cámara de humectación 

- agua destilada 

- Clips de cierre por presión (Click-Clips, nº de pedido VT120) 



11\mod_1346935956390_28.doc @ 52262 @ 1 

español 6

6 CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD 

Reactivo Conservación Estabilidad 

Tiras de 

microtitulación 

(recubiertas con 

anticuerpo) 

Sueros control / 

Sueros patrón 

sin abrir 

tras la apertura entre 2 – 8 °C en una bolsa de 

aluminio cerrada con desecante 

Las tiras que no se utilizan se deben conservar secas 

y herméticamente cerradas en la bolsa de aluminio 

cerrada. 

español 7 

ver fecha de caducidad; 

período de conservación 

mínimo: 4 semanas 

período de conservación 

en caso de utilización y 

conservación adecuadas 

hasta la fecha de 

caducidad 

tras la apertura entre 2 – 8 °C ver fecha de caducidad; 

Conjugado solución lista para usar entre 2 – 8 °C 

Solución 

amortiguadora de 

dilución 

Evite la contaminación p.ej., utilizando puntas 

estériles. 

sin abrir 

tras la apertura entre 2 – 8 °C 

Deseche las soluciones si están turbias 

Solución de lavado Concentrado tras la apertura entre 2 – 8 °C 

dilución de trabajo entre 2 – 8 °C 

dilución de trabajo a temperatura ambiente 

Los frascos utilizados para la dilución de trabajo se 

deben limpiar regularmente. Deseche las soluciones 

si están turbias 

Sustrato TMB solución lista para usar entre 2 – 8 °C, 

conservar protegida de la luz 

Evite la contaminación p.ej., utilizando puntas 

estériles. 

Desechar si la solución se vuelve azul (extinción a 

650 nm frente al agua destilada > 0,2 DO). 

24 meses desde la 

fecha de producción 







6 meses 




2 semanas; 

1 semana 




Solución de parada Tras la apertura a temperatura ambiente ver fecha de caducidad 


ES

7 PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA SERION ELISA antigen 


7.1 Notas generales 

Utilice únicamente reactivos SERION ELISA antigen al utilizar inmunoensayos SERION 

ELISA antigen. Los componentes no deben intercambiarse con reactivos de otros 

fabricantes. Los sueros patrón y control, así como el conjugado de los inmunoensayos 

SERION ELISA antigen están definidos exclusivamente para el kit de pruebas que se va a 

utilizar y no deben utilizarse en otros lotes. 

La solución amortiguadora de dilución, la solución de lavado, el sustrato y la solución de 

parada se pueden utilizar para todos los inmunoensayos SERION ELISA antigen 

independientemente del lote y de la prueba. 

Si no han sido abiertos, todos los componentes de las pruebas SERION ELISA antigen 

pueden, si se conservan como corresponde, ser utilizados hasta las fechas de caducidad 

proporcionadas en las etiquetas. Los reactivos no se pueden utilizar después de la fecha 

de caducidad. 

La dilución o alteración de los reactivos puede dar como resultado una pérdida de 

sensibilidad. 

Evite la exposición de los reactivos a la luz intensa durante la conservación e incubación. 

Los reactivos deben estar firmemente cerrados tras su uso para evitar evaporación y 

contaminación. 

Para abrir la bolsa de aluminio de la placa de microtitulación, corte la parte superior del 

lado marcado únicamente, para garantizar poder cerrarla de nuevo adecuadamente. No 

utilice las tiras si la bolsa de aluminio está dañada o si la bolsa con las tiras restantes y el 

desecante no ha sido cerrada de nuevo adecuadamente. 

Utilice técnicas asépticas al retirar alícuotas de los tubos de reactivos para evitar la 

contaminación. Para evitar resultados falsos positivos, asegúrese de no entrar en contacto 

o salpicar las paredes superiores de los pocillos mientras se pipetea el conjugado. Tenga 

cuidado para no mezclar los tapones de los frascos y/o viales. 

En particular, la solución de sustrato TMB es sensible a sustancias oxidantes y a iones 

metálicos pesados. Se debe conservar protegida de la luz en todo momento y abrir 

solamente en condiciones de baja luminosidad inmediatamente antes de su uso. Esta 

solución tiene un color azul-verde claro. 

Se deberá evitar el contacto del sustrato y la solución de parada con la piel. 

La reproducibilidad de los resultados de las pruebas es dependiente de una mezcla a 

fondo de los reactivos. Agite los matraces que contienen sueros control antes de usar 

también todas las muestras tras la dilución (por ejemplo, utilizando un mezclador de 

vórtice). 

español 8

Asegúrese de pipetear con cuidado y respetar los tiempos y temperaturas de incubación 

proporcionados. Diferencias significativas de tiempos entre el pipeteo del primer y el 

último pocillo de la placa de microtitulación al dispensar muestras de sueros control, 

conjugado o sustrato pueden dar como resultado diferentes tiempos de preincubación, lo 

que puede influir en la precisión y reproducibilidad de los resultados. 

Solamente se pueden lograr resultados óptimos si se siguen estrictamente las 

instrucciones. 

El inmunoensayo SERION ELISA antigen es válido únicamente si se cumplen los criterios 

de validación específicos del lote en el certificado de control de calidad. 

Un lavado adecuado evita la falta de especificidad de la prueba. Por lo tanto, el 

procedimiento de lavado se debe llevar a cabo cuidadosamente. Todos los pocillos de 

fondo plano se deben rellenar con volúmenes iguales de solución amortiguadora de 

lavado. Al final del procedimiento asegúrese de que los pocillos no tienen nada de 

solución amortiguadora de lavado para evitar efectos de dilución no controlados. ¡Evite la 

formación de espuma! 

Tenga cuidado para no dañar la inscripción (patógeno / AG) en las tiras de prueba de 

microtitulación durante el lavado y aspiración para evitar confusiones. 


7.2 Preparación y conservación de la muestra 

Las muestras lipémicas, hemolíticas o ictéricas (Suero o plasma) únicamente deben 

analizarse con precaución. No se deben realizar pruebas de muestras evidentemente 

contaminadas. El suero o plasma (EDTA, citrato, heparina) recogido de acuerdo con 

métodos normalizados de laboratorio son muestras apropiadas. 


español 9 

ES

7.2.1 Preparación de las muestras 

Antes de efectuar el análisis, las muestras (muestras de pacientes, patrón y control 

negativo) (V1) se deben diluir en solución amortiguadora (V2) como sigue: 

V1 + V2 = 3+1 añadir 300 µl de muestra (V1) 

español 10 

a 100 µl solución amortiguadora de dilución (V2) 

Tras la dilución y antes de pipetear a la placa de microtitulación, se deben mezclar a 

fondo las muestras para preparar una solución homogénea. 

Finalmente se deberán calentar las muestras a 110 °C (+/- 5 °C) durante 10 minutos. ¡Es 

esencial mantener tanto el tiempo como la temperatura indicados! Los vasos de reactivos 

estándar no son apropiados para esta etapa de termólisis y recomendamos la utilización 

de vasos de reacción safe-lock o similares con un cierre roscado. 

Si se utiliza un termostato de bloque térmico, la temperatura real se deberá controlar 

utilizando un termómetro calibrado. Considere el período de precalentamiento específico 

del dispositivo del bloque térmico. Si es necesario, el bloque térmico debe ajustarse a la 

temperatura necesaria. Durante la termólisis, se formará un precipitado blanco turbio, que 

debe eliminarse mediante centrifugación en una centrífuga de sobremesa prerrefrigerada 

(4 °C) a 10.000 g durante 10 minutos. El sobrenadante claro se puede utilizar a 

continuación en la prueba. 


7.2.2 Conservación de las muestras 

Las muestras del paciente tratadas no se deben conservar durante más de 24 horas entre 

2 y 8 °C. las muestras no tratadas no se deben conservar entre 2-8°C durante más de 7 

días. Es posible extender la conservación a ≤ -20 °C. Evite la congelación y 

descongelación repetida de las muestras. 

Pos: 16 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testdurchführ ung/R eagenzienvorbereitung ELISA antigen @ 11\mod_1346845998930_28.doc @ 52126 @ 2333333

7.3 Preparación de reactivos del kit 

Lleve todos los reactivos hasta la temperatura ambiente antes de realizar las 

pruebas. 

7.3.1 Tiras de prueba de microtitulación 

Las tiras de pruebas de microtitulación han sido envasadas junto con un desecante 

en una bolsa de aluminio. Extraiga del bastidor los huecos no necesarios y 

póngalos dentro de la bolsa de aluminio. Cierre cuidadosamente la bolsa para 

garantizar condiciones herméticas. 

7.3.2 Sueros control / sueros patrón 

Los sueros de control y patrón deben diluirse con solución amortiguadora de 

muestra para desnaturalizarse a continuación. Para cada ejecución de las pruebas 

– independientemente del número de tiras de pruebas de microtitulación que se 

vayan a utilizar - se deben incluir los sueros control y patrón. Los sueros patrón 

deberán configurarse por duplicado. 

7.3.3 Conjugado (listo para usar) 

Evite la contaminación del conjugado listo para usar p.ej., utilizando puntas 

estériles. 

7.3.4 Solución de lavado 

Diluya concentrado de solución amortiguadora de lavado (V1) 1:30 con agua 

destilada hasta un volumen final de V2. 

Ejemplo: 

7.3.5 Sustrato TMB (listo para usar) 

español 11 

Concentrado de solución 

amortiguadora (V1) 

Volumen final (V2) 

25 ml 750 ml 

1 ml 30 ml 

Evite la contaminación de la solución de sustrato lista para usar p.ej., utilizando 

puntas estériles. 

El sustrato TMB tiene un color verde azulado claro y cualquier solución que 

muestre un color fuerte (extinción a 650 nm frente a agua destilada de > 0,2 DO) 

debe desecharse. 

7.3.6 Solución de parada (lista para usar) 

Pos: 17 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testdurchführ ung/T establauf/Überschrift T establauf @ 8\mod_1265793631810_28.doc @ 28925 @ 2 

ES

7.4 Visión general- procedimiento de la prueba 



español 12 


cuantitativo 

Preparación de las muestras y de los sueros de control y patrón 

Dilución de la muestra 

(muestras de paciente, sueros de control y patrón) 

300 µl de muestra + 100 µl solución amortiguadora de 

dilución 

INCUBACIÓN 10 min. / 110 °C 

CENTRIFUGACIÓN 10 min. / 10.000 × g / 4 °C 

Retener sobrenadante, desechar pellet 

 

Añadir sobrenadante de las muestras (100 µl) 

 


cámara de humectación 

 

LAVAR (5 x 300 µl DIL WASH ) 

 

Pipetear solución de conjugado PODCR (100 µl) 

 



 


 

Pipetear solución de sustrato TMB (100 µl) 

 



 

Pipetear solución de parada STOP (100 µl) 

 

LEER EXTINCIÓN a 450 nm (ref. 650 nm)

7.5 Procedimiento de pruebas manual 

1. Tratamiento previo de las muestras (muestras de pacientes, suero patrón y de control) 

como se describe. 

2. Coloque el número necesario de huecos en el bastidor y prepare una hoja de 

protocolo. 

3. Añada 100 µl de cada uno de los sobrenadantes del suero estándar (en 

duplicado), el control negativo y las muestras de pacientes en los pocillos 

apropiados de las tiras de prueba de microtitulación. 

Candida antigen cuantitativo 

cavidad A1 Sustrato en blanco 

cavidad B1 Control negativo 

cavidad C1 Suero patrón 

cavidad D1 Suero patrón 

cavidad E1 Muestra del paciente 1.... 

4. Incubación de la muestra durante 60 minutos (+/- 3 min) a 37℃ (+/- 1°C) en la 

cámara de humectación. 

5. Tras la incubación lave todos los pocillos con solución de lavado (dispositivo 

automatizado o manualmente): 

- aspire o agite la solución de incubación 

- llene cada pocillo con 300 µl de solución de lavado 

- aspire o agite la solución amortiguadora de lavado 

- repita el procedimiento de lavado 4 veces (¡en total son 5 veces!) 

- séquelo dando ligeros golpecitos a la placa de microtitulación sobre una toallita de 

papel 

6. Adición de conjugado 

Añada 100 µl of del conjugado listo para usar a los pocillos apropiados (excepto el 

sustrato en blanco) 

7. Incubación del conjugado durante 60 minutos (+/- 3 min) a 37 °C (+/- 1 °C) en la 

cámara de humectación. 

8. Tras la incubación lave todos los pocillos con solución de lavado (ver más arriba) 

9. Adición de sustrato 

Añada 100 µl de solución de sustrato TMB listo para usar (¡incluyendo el pocillo 

para el sustrato en blanco!) 

10. Incubación del sustrato durante 30 minutos (+/- 1 min.) a 37 °C (+/- 1°C) protegido 

de la luz en la cámara de humectación. 

11. Parada de la reacción 

Añada 100 µl de solución de parada a cada pocillo, agite suavemente la placa de 

microtitulación para mezclar. 

12. Extinción de la lectura 

Lea la densidad óptica (DO) en los siguientes 60 minutos a 450 nm frente al sustrato 

blanco, oscilando la longitud de onda de referencia entre 620 nm y 690 nm (p.ej., 650 

nm). 


español 13 

ES

7.6 Procedimiento automatizado 

SERION ELISA es apto para el procesado en equipos automáticos y ha sido evaluado 

para su uso con Immunomat TM y Gemini. El proceso automatizado se realiza de manera 

análoga al uso manual. Se advierte que bajo condiciones de trabajo especiales internas 

del laboratorio pueden ser necesarias adaptaciones de los tiempos de incubación. 


7.7 Control positivo / control de exactitud 

Para la verificación periódica del método de prueba, y para satisfacer los requisitos de los 

sistemas de gestión de calidad internos de laboratorio, recomendamos la utilización de 

SERION ELISA controls para determinar la precisión y exactitud de las cargas de pruebas 

SERION ELISA antigen. La utilización de SERION ELISA controls se describe en 

manuales de instrucciones específicos. 


español 14

8 EVALUACIÓN DE LAS PRUEBAS 



8.1 Cuantificación de punto simple con el método 4PL 

La asignación optimizada de las señales de extinción para valores cuantitativos se 

garantiza mediante la utilización de funciones no lineales, que se ajustan a una curva 

sigmoide sin ninguna transformación adicional a valores de DO. La determinación de las 

concentraciones de antígeno con SERION ELISA antigen se lleva a cabo mediante el 

modelo logarítmico logístico de cuatro parámetros (4 PL) que es ideal para un ajuste 

exacto de las curvas. Está basado en la fórmula: 

DO = A + 

1 + e 

español 15 

D - A 

B(C - En Conc.) 

Los parámetros A, B, C, y D son representativos para la forma exacta de la curva: 

1. asíntota inferior parámetro A 

2. pendiente de la curva parámetro B 

3. punto de inflexión parámetro C 

4. asíntota superior parámetro D 

Para cada lote, la curva patrón es evaluada por el Institut Virion\Serion GmbH (Würzburg, 

Alemania) en pruebas repetidas bajo condiciones óptimas. No es necesaria una costosa y 

dilatada construcción de la curva estándar por el usuario. 

Para la evaluación de concentraciones de antígeno se incluye una curva estándar 

específica del lote y también una tabla de evaluación específica del lote con cada kit de 

pruebas SERION ELISA antigen. El software de evaluación SERION evaluate, así como 

el instrumento de software basado en Microsoft ® Excel SERION activity están disponibles 

bajo petición. 

Para compensar las variaciones normales de las pruebas y también para el control de la 

ejecución de las pruebas se utiliza un suero patrón en cada carga de pruebas individual. 

Para este suero control, se determina un valor de referencia con un intervalo de validez 

mediante el control de calidad del fabricante. Dentro de este intervalo está garantizada 

una correcta cuantificación de la concentración de antígenos. 

Pos: 24 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testauswertung/T estg ültig keitskriteri en @ 8\mod_1265793547923_28.doc @ 28909 @ 2 

ES

8.2 Criterios de validez 

- El blanco de sustrato debe ser < 0,25 DO. 

- El control negativo debe producir un resultado negativo de la prueba. 

- Mediante el uso de pruebas cuantitativas SERION ELISA antigen el valor de DO 

medio (¡después de restar el blanco de sustrato!) del suero patrón debe estar 

dentro del intervalo de validez, que se proporciona en el certificado de control de 

calidad específico del lote. 

- La variación de valores DO del suero patrón no puede ser superior al 20 %. 

Si no se cumplen estos criterios, la prueba no es válida y se debe repetir. 


8.3 Cálculos del SERION ELISA antigen Candida 


8.3.1 Evaluación no automatizada 

Para la evaluación de la prueba SERION ELISA antigen se incluye en el kit de pruebas un 

certificado de control de calidad específico del lote con una curva patrón y una tabla de 

evaluación. El blanco de sustrato se debe restar de todos los valores de DO antes de la 

evaluación. 

Pos: antigen/Testauswertung/Testauswertung 11\mod_1346849110626_28.doc 27 /Arbeitsanleitungen ELISA @ 52245 antigen/Gültig @ Methoden für @ alle Dokumente/ELISA 

Método 1: Evaluación cualitativa 

Para fijar los intervalos de corte multiplique el valor medio de la DO estándar medida con 

los datos numéricos del certificado de control de calidad (ver fórmulas de casos 

especiales), p.ej.: 

DO = 0,502 x PM(STD) con corte superior 

DO = 0,352 x PM(STD) con corte inferior 

Si el valor de absorbancia medio medido del suero patrón es 0,970 DO, el intervalo de 

corte está entre 0,341-0,487 DO. 

español 16

Método 2: Determinación continua de actividades de antígeno utilizando la curva 

estándar 

Las así llamadas variaciones interensayo (desviaciones de un día a otro y de un 

laboratorio a otro) se compensan mediante la multiplicación del valor medido actual 

obtenido con una muestra del paciente con el factor de corrección F. este factor se calcula 

como sigue: 

F = 

español 17 

Valor de referencia DO (de suero patrón) 

Valor actual DO (de suero patrón) 

El procedimiento es necesario para ajustar el nivel actual de la prueba del usuario con la 

curva estándar específica del lote. En primer lugar, las desviaciones diarias tienen que ser 

corregidas calculando el factor de corrección F. 

1. Se debe calcular la media de los dos valores DO del suero patrón y comprobar que 

se encuentra dentro del intervalo de validez dado. 

2. Cálculo del factor F: el valor de referencia dado se divide por la media de la 

extinción del suero patrón: 

F = valor referencia extinción suero STD / valor medio extinción suero STD. 

3. Todos los valores medidos de las muestras de pacientes se multiplican por F. 

4. Las actividades de antígeno en UI/ml o U/ml se pueden determinar a partir de la 

curva estándar con los valores corregidos. 


ES

8.3.2 Evaluación automática de la prueba con el software SERION evaluate 

Después de la entrada de los cuatro parámetros y el valor de referencia del patrón de 

suero, las actividades de antígenos se calculan en línea a partir de cargas de pruebas 

SERION ELISA antigen procesadas y medidas mediante el software de evaluación 

SERION evaluate. 

Si la densidad óptica del patrón está fuera del intervalo válido, aparecerá el siguiente 

mensaje. 

“Valores estándar fuera de intervalos en los siguientes grupos: grupo 1-24.” o 

“Los valores estándar difieren más del 20% en los siguientes grupos: grupo 1-24.” 

En dichos casos la ejecución de la prueba es invalida y debe repetirse. 

Los parámetros y el valor de referencia deben ser modificados únicamente si existe un 

cambio de lote (la tabla de evaluación muestra parámetros y valores de referencia). La 

entrada correcta de los datos específicos del lote se puede comprobar basándose en la 

actividad del suero patrón (en UI/ml o U/ml) asignada al suero patrón. El valor medio 

calculado de las unidades debe corresponderse con el valor unitario indicado en el 

certificado específico del lote. Hay una corrección automática de los valores medidos. En 

la versión estándar el resultado muestra lo siguiente: 


8.4 Límites de cuantificación 

español 18 

Código de la muestra 

Valor DO 

U/ml 

Evaluación 

Los límites de cuantificación se especifican en el certificado de control de calidad de la 

prueba SERION ELISA antigen. La linealidad de la dilución dentro de este intervalo ha 

sido demostrada en estudios de evaluación exhaustivos. En caso de que una muestra del 

paciente muestre un resultado de la prueba por encima del límite superior de 

cuantificación, se puede ensayar la prueba a una dilución mayor. La actividad de antígeno 

determinada así se debe multiplicar por el factor de dilución adicional. 


8.5 Intervalo dudoso 

El intervalo dudoso de la prueba SERION ELISA antigen Candida se especifica en el 

certificado de control de calidad e indica el intervalo para resultados dudosos de las 

pruebas. Los valores obtenidos, al analizar una muestra de un paciente, que caen por 

debajo de este intervalo indican un resultado negativo de la prueba; los valores por 

encima del intervalo dudoso se interpretan como positivos. En los casos en los que los 

resultados están dentro del intervalo dudoso no es posible una interpretación definitiva del 

resultado. En tales casos, se debe repetir la prueba en paralelo con una muestra de 

seguimiento tomada de 1 a 2 semanas más tarde (par de suero). 

Pos: 31 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testauswertung/Kapitelüberschrift: Inter pretati on der Ergebnisse @ 8\mod_1265792956649_28.doc @ 28815 @ 2

8.6 Interpretación de resultados 


Unos resultados positivos de la prueba para las muestras del paciente indican una 

fungemia por Candida. Los resultados pueden ser interpretados solamente en 

combinación con el cuadro clínico y otros métodos de detección. 

Un resultado puede ser considerado positivo cuando en la prueba se miden al menos 2,6 

unidades. Tal resultado indica que la muestra contiene la cantidad de manano que se 

correlaciona con 2,6 ng de proteína de Candida. Sin embargo no puede discriminar entre 

organismos vivos o muertos respectivamente. 

Los resultados negativos de la prueba no excluyen una infección aguda, en especial si se 

hallan títulos altos de anticuerpo. En tales casos puede ser que el antígeno haya sido 

enmascarado por completo por anticuerpos y que incluso el procedimiento de 

desnaturalización durante la preparación de la muestra no sea suficiente para permitir la 

detección del antígeno. Además, el momento en el tiempo durante una infección en el que 

se obtiene una muestra, y una eficiente preparación y conservación de la muestra pueden 

conducir a un resultado negativo. 


8.7 Intervalos de referencia de individuos sanos 


Las pruebas de sueros de donantes de sangre elegidos al azar, recogidos en la región del 

sur de Alemania, con las pruebas de SERION ELISA antigen Candida dieron como 

resultado la distribución siguiente. De 103 sueros ensayados con la prueba de SERION 

ELISA antigen Candida, 92 (89,3 %) fueron negativos, seis sueros (5.8 %) dieron un 

resultado positivo y cinco muestras (4,9 %) se consideraron dudosas. 


9 CARACTERÍSTICAS DE FUNCIONAMIENTO 


9.1 Sensibilidad y especificidad 


La prueba SERION ELISA antigen Candida fue validada mediante el análisis de 148 

muestras de suero de donantes de sangre y 93 muestras de pacientes, que presentaron 

signos de candidiasis durante el tratamiento de cuidados intensivos, en comparación con 

los resultados obtenidos con un ensayo disponible comercialmente de un importante 

fabricante europeo. Los sueros clasificados como dudosos no se incluyeron en el cálculo 

de los valores de sensibilidad y especificidad. 

Características de funcionamiento Sensibilidad Especificidad 


En otro estudio interno, se demostró la reactividad cruzada con las especies Candida 

guillermondii, Candida glabrata, Candida krusei, Candida parapsilosis y Candida tropicalis 

con la prueba SERION ELISA antigen Candida a fin de garantizar un amplio diagnóstico 

de Candida. 

español 19 

ES

Debido a una similitud del manano con el almidón hidroxietílico (HES), que se utiliza en 

los expansores de plasma para el tratamiento de fallos circulatorios (shock hipovolémico, 

hemorrágico y séptico), se evaluó la reactividad cruzada potencial. No obstante, no se 

midió ninguna reacción cruzada con HES cuando se usó la prueba SERION ELISA 

antigen Candida. 


9.2 Reproducibilidad 


La reproducibilidad intraensayo se determinó mediante ensayo de sueros de diferentes 

reactividades 20 veces en una carga de pruebas. La reproducibilidad interensayo se 

determinó mediante ensayo de sueros de diferentes reactividades en 10 cargas 

independientes de pruebas. 

español 20 

Desviación típica 

Coeficiente de variación (CV %) = x 100 


Muestra 

Valor de la 

media 

(DO) 

Intraensayo 

(CV %) 

Valor de la media 

Valor de la 

media 

(DO) 

Interensayo 

(CV %) 

negativo 0,223 9,6 0,225 7,3 

dudoso 0,507 2,4 0,476 5,3 

positivo 1,413 2,5 1,356 2,7 

positivo 2,851 2,0 2,442 8,1 

Pos: 40 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Allgemeine T exte ELISA antigen/Sicherheitsmaßnahmen @ 8\mod_1265797262616_28.doc @ 29415 @ 122

10 MEDIDAS DE SEGURIDAD 

10.1 Declaraciones de advertencia 

El SERION ELISA antigen está diseñado para ser utilizado por personal cualificado y 

familiarizado con las buenas prácticas de laboratorio. 

Todos los reactivos del kit y las muestras humanas deben manipularse con cuidado, de 

acuerdo a la buena práctica de laboratorio establecida. 

- Este kit contiene componentes de sangre humana. Aunque todos los sueros de 

control y de corte han sido analizados y el resultado ha sido negativo para anti-HIVab 

(anticuerpo anti VIH), HBs-Ag (antígeno de superficie del virus de hepatitis B) y 

anti-HCV-ab (anticuerpo anti VHC), se deberán considerar como potencialmente 

infecciosos. 

- No pipetear con la boca. 

- No fume, coma ni beba en zonas en las que se manipulen muestras o reactivos del 

kit. 

- Utilice guantes desechables, bata de laboratorio y gafas de seguridad mientras 

manipula reactivos del kit o muestras. Lávese las manos a fondo después. 

- El material del paciente y demás material potencialmente infeccioso se debe 

descontaminar después de la ejecución de la prueba. 

- Los reactivos se deben conservar de modo seguro y deben ser inaccesibles a un 

acceso no autorizado p.ej., niños. 

10.2 Eliminación 

Cumpla con los requisitos reglamentarios pertinentes. 


español 21 

ES

11 BIBLIOGRAFÍA 









62. 


Rev. 3, 32-45. 






























español 22


ΠΙΝΑΚΑΣ ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΩΝ 

1 ΠΡΟΟΡΙΖΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ 

2 ∆ΙΑΓΝΩΣΤΙΚΗ ΣΧΕΤΙΚΟΤΗΤΑ 

3 SERION ELISA antigen – ΑΡΧΗ ∆ΟΚΙΜΑΣΙΑΣ 

4 ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΟ ΚΑΙ ΣΥΝΘΕΣΗ ΤΟΥ KIT 

5 ΥΛΙΚΟ ΠΟΥ ΑΠΑΙΤΕΙΤΑΙ ΑΛΛΑ ∆ΕΝ ΠΑΡΕΧΕΤΑΙ 

6 ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ 

7 ∆ΙΑ∆ΙΚΑΣΙΑ ∆ΟΚΙΜΑΣΙΑΣ SERION ELISA antigen 

7.1 Γενικές Σηµειώσεις 

7.2 Προετοιµασία δείγµατος και φύλαξη 

7.3 Προετοιµασία των αντιδραστηρίων του κιτ 

7.4 Επισκόπηση - ∆ιαδικασία δοκιµασίας 

7.5 Χειροκίνητη διαδικασία δοκιµασίας 

7.6 Αυτόµατη διαδικασία δοκιµασίας 

7.7 Θετικός έλεγχος/ Έλεγχος ακρίβειας 

8 ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗ ∆ΟΚΙΜΑΣΙΑΣ 

8.1 Ποσοτικό προσδιορισµός µε τη µέθοδο 4PL 

8.2 Κριτήρια ισχύος δοκιµασίας 

8.3 Υπολογισµός SERION ELISA antigen Candida 

8.4 Όρια ποσοτικού προσδιορισµού 

8.5 Εύρος οριακών τιµών 

8.6 Ερµηνεία των αποτελεσµάτων 

8.7 Εύρος αναφοράς υγιών ατόµων 

9 ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟ∆ΟΣΗΣ 

9.1 Ευαισθησία και Ειδικότητα 

9.2 Επαναληψιµότητα 

10 ΜΕΤΡΑ ΑΣΦΑΛΕΙΑΣ 

10.1 Προειδοποιήσεις/ Προφυλάξεις 

10.2 ∆ιάθεση 

11 ΑΝΑΦΟΡΕΣ 

τρέχουσα έκδοση αριθ. Β: V 1.12/09-1 

προηγούµενη έκδοση Β: -- 

GR


Ελληνικά 2 


Ενζυµοανοσολογική µέθοδος για την ανίχνευση του αντιγόνου της Candida 

για διαγνωστική χρήση in vitro 


SERION ELISA antigen Candida Αριθµ. Παραγγελίας: ESR200 


1 ΠΡΟΟΡΙΖΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ 


To SERION ELISA antigen Candida είναι µία ποσοτική και ποιοτική ανοσολογική µέθοδος 

για την ανίχνευση αντιγόνου Candida στον ανθρώπινο ορό ή πλάσµα. Η µέθοδος 

συνιστάται για την ανίχνευσης και συστηµικής καντιτίασης. 


2 ∆ΙΑΓΝΩΣΤΙΚΗ ΣΧΕΤΙΚΟΤΗΤΑ 


Το λευκάζον ωίδιο είναι ένας παντού ευρισκόµενος ζυµοµύκητας, ο οποίος ανήκει όπως 

όλα τα είδη ωιδίων στην οικογένεια των ζυµοµυκήτων Πέρα από τη ζυµοµυκητιακή µορφή, 

η οποία εµφανίζεται κυρίως σε επιφανειακές λοιµώξεις, τα ονοµαζόµενα ψευδοµυκήλια 

αποτελούν µία ακόµη µορφολογική εκδήλωση των ζυµοµυκήτων. Οι βλαστικοί σωλήνες 

και η δηµιουργία ψευδοµυκήλιων συµβαίνει συνήθως σε περιπτώσεις συστηµατικών 

µυκητιάσεων Το υποείδος Candida παράγει και εκκρίνει µία πληθώρα καταστρεπτικών 

ενζύµων, τα οποία προσφέρουν στους ευκαιριακά παθογόνους µικροοργανισµούς τη 

δυνατότητα διείσδυσης διαµέσου φραγµών βλεννογόνων και αιµοφόρων αγγείων. 

Το υποείδος Candida µεταδίδεται κατά κύριο λόγο µέσω εκκρίσεων από άτοµο σε άτοµο. 

Η κύρια πύλη εισόδου είναι η στοµατική κοιλότητα. Μεταβολές στις µυκητοστατικές 

ιδιότητες του δέρµατος, οι οποίες αποτελούν συνέπεια ελαφρώς όξινου pH και της 

ανταγωνιστικής βακτηριακής χλωρίδας, µπορούν να διευκολύνουν την εγκατάσταση 

επιπολής καντιντίασης στην επιφάνεια του δέρµατος. Η συστηµατική µυκητίαση οφείλεται 

σε εποικισµό βλεννογόνων, ιδιαίτερα του γαστρεντερικού σωλήνα. 

Το υποείδος Candida έχει την ικανότητα να προσκολλάται στα επιθήλια διαφόρων 

βλεννογόνων µεµβρανών µε τη βοήθεια συγκολλητικών πρωτεϊνών και άλλων 

επιφανειακών δοµών. Το ακόλουθο σχεδιάγραµµα απεικονίζει τα υποθετικά βήµατα, που 

είναι δυνατόν να οδηγήσουν σε διάσπαρτες λοιµώξεις σε περιπτώσεις βαριών παθήσεων 

στο υπόβαθρο. Η ακριβής διάκριση των διαφόρων σταδίων δεν είναι πρακτική (εικόνα 1).

∆ηµιουργία αποικίας στην 

περιοχή στόµα-φάρυγγας 

Έίσοδος στην 

κυκλοφορία 

Εικόνα 1: πρόοδος των λοιµώξεων από ωίδια 


Πέρασµα στον 

Αυλό του στοµάχου 

Έισοδος στο 

Λεµφικό σύστ. 

Προσβολή 

Πληθώρας οργάνων 

Είσοδος στον αυλό 

των εντέρων 

Έκκριση των 

Κυττάρων των 

ωιδίων 

Γενικά µπορούν να διαχωριστούν οι λοιµώξεις από ωίδια σε δύο µεγάλες οµάδες, των 

οποίων τα βασικά χαρακτηριστικά αναφέρονται συνοπτικά στον ακόλουθο πίνακα 

Λοιµώξεις από Candida 

επιφανειακές Εν τω βάθει µυκητίαση 

(διηθητική) 

εντόπιση δέρµα, βλεννογόνος πρωτοπαθή όργανα 

Ανοσολογική 

ικανότητα του ξενιστή 

Παράγοντες κινδύνου κύηση 

+ +,-/- 

διαβήτης 

ΑΙDS 

δερµατολογικές διαταραχές 

µειωµένη υγιεινή του στόµατος 

κλινική πρόοδος τις περισσότερες φορές, ακίνδυνη 

κανένας κίνδυνος για τη ζωή 

χηµειοθεραπεία 

ιατρογενής ανοσοκαταστολή 

Κεντρικός φλεβικός καθετήρας 

ακτινοθεραπεία 

Εγκαύµατα µεγάλου βαθµού 

χειρουργεία 

τις περισσότερες φορές 

επικίνδυνη για τη ζωή 

θεραπεία αποτελεσµατική θεραπεία αποτελεσµατικότητα της 

θεραπείας εξαρτώµενη από το 

στάδιο της λοίµωξης 

Πίνακας 1: Χαρακτηριστικά των λοιµώξεων από Candida 

GR

Η διάγνωση της καντιντίασης µε βάση ορολογικές µεθόδους δεν είναι σαφής: Από την µία 

πλευρά, ο προσωρινός αποικισµός µε ζυµοµύκητες είναι δυνατό να προκαλέσει 

αντισωµατική απόκριση ενώ από την άλλη πλευρά οι συστηµατικές µυκητιάσεις από 

Candida σε ανοσοκατεσταλµένους ασθενείς µπορούν να επιφέρουν µικρές µόνο 

µεταβολές στις δραστηριότητες των αντισωµάτων. Αυτές οι καταστάσεις καθιστούν 

αναγκαία την κριτική αξιολόγηση ορολογικών ευρηµάτων. Επιπλέον, οι συστηµατικές 

λοιµώξεις µε Candida µπορεί να µην προκαλέσουν κλασικά συµπτώµατα. 

Βάσει των τωρινών µας γνώσεων δεν είναι δυνατόν να συγκριθούν τα αποτελέσµατα 

διαφόρων συστηµάτων δοκιµασιών για τον καθορισµό των αντισωµάτων ενάντια στο ωίδιο 

ή ακόµη και να υπάρξει ανταλλαγή µεταξύ τους. Η εξειδίκευση των αντισωµάτων που 

καθορίστηκαν σε ένα δείγµα εξέτασης εξαρτάται βασικά από το σύστηµα δοκιµασιών 

(ELISA ή HAT) ή από το παρασκεύασµα του αντιγόνου που χρησιµοποιήθηκε. Κατά την 

δοκιµασία ΗΑΤ ανιχνεύονται τα αντισώµατα IgΜ καλύτερα από ότι τα αντισώµατα IgG, 

λόγω της υψηλότερης ικανότητας συγκόλλησης των IgΜ µορίων. Η ΗΑΤ ανιχνεύει κυρίως 

αντισώµατα ενάντια σε αντιγόνα του κυτταρικού τοιχώµατος των βλαστοµύκητων, πράγµα 

το οποίο κάνει την ορολογική ερµηνεία ακόµη πιο σύνθετη, προσφέρει όµως και την 

δυνατότητα της διαφοροποίησης. 

Οι µεταβολές στη συγκέντρωση των αντισωµάτων µπορεί να ανιχνεύονται µε ELISA όµως 

όχι µε ΗΑΤ καθιστώντας πλεονεκτικό το συνδυασµό των δύο τεχνικών, π.χ. σε περίπτωση 

µείωσης της δραστηριότητας των αντισωµάτων IgM και ταυτόχρονη αύξηση της 

δραστηριότητας των αντισωµάτων IgG. 

Προς το παρόν δεν υπάρχει µεµονωµένη τεχνική που να επιτρέπει οριστική ορολογική 

διάγνωση της καντιντίασης. Η παρακολούθηση ασθενών που διατρέχουν κίνδυνο και ο 

έλεγχος της θεραπείας απαιτούν τη χρήση διαφόρων µεθόδων, συµπεριλαµβανοµένων 

ορολογικών ελέγχων και ανίχνευσης αντιγόνων. Η εξέταση SERION ELISA antigen 

Candida είναι ιδιαίτερα χρήσιµη σε αυτές τις καταστάσεις, ανιχνεύοντας ειδικό αντιγόνο 

Candida σε δείγµατα ασθενών. 


antigen/Testprinzip/Testprinzip ELISA antigen @ 8\mod_1265792007310_53.doc @ 

28646 @ 1 

3 SERION ELISA antigen – ΑΡΧΗ ∆ΟΚΙΜΑΣΙΑΣ 

Το ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) είναι µία ανοσολογική µέθοδος, η οποία 

είναι κατάλληλη ιδιαίτερα για τον καθαρισµό αντισωµάτων και αντιγόνων στα πλαίσια της 

ορολογίας των λοιµώξεων. Η αντίδραση βασίζεται στην ειδική αλληλεπίδραση των 

αντισωµάτων µε τα αντίστοιχα αντιγόνα τους. Οι ταινίες δοκιµασίας της πλάκας 

µικροτιτλοποίησης του SERION ELISA antigen είναι επικαλυµµένη µε ειδικά αντισώµατα 

τα οποία κατευθύνονται ενάντια στο παθογόνο ενδιαφέροντος. Εάν υπάρχουν αντιγόνα 

στο δείγµα του ασθενή, αυτά συνδέονται µε το σταθεροποιηµένο αντίσωµα. Ένα δεύτερο 

αντίσωµα, το οποίο έχει συζευχθεί µε την ενζυµική υπεροξειδάση, ανιχνεύει και συνδέεται 

µε το ανοσολογικό σύµπλεγµα. Το άχρωµο υπόστρωµα υδρογονική υπεροξειδάση (H2O2) 

και η χρωµογόνος τετραµεθυλοβενζιδίνη (TMB) µετατρέπονται σε ένα χρωµατισµένο µπλε 

προϊόν. Η προσθήκη διαλύµατος διακοπής µεταβάλλει το χρώµα σε κίτρινο. Η ένταση 

σήµατος αυτού του προϊόντος αντίδρασης είναι ανάλογη µε τη συγκέντρωση του αντιγόνου 

στο δείγµα και µετράται φωτοµετρικά. 

Pos: 8 /Arbeitsanleitungen ELISA antigen/Gültig für nur ein Dokument/Inhalt und 

Zusammensetzung/Candida antigen: Inhalt und Zusammensetzung @ 

11\mod_1346845806738_53.doc @ 52097 @ 1 

Ελληνικά 4

4 ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΟ ΚΑΙ ΣΥΝΘΕΣΗ ΤΟΥ KIT 

Συστατικά της δοκιµασίας Τεµάχια / 

Όγκος 

Αποσπάσιµες ταινίες δοκιµασίας µικροτιτλοποίησης µε οκτώ επικαλυµµένες µε 

αντίσωµα µεµονωµένες κοιλότητες. 

(συνολικά 96) MTP , 

1 πλαίσιο δοκιµασίας. 

Πρότυπος ορός STD , 

Αντιγόνο Candida albicans σε ανθρώπινο ορό µε προσθήκη εµβρυϊκού ορού βοός 

(FCS), 

αρνητικό για αντίσωµα αντι-HIV, αντιγόνο HBs (αντιγόνο επιφάνειας ηπατίτιδας B) και 

αντίσωµα αντι-HCV; 

συντηρητικό: < 0.1 % αζίδιο νατρίου. 

Αρνητικός ορός ελέγχου NEG , 

Ανθρώπινος ορός µε προσθήκη εµβρυϊκού ορού βοός (FCS), 

αρνητικό για αντίσωµα αντι-HIV, αντιγόνο HBs (αντιγόνο επιφάνειας ηπατίτιδας B) και 

αντίσωµα αντι-HCV; 

συντηρητικό: < 0.1 % αζίδιο νατρίου. 

Σύζευξη αντι-Candida albicans (έτοιµο προς χρήση) PODCR , 

Αντι-Candida albicans αντίσωµα συζευγµένο µε ραφανιδική υπεροξειδάση 

Σταθεροποιηµένο µε πρωτεϊνούχο διάλυµα σταθεροποίησης το οποίο περιέχει 

απολυµαντικό 

συντηρητικό: 0.1 % ProClin® 300. 

Συµπύκνωµα διαλύµατος πλύσης (επαρκές για 1500 ml) WASH , 

Αλατούχο διάλυµα ρυθµισµένο µε TRIS µε Tween 20, 30πλάσιας συµπύκνωσης 

συντηρητικό: < 0.1 % ProClin® 300. 

Ρυθµιστικό διάλυµα αραίωσης SAMB , 

Όξινο διάλυµα χωρίς συντηρητικά. 

∆ιάλυµα διακοπής STOP , 

0.5 N θειικό οξύ. 

∆ιάλυµα υποστρώµατος TMB, (έτοιµο προς χρήση) ΤΜΒ 

∆ιάλυµα υδρογονικής υπεροξειδάσης υποστρώµατος TΜB, 

συντηρητικό: < 0.01 % Kathon CG. 

∆ίπλωµα ελέγχου ποιότητας µε πρότυπη καµπύλη και πίνακα τιµών INFO , 

(ποσοτικοποίηση αντιγόνων σε U/ml). 



8\mod_1265796058727_53.doc @ 29310 @ 1 


12 τεµάχια 

3 x 3 ml 

2 x 3 ml 

13 ml 

2 x 25 ml 

15 ml 

13 ml 

13 ml 

2 τεµάχια 

GR

5 ΥΛΙΚΟ ΠΟΥ ΑΠΑΙΤΕΙΤΑΙ ΑΛΛΑ ∆ΕΝ ΠΑΡΕΧΕΤΑΙ 

- κοινός εργαστηριακός εξοπλισµός 

- φωτόµετρο για πλάκες µικροτιτλοποίησης µε φίλτρο, µήκος κύµατος 450 nm, 

συνιστώµενο µήκος κύµατος αναφοράς 620 nm - 690 nm (π.χ. 650 nm) 

- επωαστήρας 37 °C 

- Θερµαντική πλάκα 110 °C 

- θάλαµος υγρασίας 

- αποσταγµένο νερό 

- Συνδετήρες Click (αριθµ. παραγγελίας VT120) 



11\mod_1346935956390_53.doc @ 52267 @ 1 

Ελληνικά 6

6 ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ 

Αντιδραστήριο Φύλαξη Σταθερότητα 

Ταινίες 

µικροτιτλοποίησης 

(επικαλυµµένες µε 

αντίσωµα) 

Οροί ελέγχου / 

Πρότυποι οροί 

κλειστό 


µετά το άνοιγµα στους 2 – 8 °C σε κλειστό περιέκτη 

αλουµινίου µε αποξηραντικό µέσο 

Ταινίες οι οποίες δε χρησιµοποιούνται πρέπει να 

φυλάσσονται στον κλειστό περιέκτη αλουµινίου σε ξηρό 

περιβάλλον. 

βλέπε ηµεροµηνία λήξης, 

ελάχιστη διάρκεια ζωής 

τέσσερις εβδοµάδες 

διάρκεια ζωής σε 

περίπτωση ορθής 

χρήσης και φύλαξης 

µέχρι την ηµεροµηνία 

λήξης 

µετά το άνοιγµα στους 2 – 8 °C βλέπε ηµεροµηνία λήξης, 

Σύζευξη έτοιµο προς χρήση διάλυµα στους 2 – 8 °C 

Ρυθµιστικό διάλυµα 

αραίωσης 

Αποφύγετε την µόλυνση π.χ. µε τη χρήση αποστειρωµένων 

άκρων προχοϊδων. 

κλειστό 

µετά το άνοιγµα στους 2 – 8 °C 

Απορρίψτε τα διαλύµατα σε περίπτωση που είναι θολά 

∆ιάλυµα πλύσης Συµπύκνωµα µετά το άνοιγµα στους 2 – 8 °C 

αραίωση εργασίας στους 2 – 8 °C 

αραίωση εργασίας σε θερµοκρασία δωµατίου 

Οι φιάλες οι οποίες χρησιµοποιούνται για την αραίωση 

εργασίας θα πρέπει να καθαρίζονται τακτικά. Απορρίψτε τα 

διαλύµατα σε περίπτωση που είναι θολά 

Υπόστρωµα ΤMB έτοιµο προς χρήση διάλυµα στους 2 – 8 °C, 

φυλάσσεται προστατευµένο από το φως 

Αποφύγετε την µόλυνση π.χ. µε τη χρήση αποστειρωµένων 

άκρων προχοϊδων. 

Απορρίψτε εάν το διάλυµα χρωµατιστεί µπλε 

(απορρόφηση στα 650 nm έναντι αποσταγµένου ύδατος . 

> 0,2 OD). 

24 µήνες από την 

ηµεροµηνία παραγωγής 







6 µήνες 



ηµεροµηνία παραγωγή 

2 εβδοµάδες 

1 εβδοµάδα 



ηµεροµηνία παραγωγή 

∆ιάλυµα διακοπής Μετά από το άνοιγµα σε θερµοκρασία δωµατίου βλέπε ηµεροµηνία λήξης, 


GR

7 ∆ΙΑ∆ΙΚΑΣΙΑ ∆ΟΚΙΜΑΣΙΑΣ SERION ELISA antigen 


7.1 Γενικές Σηµειώσεις 

Να χρησιµοποιείτε µόνο αντιδραστήρια SERION ELISA antigen όταν χρησιµοποιείτε τις 

ανοσολογικές δοκιµασίες SERION ELISA antigen. Τα συστατικά στοιχεία δεν πρέπει να 

αντικαθιστώνται από αντιδραστήρια άλλων κατασκευαστών. Οι πρότυποι οροί και οι οροί 

ελέγχου όπως και το σύζευγµα των ανοσολογικών δοκιµασιών SERION ELISA antigen 

έχουν οριστεί ειδικά για το κιτ δοκιµασίας που πρόκειται να χρησιµοποιηθούν και δεν 

πρέπει να χρησιµοποιούνται µε άλλες παρτίδες. 

Το ρυθµιστικό διάλυµα αραίωσης, το διάλυµα πλύσης, το υπόστρωµα και το διάλυµα 

διακοπής µπορούν να χρησιµοποιηθούν µε όλες τις ανοσολογικές δοκιµασίες SERION 

ELISA antigen ανεξαρτήτως παρτίδας και δοκιµασίας. 

Σε κλειστή συσκευασία, όλα τα συστατικά στοιχεία των δοκιµασιών SERION ELISA 

antigen, µπορούν, όταν φυλάσσονται αναλόγως, να χρησιµοποιηθούν µέχρι και την 

ηµεροµηνία λήξης που αναφέρεται στις ετικέτες. Τα αντιδραστήρια δεν πρέπει να 

χρησιµοποιούνται µετά από την ηµεροµηνία λήξης. 

Αραίωση εναλλαγή των αντιδραστηρίων είναι δυνατό να προκαλέσουν απώλεια της 

ευαισθησίας. 

Αποφύγετε την έκθεση των αντιδραστηρίων σε έντονο φως κατά τη διάρκεια της φύλαξης 

και επώασης. Τα αντιδραστήρια πρέπει να φυλάσσονται καλά κλεισµένα µετά από τη 

χρήση, ώστε να αποφεύγονται η εξάτµιση και η µόλυνσή τους. 

Για να ανοίξετε τον περιέκτη αλουµινίου της πλάκας µικροτιτλοποίησης κόψτε µόνο την 

κορυφή στη σηµαδεµένη πλευρά, ώστε να µπορεί να ξανακλείσει κατάλληλα. Μη 

χρησιµοποιείτε τις ταινίες εάν ο περιέκτης αλουµινίου έχει υποστεί βλάβη ή εάν ο 

περιέκτης µε τις υπολειπόµενες ταινίες δεν έχει ξανακλείσει σωστά. 

Χρησιµοποιείτε άσηπτες τεχνικές όταν αποµακρύνετε τµήµατα από τους σωληνίσκους 

αντιδραστηρίων ώστε να αποφεύγεται η επιµόλυνση. Για να αποφευχθούν ψευδώς θετικά 

αποτελέσµατα, εξασφαλίστε ότι δεν ακουµπάτε ή πιτσιλάτε τα άνω τοιχώµατα των 

κοιλοτήτων κατά το πιπετάρισµα της σύζευξης. Προσέχετε να µη ανταλλάσσετε τα καπάκια 

των φιαλών και/ ή φιαλιδίων. 

Ιδιαίτερα το διάλυµα υποστρώµατος TMB είναι ευαίσθητο σε οξειδωτικές ουσίες και ιόντα 

βαρέων µετάλλων. Πρέπει να φυλάσσεται µακριά από το φως όλες τις ώρες και µόνο µη 

ανοιγµένο σε συνθήκες χαµηλού φωτισµού άµεσα πριν από τη χρήση. Αυτό το διάλυµα 

έχει ανοιχτόχρωµο µπλε-πράσινο χρώµα. 

Θα πρέπει να αποφεύγεται η δερµατική επαφή µε το υπόστρωµα και το διάλυµα διακοπής. 

Η δυνατότητα αναπαραγωγής των αποτελεσµάτων της δοκιµασίας εξαρτάται από τη 

λεπτοµερή µίξη των αντιδραστηρίων . Ανακινείστε τις φιάλες που περιέχουν τους ορούς 

ελέγχου πριν από τη χρήση και επίσης όλα τα δείγµατα µετά από την αραίωση (π.χ. µε τη 

χρήση ενός αναµίκτη vortex). 

Ελληνικά 8

Βεβαιωθείτε ότι πιπετάρετε προσεκτικά και σύµφωνα µε τους δεδοµένους χρόνους και τις 

θερµοκρασίες επώασης . Σηµαντικές χρονικές διαφορές µεταξύ του πιπεταρίσµατος της 

πρώτης και της τελευταίας κοιλότητας της πλάκας µικροτιτλοποίησης όταν διανέµονται 

δείγµατα και οροί ελέγχου, η σύζευξη ή το υπόστρωµα είναι δυνατό να οδηγήσουν σε 

διαφορετικούς χρόνους προεπώασης, οι οποίοι µπορούν να επηρεάσουν την ακρίβεια και 

τη δυνατότητα αναπαραγωγής των αποτελεσµάτων. 

Τα βέλτιστα αποτελέσµατα µπορούν να επιτευχθούν µόνο εάν τηρούνται αυστηρά οι 

οδηγίες. 

Η ανοσολογική µέθοδος SERION ELISA antigen ισχύει µόνο εάν εκπληρώνονται τα ειδικά 

για την παρτίδα κριτήρια επικύρωσης στο πιστοποιητικό ποιοτικού ελέγχου. 

Η επαρκής πλύση αποφεύγει τις µη ειδικεύσεις της δοκιµασίας. Για το λόγο αυτό, η 

διαδικασία πλύσης θα πρέπει να διεξάγεται προσεκτικά. Όλες οι κοιλότητες στον επίπεδο 

πυθµένα θα πρέπει να πληρώνονται µε όµοιους όγκους ρυθµιστικού διαλύµατος πλύσης. 

Στο τέλος της διαδικασίας εξασφαλίστε ότι οι κοιλότητες είναι πλήρως ελεύθερες από 

ρυθµιστικό διάλυµα πλύσης προκειµένου να αποφευχθούν ανεξέλεγκτες επιδράσεις 

αραίωσης. Αποφύγετε τη δηµιουργία αφρού! 

∆ώστε προσοχή να µην προκαλέσετε βλάβη στην επιγραφή (παθογόνο/ AG) στις ταινίες 

δοκιµασίας µικροτιτλοποίησης κατά τη διάρκεια της πλύσης και αναρρόφησης ώστε να 

αποφευχθεί η σύγχυση. 


7.2 Προετοιµασία δείγµατος και φύλαξη 

Λιπαιµικά, αιµολυµένα ή ικτερικά δείγµατα (ορός ή πλάσµα) θα πρέπει να δοκιµάζονται 

µόνο µε προσοχή. Τα προφανώς µολυσµένα δείγµατα δεν πρέπει να δοκιµάζονται. Ο 

ορός ή το πλάσµα (EDTA, κιτρικό άλας, ηπαρίνη) που συλλέγονται σύµφωνα µε τις 

πρότυπες εργαστηριακές µεθόδους είναι κατάλληλα δείγµατα. 



GR

7.2.1 Προετοιµασία δειγµάτων 

Πριν τη διενέργεια της δοκιµασίας, τα δείγµατα (δείγµατα του ασθενή, πρότυπα και 

Αρνητικός ορός ελέγχου) (V1) πρέπει να αραιώνονται σε ρυθµιστικό διάλυµα αραίωσης (V2) 

ως εξής: 

V1 + V2 = 3+1 προσθήκη 300 µl δείγµα (V1) 


σε κάθε 100 µl Ρυθµιστικό διάλυµα αραίωσης (V2) 

Μετά από την αραίωση πριν το πιπετάρισµα στην πλάκα µικροτιτλοποίησης πρέπει τα 

δείγµατα πρέπει να αναµιγνύονται καλά, ώστε να προκύπτει ένα οµοιογενές διάλυµα. 

Τέλος, τα δείγµατα πρέπει να θερµαίνονται στους 110 °C (+/- 5 °C) για 10 λεπτά. Είναι 

απαραίτητο να τηρούνται και τα δύο, ο χρόνος και η καθορισµένη θερµοκρασία! Οι 

κανονικοί δοκιµαστικοί σωλήνες δεν είναι κατάλληλοι για αυτό το βήµα θερµόλυσης και 

συνιστούµε τη χρήση δοκιµαστικών σωλήνων µε ασφαλής σφράγισµα ή όµοιους σωλήνες 

µε βιδωτό κούµπωµα. 

Η χρήση θερµοστάτη θερµαντικής πλάκας απαιτεί τον έλεγχο της τρέχουσας 

θερµοκρασίας µε βαθµονοµηµένο θερµόµετρο. Λάβετε υπόψη το, ειδικό για τη συσκευή, 

διάστηµα προκαταρκτικής θέρµανσης της θερµαντικής πλάκας. Εάν είναι απαραίτητο, η 

θερµαντική πλάκα πρέπει να ρυθµίζεται στην απαιτούµενη θερµοκρασία. Κατά τη διάρκεια 

της θερµόλυσης, θα σχηµατιστεί ένα λευκό, θολό ίζηµα, το οποίο θα πρέπει να 

αποµακρυνθεί µέσω φυγοκέντρισης σε προψυγµένο (4 °C) επιτραπέζιο φυγοκεντρητή σε 

10.000 × g για 10 λεπτά. Το διαυγές υπερκείµενο µπορεί κατόπιν να χρησιµοποιηθεί στην 

εξέταση. 


7.2.2 Φύλαξη δειγµάτων 

Τα επεξεργασµένα δείγµατα ασθενή δε θα πρέπει να φυλάσσονται περισσότερο από 24 

ώρες στους 2 – 8 °C. Τα µη επεξεργασµένα δείγµατα δε θα πρέπει να φυλάσσονται στους 

2-8°C για περισσότερες από 7 ηµέρες. Παρατεταµένη φύλαξη είναι δυνατή στους ≤ -20 

°C. Aποφύγετε την επαναλαµβανόµενη κατάψυξη και απόψυξη των δειγµάτων. 


7.3 Προετοιµασία των αντιδραστηρίων του κιτ 

Προσαρµόστε όλα τα αντιδραστήρια σε θερµοκρασία δωµατίου πριν από τη 

δοκιµασία. 

7.3.1 Ταινίες δοκιµασίας µικροτιτλοποίησης 

Οι ταινίες δοκιµασίας µικροτιτλοποίησης σε πλαίσια είναι συσκευασµένες µε ένα 

αποξηραντικό µέσο σε έναν περιέκτη αλουµινίου. Πάρτε τις µη απαιτούµενες 

κοιλότητες από το πλαίσιο και τις επανατοποθετήστε τις στον περιέκτη αλουµινίου. 

Κλείστε τον περιέκτη προσεκτικά για να εξασφαλίσετε αεροστεγείς συνθήκες. 

7.3.2 Οροί ελέγχου / Πρότυποι οροί 

Οι οροί ελέγχου και οι πρότυποι οροί πρέπει να αραιώνονται µε ρυθµιστικό διάλυµα 

δείγµατος και κατόπιν να µετουσιώνονται. Για κάθε εκτέλεση δοκιµασίας – 

ανεξαρτήτως του αριθµού ταινιών δοκιµασίας µικροτιτλοποίησης που 

χρησιµοποιούνται – πρέπει να συµπεριλαµβάνονται οι οροί ελέγχου και οι πρότυποι 

οροί. Οι πρότυποι οροί πρέπει να τοποθετούνται εις διπλούν . 

7.3.3 Σύζευγµα (έτοιµο προς χρήση) 

Αποφύγετε την επιµόλυνση του έτοιµου για χρήση συζεύγµατος π.χ. 

χρησιµοποιώντας αποστειρωµένα ρύγχη. 

7.3.4 ∆ιάλυµα πλύσης 

Αραιώστε το συµπύκνωµα του ρυθµιστικού διαλύµατος πλύσης (V1) 1:30 µε 

αποσταγµένο νερό σε τελικό όγκο V2. 

Παράδειγµα: 


Συµπύκνωµα ρυθµιστικού 

διαλύµατος (V1) 

Τελικός όγκος (V2) 

25 ml 750 ml 

7.3.5 Υπόστρωµα TMB (έτοιµο προς χρήση) 

1 ml 30 ml 

Αποφύγετε την επιµόλυνση του έτοιµου για χρήση διαλύµατος υποστρώµατος π.χ. 

χρησιµοποιώντας αποστειρωµένα ρύγχη. 

Το υπόστρωµα TMB έχει χρωµατιστεί µε ανοιχτό µπλε-πράσινο χρώµα και κάθε 

διάλυµα µε ισχυρό χρώµα (εξασθένιση στα 650 mm έναντι απεσταγµένου νερού > 

0.2 OD) πρέπει να απορρίπτεται. 

7.3.6 ∆ιάλυµα διακοπής (έτοιµο προς χρήση) 

Pos: 17 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testdurchführ ung/T establauf/Überschrift T establauf @ 8\mod_1265793631810_53.doc @ 28930 @ 2 

GR

7.4 Επισκόπηση - ∆ιαδικασία δοκιµασίας 




ποσοτικά 

Προετοιµασία δειγµάτων, πρότυπου ορού και ορού ελέγχου 


Αραίωση δειγµάτων 

(∆είγµατα ασθενών, ορός ελέγχου και πρότυπος ορός) 

300 µl δείγµατος + 100 µl ρυθµιστικού διαλύµατος αραίωσης 

ΕΠΩΑΣΗ 10 min. / 110 °C 

ΦΥΓΟΚΕΝΤΡΙΣΗ 10 min. / 10,000 × g / 4 °C 

Κρατήστε το υπερκείµενο, απορρίψτε το ίζηµα 

 

Προσθέστε υπερκείµενο από δείγµατα (100 µl) 

 


θάλαµος υγρασίας 

 

ΠΛΥΣΗ (5 x 300 µl DIL WASH ) 

 

Πιπετάρετε διάλυµα συζεύγµατος PODCR (100 µl) 

 



 

ΠΛΥΣΗ (5 x 300 µl DIL WASH ) 

 

Πιπετάρετε διάλυµα υποστρώµατος TMB (100 µl) 

 



 

Πιπετάρετε διάλυµα διακοπής STOP (100 µl) 

 

∆ΙΑΒΑΣΤΕ ΤΗΝ ΑΠΟΡΡΟΦΗΣΗ ΣΤΑ 450 nm 

(αναφ. 650 nm)

7.5 Χειροκίνητη διαδικασία δοκιµασίας 

1. Προκαταρκτική επεξεργασία δειγµάτων (δείγµατα ασθενών, πρότυπος ορός και ορός 

ελέγχου), σύµφωνα µε την περιγραφή. 

2. Τοποθετήστε τον απαιτούµενο αριθµό κοιλοτήτων στο πλαίσιο και προετοιµάστε 

ένα φύλλο πρωτοκόλλου . 

3. Προσθέστε 100 µl από κάθε υπερκείµενο από τον πρότυπο ορό (εις διπλούν), 

αρνητικό έλεγχο και δείγµατα ασθενών στις κατάλληλες κοιλότητες των ταινιών 

εξέτασης µικροτιτλοποίησης. Αφήστε µία κοιλότητα για το τυφλό υπόστρωµα, π.χ. .: 

Candida antigen ποσοτική 

κοιλότητα A1 Υπόστρωµα τυφλό 

κοιλότητα B1 Αρνητικός έλεγχος 

κοιλότητα C1 Πρότυπος ορός 

κοιλότητα D1 Πρότυπος ορός 

κοιλότητα E1 ∆είγµα ασθενή 1.... 

4. Επώαση δείγµατος για 60 λεπτά (+/- 3 min) στους 37 °C (+/- 1 ℃) σε θάλαµο 

υγρασίας 

5. Μετά από την επώαση πλύνετε όλες τις κοιλότητες µε διάλυµα πλύσης (µε αυτόµατο 

πλύσης ή χειροκίνητα). 

- αναρροφήστε ή ανακινήστε για να εξάγετε το διάλυµα επώασης 

- γεµίστε κάθε κοιλότητα µε 300 µl διαλύµατος πλύσης 

- αναρροφήστε ή ανακινήστε για να εξάγετε το ρυθµιστικό διάλυµα πλύσης 

- επαναλάβετε τη διαδικασία πλύσης 4 φορές (συνολικά 5 φορές!) 

- στεγνώστε χτυπώντας την πλάκα µικροτιτλοποίησης σε µία χαρτοπετσέτα 

6. Προσθήκη του συζεύγµατος 

Προσθέστε 100 µl από το έτοιµο προς χρήση σύζευγµα Fehler! 

Dokumentvariable nicht definiert. στις κατάλληλες κοιλότητες (εξαίρεση τυφλό 

υπόστρωµα) 

7. Επώαση συζεύγµατος για 60 λεπτά (+/- 3 min) στους 37 °C (+/- 1 ℃) σε θάλαµο 

υγρασίας 

8. Μετά από την επώαση πλύνετε όλες τις κοιλότητες µε διάλυµα πλύσης (βλέπε 

παραπάνω) 

9. Προσθήκη υποστρώµατος 

Προσθέστε 100 µl έτοιµου προς χρήση διαλύµατος υποστρώµατος TMB σε κάθε 

κοιλότητα (συµπεριλαµβανοµένου τυφλού υποστρώµατος!) 

10. Επώαση υποστρώµατος για 30 λεπτά (+/- 1 min) στους 37 °C (+/- 1 °C) σε θάλαµο 

υγρασίας, προστατευµένο από το ηλιακό φως 

11. ∆ιακοπή της αντίδρασης 

Προσθέστε 100 µl διαλύµατος διακοπής σε κάθε κοιλότητα. Ανακινήστε ελαφρά 

την πλάκα µικροτιτλοποίησης για την ανάµιξη. 

12. Ανάγνωση εξασθένισης 

∆ιαβάστε την οπτική πυκνότητα (OD) εντός 60 λεπτών στα 450 nm έναντι τυφλού 

υποστρώµατος, µήκος κύµατος αναφοράς µεταξύ 620 nm και 690 nm (π.χ. 650 nm). 


GR


7.6 Αυτόµατη διαδικασία δοκιµασίας 

Το SERION ELISA είναι προσαρµοσµένο για την επεξεργασία σε αυτόµατα µηχανήµατα 

και ρυθµισµένα για τη χρήση µε Immunomat TM και Gemini. Η αυτόµατη διαδικασία είναι 

ανάλογα σχεδιασµένη µε τη χειροκίνητη χρήση. Παρακαλώ λάβετε υπόψη ότι υπό ειδικές 

συνθήκες εργασίας, ίσως να είναι απαραίτητες εσωτερικές εργαστηριακές προσαρµογές. 


7.7 Θετικός έλεγχος/ Έλεγχος ακρίβειας 

Για την περιοδική επαλήθευση της µεθόδου δοκιµασίας, προκειµένου να ικανοποιηθούν οι 

απαιτήσεις συστηµάτων διαχείρισης εσωτερική εργαστηριακής ποιότητας, συνιστούµε τη 

χρήση ελέγχων SERION ELISA controls για τον καθορισµό ακρίβειας και αξιοπιστίας των 

κύκλων δοκιµασίας SERION ELISA antigen. Η χρήση ελέγχων SERION ELISA controls 

περιγράφεται σε ειδικά εγχειρίδια οδηγιών. 


Ελληνικά 14

8 ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗ ∆ΟΚΙΜΑΣΙΑΣ 



8.1 Ποσοτικό προσδιορισµός µε τη µέθοδο 4PL 

Η βελτιστοποιηµένη απονοµή σηµάτων απορρόφησης στις ποσοτικές τιµές εξασφαλίζεται 

µε τη χρησιµοποίηση µη γραµµικών λειτουργιών, οι οποίες ρυθµίζουν µια σιγµοειδή 

καµπύλη χωρίς περαιτέρω µετασχηµατισµό στις τιµές οπτικής πυκνότητας (OD). Ο 

προσδιορισµός των συγκεντρώσεων αντιγόνων µε το SERION ELISA antigen διενεργείται 

µε το µοντέλο λογιστικής 4 παραµέτρων (4 PL) το οποίο είναι ιδανικό για την ακριβή 

προσαρµογή της καµπύλης. Βασίζεται στον τύπο: 

OD = A + 

1 + e 


D - A 

B(C - ln Conc.) 

Οι παράµετροι A, B, C, και D είναι αντιπροσωπευτικές για την ακριβή µορφή της 

καµπύλης: 

1. χαµηλότερη ασύµπτωτος παράµετρος A 

2. κλίση της καµπύλης παράµετρος B 

3. σηµείο καµπής παράµετρος C 

4. ανώτερη ασύµπτωτος παράµετρος D 

Για κάθε παρτίδα η πρότυπη καµπύλη υπολογίζεται από το Ινστιτούτο Virion\Serion ΕΠΕ 

(Würzburg, Γερµανία) σε επαναλαµβανόµενους κύκλους δοκιµασίας υπό ιδανικές 

συνθήκες. ∆εν απαιτείται κατανάλωση χρόνου και πολύ δαπανηρή κατασκευή πρότυπης 

καµπύλης από το χρήστη. 

Για τον υπολογισµό των συγκεντρώσεων αντιγόνων µίας ειδικής για την παρτίδα 

πρότυπης καµπύλης καθώς επίσης και ενός ειδικού για την καµπύλη πίνακα υπολογισµού 

συµπεριλαµβάνονται σε κάθε κιτ δοκιµασίας SERION ELISA antigen. Το λογισµικό 

υπολογισµού SERION evaluate όπως και το εργαλείο λογισµικού της Microsoft ® 

βασισµένο σε Excel, SERION activity διατίθενται κατόπιν αιτήσεως . 

Για την εξισορρόπηση των φυσιολογικών εναλλαγών της δοκιµασίας και για τον έλεγχο της 

ποιότητας του κύκλου της δοκιµασίας χρησιµοποιείται σε κάθε µεµονωµένο κύκλο 

δοκιµασίας ένας πρότυπος ορός. Για αυτόν τον ορό ελέγχου προσδιορίζεται µία τιµή 

αναφοράς µε εύρος ισχύος στον ποιοτικό έλεγχο του κατασκευαστή. Εντός αυτών των 

ορίων εξασφαλίζεται ο ορθός ποσοτικός προσδιορισµός της συγκέντρωσης αντιγόνων. 


GR

8.2 Κριτήρια ισχύος δοκιµασίας 

- Το κενό υπόστρωµα πρέπει να είναι < 0.25 OD. 

- Ο αρνητικός έλεγχος πρέπει να παράγει αρνητικό αποτέλεσµα δοκιµασίας. 

- Κατά τη χρήση ποσοτικών δοκιµασιών SERION ELISA antigen η µέση τιµή OD 

(µετά από την αφαίρεση του κενού υποστρώµατος!) του πρότυπου ορού πρέπει να 

βρίσκεται εντός του εύρους ισχύος, το οποίο ορίζεται στο πιστοποιητικό ποιοτικού 

ελέγχου ειδικό για την παρτίδα. 

- Η µεταβολή των τιµών OD του πρότυπου ορού ή δεν µπορεί να είναι υψηλότερη 

από 20 %. 

Εάν δεν τηρούνται αυτά τα κριτήρια, η δοκιµασία δεν έχει ισχύ και πρέπει να 

επαναλαµβάνεται. 


8.3 Υπολογισµός SERION ELISA antigen Candida 


8.3.1 Μη- αυτόµατος υπολογισµός 

Για την αξιολόγηση της δοκιµασίας SERION ELISA antigen συµπεριλαµβάνεται στο κιτ της 

δοκιµασίας ένα ειδικό για την παρτίδα πιστοποιητικό ελέγχου ποιότητας µε πρότυπη 

καµπύλη και πίνακα αξιολόγησης. Το κενό υποστρώµατος πρέπει να αφαιρείται 

από όλες τις τιµές OD πριν από τον υπολογισµό. 


Mέθοδος 1: Ποιοτικός υπολογισµός 

Για τον καθορισµό του εύρους cut-off πολλαπλασιάζεται η µέση τιµή της µετρηµένου 

πρότυπης OD µε τα αριθµητικά στοιχεία του πιστοποιητικού ποιοτικού ελέγχου (βλ. τους 

ειδικούς τύπους περίπτωσης), π.χ.: 

OD = 0.502 x MW(STD) µε ανώτερο cut-off 

OD = 0.352 x MW(STD) µε χαµηλότερο cut-off 

Εάν η µετρηµένη µέση αξία απορρόφησης του πρότυπου ορού είναι 0.970 OD, το εύρος 

του cut-off είναι µεταξύ 0.341-0.487 OD. 

Ελληνικά 16

Mέθοδος 2: Συνεχής προσδιορισµός δραστηριοτήτων αντιγόνων χρησιµοποιώντας την 

πρότυπη καµπύλη 

Οι αποκαλούµενες παραλλαγές διαδοκιµασίας (αποκλίσεις ηµέρα µε την ηµέρα και 

αποκλίσεις από εργαστήριο σε εργαστήριο) αντισταθµίζονται µε τον πολλαπλασιασµό της 

τρέχουσας µετρηµένης αξίας που λαµβάνεται από το δείγµα ενός ασθενή µε τον 

παράγοντα διόρθωσης F. Αυτός ο παράγοντας υπολογίζεται ως εξής : 

F = 


OD-τιµή αναφοράς (του πρότυπου ορού) 

OD-τρέχουσα τιµή (του πρότυπου ορού) 

Η διαδικασία είναι απαραίτητη για να ρυθµιστεί το τρέχον επίπεδο δοκιµασίας του χρήστη 

µε την πρότυπη καµπύλη, ειδική για την παρτίδα. Αρχικά, πρέπει οι 

καθηµερινές αποκλίσεις να διορθώνονται υπολογίζοντας το διορθωτικό παράγοντα F. 

1. Ο µέσος όρος των δύο τιµών OD του πρότυπου ορού πρέπει να υπολογίζεται και 

να επιβεβαιώνεται ότι βρίσκεται εντός του δεδοµένου εύρους ισχύος. 

2. Υπολογισµός του παράγοντα F: Η δεδοµένη τιµή αναφοράς διαιρείται µε τη µέση 

τιµή της απορρόφησης του πρότυπου ορού: 

F = τιµή αναφοράς απορρόφησης STD ορού / µέση τιµή απορρόφησης STD ορού. 

3. Όλες οι µετρηµένες τιµές των δειγµάτων ασθενή πολλαπλασιάζεται µε τον 

παράγοντα F. 

4. Οι δραστηριότητες αντιγόνων σε IU/ml ή U/ml µπορούν να προσδιοριστούν από την 

πρότυπη καµπύλη µε τις διορθωµένες τιµές. 


GR

8.3.2 Aυτόµατος υπολογισµός δοκιµασίας µε λογισµικό SERION evaluate 

Μετά από την εισαγωγή των τεσσάρων παραµέτρων και την τιµή αναφοράς του πρότυπου 

ορού, οι δραστηριότητες αντιγόνων υπολογίζονται on-line από επεξεργασµένη και 

µετρηµένη δοκιµασία SERION ELISA antigen, που τρέχει µε τον υπολογισµό από το 

λογισµικό SERION evaluate. 

Εάν η οπτική πυκνότητα του προτύπου είναι εκτός του εύρους ισχύος, εµφανίζεται το 

παρακάτω µήνυµα. 

„Πρότυπες τιµές εκτός εύρους στις ακόλουθες οµάδες: Οµάδα 1-24.” ή 

„Η πρότυπες τιµές διαφέρουν περισσότερο από 20 % στις ακόλουθες οµάδες: 

Οµάδα 1-24.” 

Σε τέτοιες περιπτώσεις ο κύκλος δοκιµασίας είναι άκυρος και πρέπει να επαναληφθεί. 

Οι παράµετροι και η τιµή αναφοράς πρέπει να µεταβάλλεται µόνο όταν υπάρχει αλλαγή 

παρτίδας (πίνακας υπολογισµού εµφανίζει παραµέτρους και τιµές αναφοράς). Η σωστή 

εισαγωγή ειδικών για την παρτίδα στοιχείων µπορεί να ελεγχθεί στη βάση της 

δραστηριότητας του πρότυπου ορού (σε IU/ml ή U/ml) σύµφωνα µε τον πρότυπο ορό. Η 

υπολογισµένη µέση τιµή των µονάδων πρέπει να αντιστοιχεί στη αξιολόγηση που 

εµφανίζεται στο ειδικό για την παρτίδα πιστοποιητικό. Υπάρχει αυτόµατη διόρθωση των 

µετρηµένων τιµών. Στην πρότυπη εκδοχή εκτύπωσης εµφανίζεται το εξής: 



Κωδικός δείγµατος 

τιµή OD 

U/ml 

Υπολογισµός

8.4 Όρια ποσοτικού προσδιορισµού 

Τα όρια ποσοτικού προσδιορισµού καθορίζονται στο πιστοποιητικό ελέγχου ποιότητας της 

δοκιµασίας SERION ELISA antigen. Η γραµµικότητα της αραίωσης εντός του εύρους έχει 

καταδειχτεί σε περιεκτικές µελέτες υπολογισµού. Σε περίπτωση που ένα δείγµα ασθενή 

παρουσιάζει αποτέλεσµα δοκιµασίας πάνω από το ανώτερο όριο του ποσοτικού 

προσδιορισµού, το δείγµα θα πρέπει να εξεταστεί σε υψηλότερη αραίωση. Η µε αυτόν τον 

τρόπο καθορισµένη δραστηριότητα αντιγόνων πρέπει να πολλαπλασιάζεται µε τον 

πρόσθετο παράγοντα αραίωσης. 


8.5 Εύρος οριακών τιµών 

Το εύρος οριακών τιµών της δοκιµασίας SERION ELISA antigen Candida καθορίζονται 

στο πιστοποιητικό ελέγχου ποιότητας και εµφανίζουν το εύρος για τα οριακά 

αποτελέσµατα της δοκιµασίας. Οι τιµές οι οποίες προκύπτουν κατά το δοκιµασία του 

δείγµατος ενός ασθενή, που µειώνονται κάτω από αυτό το όριο εµφανίζουν ένα αρνητικό 

αποτέλεσµα δοκιµασίας, τιµές επάνω από το όριο των οριακών τιµών ερµηνεύονται ως 

θετικές. Σε περιπτώσεις όπου τα αποτελέσµατα βρίσκονται εντός των ορίων των οριακών 

τιµών, δεν είναι δυνατή η ερµηνεία των αποτελεσµάτων. Σε τέτοιες περιπτώσεις, η 

δοκιµασία θα πρέπει να επαναλαµβάνεται παράλληλα µε ένα δείγµα παρακολούθησης, το 

οποίο λαµβάνεται µία µε δύο εβδοµάδες αργότερα από τον ασθενή (ζεύγος δείγµατος). 


8.6 Ερµηνεία των αποτελεσµάτων 


Θετικά αποτελέσµατα δοκιµασίας για δείγµατα ασθενών καταδεικνύουν µία µυκηταιµία 

από Candida. Τα αποτελέσµατα µπορούν να ερµηνευτούν µόνο σε συνδυασµό µε την 

κλινική εικόνα και άλλες µεθόδους ανίχνευσης. 

Ένα αποτέλεσµα µπορεί να θεωρηθεί θετικό εάν τουλάχιστον 2.6 µονάδες έχουν µετρηθεί 

στη δοκιµασία. Ένα τέτοιο αποτέλεσµα καταδεικνύει ότι το δείγµα περιέχει την ποσότητα 

Mannan, η οποία σχετίζεται µε 2.6 ng πρωτεΐνης Candida. Ωστόσο δεν είναι δυνατή η 

διάκριση µεταξύ ζωντανού και νεκρού οργανισµού, αντίστοιχα. 

Αρνητικά αποτελέσµατα δοκιµασίας δεν αποκλείουν µία οξεία λοίµωξη, ειδικά εάν βρεθούν 

υψηλοί τίτλοι αντισωµάτων. Σε τέτοιες περιπτώσεις µπορεί το αντιγόνο να είναι πλήρως 

καλυµµένο από αντισώµατα και ακόµη και η διαδικασία µετουσίωσης κατά τη διάρκεια της 

προετοιµασίας του δείγµατος µπορεί να µην είναι επαρκής ώστε να επιτρέπει την 

ανίχνευση του αντιγόνου. Επιπλέον, η χρονική στιγµή κατά τη διάρκεια µίας λοίµωξης, 

όταν παρατηρείται ένα δείγµα, ένα ακατάλληλο δείγµα, φτωχή προετοιµασία του δείγµατος 

και η φύλαξη µπορούν αν οδηγήσουν σε αρνητικό αποτέλεσµα. 



GR

8.7 Εύρος αναφοράς υγιών ατόµων 


∆οκιµασία τυχαίων ορών αιµοδοτών, που συλλέχθηκαν στη νότια Γερµανία, µε δοκιµασίες 

SERION ELISA antigen Candida έδωσαν αποτελέσµατα στην εξής κατανοµή. Από 103 

ορούς που εξετάστηκαν µε τη δοκιµασία SERION ELISA antigen Candida, 92 (89.3 %) 

ήταν αρνητικοί, έξι οροί (5.8 %) παρείχαν θετικό αποτέλεσµα και πέντε δείγµατα (4.9 %) 

θεωρήθηκαν οριακά. 


9 ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟ∆ΟΣΗΣ 


9.1 Ευαισθησία και Ειδικότητα 


Η δοκιµασία SERION ELISA antigen Candida επικυρώθηκε µε την ανάλυση 148 

δειγµάτων ορού από δωρητές αίµατος και 93 δειγµάτων από ασθενείς που εκδήλωσαν 

σηµεία καντιντίασης κατά τη διάρκεια της παραµονής τους σε µονάδα εντατικής θεραπείας, 

σε σύγκριση µε τα αποτελέσµατα που λήφθηκαν µε έναν εµπορικά διαθέσιµο 

προσδιορισµό ενός κορυφαίου Ευρωπαίου κατασκευαστή. Οι οροί οι οποίοι 

ταξινοµήθηκαν ως οριακοί δεν συµπεριλήφθηκαν στους υπολογισµούς της ευαισθησίας και 

εξειδίκευσης. 

Χαρακτηριστικά απόδοσης Ευαισθησία Εξειδίκευση 


Σε µία άλλη εσωτερική µελέτη, η καταδείχθηκε η διασταυρούµενη αντιδραστικότητα µε τα 

είδη Candida guillermondii, Candida glabrata, Candida krusei, Candida parapsilosis και 

Candida tropicalis µε το SERION ELISA antigen Candida µε σκοπό τη διασφάλιση µίας 

αναλυτικής διάγνωσης της Candida. 

Λόγω της οµοιότητας του Mannan µε το υδροξυαίθυλο-άµυλο (HES), το οποίο 

χρησιµοποιείται σε διογκωτές πλάσµατος για τη θεραπεία κυκλοφορικής ανεπάρκειας 

(υπογκαιµικό, αιµορραγικό και σηπτικό σοκ), αξιολογήθηκε η δυνητική διασταυρούµενη 

αντιδραστικότητα. Εντούτοις, δεν διαπιστώθηκε µετρήσιµη διασταυρούµενη 

αντιδραστικότητα µε το HES κατά τη χρήση της δοκιµασίας SERION ELISA antigen 

Candida. 


Ελληνικά 20

9.2 Επαναληψιµότητα 


Η ακρίβεια εντός της ίδιας σειράς δοκιµασιών διαπιστώθηκε µε ορούς διαφορετικής 

αντίδρασης σε πολλαπλές δοκιµασίες 20 φορές σε έναν κύκλο δοκιµασίας. Η ακρίβεια 

µεταξύ δοκιµασιών διαπιστώθηκε µε ορούς διαφορετικής αντίδρασης σε 10 ανεξάρτητους 

κύκλους δοκιµασίας. 


Πρότυπη απόκλιση 

Συντελεστής µεταβολής (CV %) = x 100 


∆είγµα 

Μέση τιµή 

(OD) 

Στην ίδια 

δοκιµασία 

(CV %) 



(OD) 

Μεταξύ 

δοκιµασιών 

(CV %) 

αρνητικά 0,223 9,6 0,225 7,3 

οριακά 0,507 2,4 0,476 5,3 

θετικά 1,413 2,5 1,356 2,7 

θετικά 2,851 2,0 2,442 8,1 


GR

10 ΜΕΤΡΑ ΑΣΦΑΛΕΙΑΣ 

10.1 Προειδοποιήσεις/ Προφυλάξεις 

Το SERION ELISA antigen σχεδιάστηκε για τη χρήση από εκπαιδευµένο προσωπικό το 

οποίο είναι καλά εξοικειωµένο µε τις εργαστηριακές πρακτικές. 

Όλα τα αντιδραστήρια του κιτ και τα ανθρώπινα δείγµατα θα πρέπει να χειρίζονται µε 

προσοχή, χρησιµοποιώντας τις καθιερωµένες πρακτικές εργαστηριακές µεθόδους. 

- Αυτό το κιτ περιέχει στοιχεία ανθρώπινου αίµατος. Αν και όλοι οι οροί ελέγχου και οι 

οροί cut-off έχουν εξεταστεί και βρέθηκαν αρνητικοί για το αντίσωµα αντι--HIV, 

αντιγόνο HBs (αντιγόνο επιφάνειας ιός ηπατίτιδας Β) και αντίσωµα αντι-HCV, θα 

πρέπει να θεωρούνται δυνητικά µολυσµατικοί. 

- Μην πιπετάρετε µε το στόµα. 

- Μην καπνίζετε, τρώτε ή πίνετε σε περιοχές στις οποίες χειρίζεστε δείγµατα οι 

αντιδραστήρια του κιτ. 

- Φοράτε γάντια µίας χρήσης, προστατευτικά ρούχα και γυαλιά κατά τη διάρκεια 

χειρισµού των αντιδραστηρίων του κιτ ή των δειγµάτων. 

Πλύνετε σχολαστικά τα χέρια σας µετά από το χειρισµό. 

- Το υλικό των ασθενών και άλλο δυνητικά µολυσµατικό υλικό θα πρέπει να 

απολυµαίνεται µετά από κάθε κύκλο δοκιµασίας. 

- Τα αντιδραστήρια θα πρέπει να φυλάσσονται µε ασφάλεια και να µη µπορούν να τα 

προσεγγίσουν αναρµόδια άτοµα, π.χ. παιδιά. 

10.2 ∆ιάθεση 

Παρακαλώ λάβετε υπόψη τις σχετικές νοµικές απαιτήσεις! 


Ελληνικά 22

11 ΑΝΑΦΟΡΕΣ 









62. 


Rev. 3, 32-45. 































GR


ÍNDICE 

1 UTILIZAÇÃO PREVISTA 

2 RELEVÂNCIA DIAGNÓSTICA 

3 SERION ELISA antigen – PRINCÍPIO DO TESTE 

4 CONTEÚDO DO KIT 

5 MATERIAIS NECESSÁRIOS MAS NÃO FORNECIDOS 

6 ARMAZENAMENTO E VALIDADE DOS REAGENTES 

7 Execução do teste SERION ELISA antigen 

7.1 Instruções gerais 

7.2 Preparação e armazenamento das amostras 

7.3 Preparação dos reagentes do kit 

7.4 Execução do teste – apresentação sinóptica 

7.5 Procedimento de teste manual 

7.6 Realização do teste pelo método automatizado 

7.7 Controle positivo / Controle da exatidãoo 

8 AVALIAÇÃO DO TESTE 

8.1 Quantificação de um ponto de acordo com o método-4PL 

8.2 Critérios de validade do teste 

8.3 Cálculos SERION ELISA antigen Candida 

8.4 Limites de quantificação 

8.5 Intervalo “borderline” (nos valores-limite) 

8.6 Interpretação dos resultados 

8.7 Intervalo de referência de indivíduos saudáveis 

9 CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO 

9.1 Sensibilidade e especificidade 

9.2 Reprodutibilidade 

10 MEDIDAS DE SEGURANÇA 

10.1 Advertências e medidas de precaução 

10.2 Eliminação de resíduos 

11 LITERATURA 

versão atual Nº.: V 1.12/09-1 

versão anterior: -- 

PT


português 2 


Ensaio imunoenzimático para a determinação de antígenos de Candida 

Para utilização no diagnóstico in vitro 


SERION ELISA antigen Candida Artigo n. o : ESR200 


1 UTILIZAÇÃO PREVISTA 


O teste SERION ELISA antigen Candida é um imunoensaio quantitativo e qualitativo para 

a pesquisa do antígeno de Candida em soro humano ou plasma. O ensaio é 

recomendado para a detecção de candidíase sistémica. 


2 RELEVÂNCIA DIAGNÓSTICA 


A Candida albicans é uma levedura ubíqua que, à semelhança de todas as espécies de 

Candida, pertence à família dos fungos leveduriformes. Além das leveduras que 

provocam sobretudo infecções superficiais, os chamados pseudomicélios constituem uma 

outra manifestação morfológica dos fungos leveduriformes. Em casos de micose invasiva, 

podem ocorrer tubos germinais e o desenvolvimento de pseudomicélios. A Candida 

produz e excreta diversas enzimas destrutivas, que permitem ao microorganismo 

patogênico facultativo penetrar através de barreiras como vasos sanguíneos e 

membranas mucosas. 

A Candida spp. é transmtida sobretudo pelo contato de secreções de pessoa para 

pessoa. A principal porta de entrada é a cavidade oral. Quaisquer mudanças nas 

propriedades fungistáticas da pele causadas por acidificação leve do pH ou alterações da 

flora bacteriana antagonista podem levar ao surgimento de candidíase superficial na 

superfície da pele. A micose sistêmica ocorre quando há colonização de membranas 

mucosas, sobretudo no trato gastrointestinal. 

As Candida são capazes de aderir ao epitélio de diversas membranas mucosas graças a 

proteínas de adesão e a outras estruturas à superfície das células. O esquema que se 

segue mostra os passos hipotéticos que podem levar à disseminação de infecções em 

casos de condições subjacentes graves. Não é prático proporcionar uma descrição exata 

das várias fases (Figura 1).

colonização das vias 

nasofaríngeas 

entrada na circulação 

sanguínea 

português 3 

passagem pelo lúmen 

do estômago 

transferência para o 

sistema linfático 

Figura 1: progressão das infecções por Candida. 

invasão de 

múltiplos órgãos 

transferência para 

o lúmen intestinal 

persorção de células 

de Candida 

A candidíase pode geralmente ser classificada em dois grupos principais, cujas 

características mais relevantes se encontram na tabela abaixo. 

infecções por Candida 

superficial micose profunda (invasiva) 

localização pele, mucosas órgãos principais 

imunocompetência 

do hospedeiro 

fatores de risco gravidez 

+ +,-/- 

diabetes 

AIDS 

disfunção da pele 

higiene oral deficiente 

progressão clínica inofensiva na maioria dos casos, 

nenhum perigo de vida 

quimioterapia 

supressão imunitária iatrogénica 

cateter venoso central 

radioterapia 

queimaduras de alto grau 

cirurgia 

potencialmente fatal na maioria 

dos casos 

terapêutica terapêutica eficaz eficácia da terapêutica depende 

da fase da infecção 

Tabela 1: características das infecções por Candida. 

O diagnóstico sorológico de candidíase envolve algumas dificudades. Por um lado, a 

colonização transitória por leveduras pode induzir uma resposta de anticorpos; por outro 

lado, a micose sistêmica por Candida em pacientes imunodeprimidos pode induzir apenas 

alterações ligeiras nas atividades de anticorpos. Nesses casos, os resultados sorológicos 

PT

devem ser interpretados de maneira crítica. Além disso, algumas candidíases sistêmicas 

não causam os sintomas típicos. 

Atualmente, não é possível concluir que os resultados de diferentes sistemas de teste 

para a detecção de anticorpos contra Candida são comparáveis ou mesmo permutáveis. 

A especificidade dos anticorpos detectados depende significativamente do sistema de 

teste (ELISA ou HAT) ou da preparação de antígeno utilizada. A detecção de anticorpos 

IgM por HAT é melhor do que a detecção de IgG, devido às melhores propriedades de 

aglutinação das moléculas de IgM. HAT detecta sobretudo anticorpos contra antígenos da 

parede celular de fundos leveduriformes, o que torna a interpretação serológica ainda 

mais complexa, mas permite a diferenciação.As variações das concentrações de 

anticorpos podem ser detectáveis por ELISA, mas não por HAT, tornando vantajosa a 

combinação das duas técnicas, por exemplo, no caso de decréscimo da atividade humoral 

de IgM e do aumento simultâneo da atividade de anticorpos IgG. 

Ainda não existe uma técnica única que permita o diagnóstico sorológico de Candida. O 

acompanhamento de pacientes sob risco requer diversos métodos, incluindo sorologia e 

detecção de antígenos. O teste SERION ELISA antigen é especialmente importante para 

detector antígenos específicos de Candida em amostras de pacientes. 

Pos: antigen/Testprinzip/Testprinzip 28643 7 @ /Arbeitsanleitungen 1 

ELISA ELISA antigen/Gültig antigen @ für 8\mod_1265792007310_38.doc alle Dokumente/ELISA @ 

3 SERION ELISA antigen – PRINCÍPIO DO TESTE 

O teste ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) é um imunoensaio particularmente 

adequado à determinação de anticorpos e antígenos no domínio da serologia infecciosa. 

A reação baseia-se na interação específica dos anticorpos com o seu antígeno 

correspondente. As tiras de teste das placas de microtitulação do SERION ELISA antigen 

são revestidas com anticorpos específicos do agente patogênico em causa. Se estiverem 

presentes antígenos na amostra do doente, ligam-se ao anticorpo fixado. Um anticorpo 

secundário, que foi conjugado com a enzima peroxidase, detecta o complexo imunitário e 

liga-se a ele. O substrato incolor, peróxido de hidrogénio (H2O2), e o cromogénio 

tetrametilbenzidina (TMB) são convertidos num produto de cor azul. A adição de solução 

de parada muda a cor para amarelo. A intensidade do sinal do produto desta reação é 

proporcional à concentração do antígeno na amostra, sendo medida por fotometria. 

Zusammensetzung/Candida 11\mod_1346845806738_38.doc Pos: 8 /Arbeitsanleitungen ELISA antigen: @ 52094 antigen/Gültig Inhalt @ 1 

und Zusammensetzung für nur ein Dokument/Inhalt @ und 

português 4

4 CONTEÚDO DO KIT 

Componentes do teste Unidades / 

volume 

Tiras de microtitulação separáveis, com oito poços individuais revestidos com 

anticorpos 

(total de 96) MTP 

1 moldura de microplaca. 

Soro padrão STD 

Antígeno de Candida albicans em soro humano suplementado com soro fetal bovino 

(FCS); 

negativo para Ac anti-HIV, Ag HBs (antígeno de superfície do vírus da hepatite B) e 

Ac anti-HCV; 

conservante: azida de sódio a < 0,1 %. 

Soro de controle negativo NEG , 

Soro humano suplementado com soro fetal bovino (FCS); 

negativo para Ac anti-HIV, Ag HBs (antígeno de superfície do vírus da hepatite B) e 

Ac anti-HCV; 

conservante: azida de sódio a < 0,1 %. 

Conjugado anti-Candida albicans (pronto a utilizar) PODCR , 

Anticorpo anti-Candida albicans conjugado com peroxidase de rábano, 

estabilizado com solução estabilizadora de proteínas contendo detergente; 

conservante: ProClin® 300 a 0,1 %. 

Concentrado de solução de lavagem (suficiente para 1500 ml) WASH , 

Solução de cloreto de sódio tampão TRIS e Tween 20; concentrada 30 vezes; 

conservante: ProClin® 300 a

5 MATERIAIS NECESSÁRIOS MAS NÃO FORNECIDOS 

- equipamento corrente de laboratório 

- fotómetro para placas de microtitulação com filtro, comprimento de onda 450 nm, 

comprimento de onda de referência recomendado na gama de 620 nm a 690 nm 

(p. ex. 650 nm) 

- incubadora 37 °C 

- bloco de aquecimento 110ºC 

- câmara húmida 

- água destilada 

- clipes de pressão (artigo n. o VT120) 



11\mod_1346935956390_38.doc @ 52264 @ 1 

português 6

6 ARMAZENAMENTO E VALIDADE DOS REAGENTES 

Reagente Armazenamento Validade 

Tiras de 

microtitulação 

(revestidas com 

anticorpo) 

Soros de controle / 

soros padrão 

Ainda fechadas 

Após a abertura, entre 2 e 8 °C na bolsa de alumínio 

fechada, junto com o excicante 

As tiras não utilizadas devem ser armazenadas 

secas e estanques na bolsa de alumínio 

hermeticamente fechada. 

português 7 

ver o prazo de validade; 

prazo de validade 

mínimo: 4 semanas; 

no caso de utilização e 

conservação corretas: 

até expirar o prazo de 

validade 

Após a abertura: entre 2 e 8 °C ver o prazo de validade; 

Conjugados Solução pronta a utilizar: entre 2 e 8 °C 

Tampão de diluição Ainda fechado 

Evitar contaminação – p. ex., utilizando somente 

pontas de pipetas esterilizadas 

Após a abertura: entre 2 e 8 °C 

Rejeitar as soluções turvas 

Solução de lavagem Concentrado após a abertura: entre 2 e 8 °C 

Diluição de utilização entre 2 e 8 °C 

Diluição de utilização à temperatura ambiente 

Limpar regularmente os recipientes utilizados para a 

diluição de utilização. Rejeitar as soluções turvas. 

Substrato TMB Solução pronta a utilizar: entre 2 e 8 °C, 

armazenada ao abrigo da luz 

Evitar contaminação – p. ex., utilizando somente 

pontas de pipetas esterilizadas 

Descartarse a solução ficar azul (extinção a 650 nm 

contra água destilada > 0,2 DO). 

24 meses a partir da 

data de fabrico 







6 meses 




2 semanas; 

1 semana 




Solução de parada Após a abertura, à temperatura ambiente ver o prazo de 

validade; 


PT

7 Execução do teste SERION ELISA antigen 


7.1 Instruções gerais 

Utilize os reagentes do SERION ELISA antigen apenas quando utilizar o ensaio SERION 

ELISA antigen. Os componentes não podem ser trocados por reagentes de outros 

fabricantes. Os soros padrão, os soros de controle e o conjugado dos imunoensaios 

SERION ELISA antigen estão ajustados para o lote específico do kit de teste e não 

podem ser utilizados em outros lotes. 

O tampão de diluição, a solução de lavagem, o substrato e a solução de parada poderão 

ser utilizados em todos os testes SERION ELISA antigen, independentemente do lote e 

do kit. 

Antes da abertura, todos os componentes dos testes SERION ELISA antigen poderão ser 

utilizados até o seu limite de validade (vide as indicações da etiqueta), desde que sejam 

armazenados corretamente. Os reagentes não deverão ser utilizados para além do limite 

da validade. 

Qualquer alteração ou a diluição incorreta dos reagentes poderá causar uma perda da 

sensibilidade. 

Os reagentes de teste deverão ser protegidos da luz forte durante o armazenamento e a 

incubação. Após a utilização devem ser bem fechados, a fim de evitar que sequem ou 

sejam contaminados. 

A bolsa de alumínio para a placa de microtitulação somente deve ser cortada nos lugares 

previstos do lado marcado, para que possa ser vedada novamente. Não utilizar as tiras se 

a bolsa de alumínio estiver danificada ou se a bolsa com as tiras restantes e o dessecante 

não tiver sido corretamente vedada. 

Para evitar a contaminação, empregar sempre técnicas assépticas para extrair as 

alíquotas de reagentes. Para evitar falsos resultados positivos, a ponta da pipeta nunca 

deverá tocar, nem molhar, o bordo superior dos poços durante a pipetagem do conjugado. 

Ao fechar os frascos, deverá ter-se atenção para que as suas tampas não sejam 

trocadas. 

Em particular, a solução de substrato TMB é sensível a substâncias oxidantes e a íons de 

metais pesados. Esta tem de ser sempre armazenada ao abrigo da luz e aberta apenas 

em condições de obscuridade e imediatamente antes de ser utilizada. Esta solução 

apresenta uma cor azul-esverdeada clara. 

Deve evitar-se o contato da pele com o substrato e a solução de parada. 

A reprodutibilidade dos resultados depende, de entre outros fatores, da mistura cuidadosa 

dos reagentes preparados. Antes de utilizar os soros de controle e o conjugado, os 

recipientes deverão ser bem agitados. As amostras também devem ser bem misturadas 

após a diluição (p. ex. com um vórtex). 

português 8

A pipetagem deve ser efetuada cuidadosamente, observando-se os tempos e 

temperaturas de incubação prescritos. Grandes diferenças de tempo entre a pipetagem 

do primeiro e do último poço na adição de amostras/soros de controle, conjugado e 

substrato levam a “tempos de pré-incubação” diferentes, o que poderá influenciar 

consideravelmente a precisão e a reprodutibilidade dos valores medidos. 

Só o cumprimento rigoroso destas instruções garante resultados corretos. 

O teste SERION ELISA antigen só será válido se forem observados os critérios de 

validação específicos para o lote. Estes critérios estão indicados no certificado de controle 

de qualidade contido no kit. 

Uma lavagem correta evita testes inespecíficos. Por isso, as instruções de utilização dos 

aparelhos de lavagem utilizados deverão ser observadas. Os poços de fundo plano 

devem ser cheios uniformemente com solução de lavagem. Ao fim do procedimento, é 

importante certificar-se de que a solução de lavagem foi completamente removida dos 

poços, a fim de evitar efeitos de diluição incontroláveis. Evitar a formação de espuma! 

Durante a lavagem e a aspiração, tome cuidado para não danificar a inscrição (agente 

patogênico / AG) das tiras de microtitulação a fim de evitar equívocos. 


7.2 Preparação e armazenamento das amostras 

Amostras lipémicas, hemolíticas ou ictéricas (soro ou plasma) só deverão ser utilizadas 

sob reserva. Não deverão ser aproveitadas amostras contaminadas por bactérias. São 

adequadas as amostras de soro ou de plasma (EDTA, citrato, heparina) colhidas de 

acordo com os métodos laboratoriais convencionais. 


português 9 

PT

7.2.1 Preparação dos espécimes 

Antes do início do teste, diluir as amostras (amostras dos pacientes, padrões e controles 

negativo) (V1) em tampão de diluição (V2) do seguinte modo: 

V1 + V2 = 3+1 em 300 µl de amostra (V1) 

português 10 

por 100 µl de tampão de diluição (V2) 

Após cada diluição, e antes da pipetagem na microplaca, as amostras devem ser bem 

misturadas a fim de se obter uma solução homogênea. 

Por fim, as amostras devem ser aquecidas a 110 ºC (+/- 5 °C) durante 10 minutos. É 

essencial cumprir o tempo e a temperatura indicados! Os recipientes de reação 

convencionais não são adequados para este passo de termólise, pelo que recomendamos 

o uso de recipientes de reação safe-lock ou semelhantes com fecho de rosca. 

Se for usado um bloco aquecedor com termostato, a tempertur2a deve ser controlada 

utilizando-se um termômetro calibrado e levando em consideração o tempo de préaquecimento 

do bloco. Se necessário, o bloco deve ser ajustado até a temperatura 

necessária. Durante a termólise, um precipitado branco leitoso de formará e precisará ser 

removido por centrifugação em uma centrífuga de bancada refrigerada a 10.000 g por 10 

minutos. Em seguida, o sobrenadante claro obtido poderá ser usado para exame. 


7.2.2 Armazenamento das amostras 

As amostras dos doentes tratadas não deverão ser armazenadas durante mais de 24 

horas, quando mantidas a 2º-8ºC. As amostras não tratadas não devem ser armazenadas 

a 2º-8ºC por mais de 7 dias. É possível prolongar o armazenamento congelando a ≤-20°C. 

Evitar um descongelamento e recongelamento repetido das amostras. 


7.3 Preparação dos reagentes do kit 

Deixar todos os reagentes atingirem a temperatura ambiente antes de utilizá-los. 

7.3.1 Tiras de microtitulação 

As tiras de microtitulação em suas molduras estão embaladas juntamente com um 

agente dessecante numa sacola de alumínio. Retirar da moldura os poços que não 

serão utilizados e colocá-los novamente na sacola de alumínio, fechando-a 

hermeticamente. 

7.3.2 Soros de controlo / soros padrão 

Os soros de controle e padrão têm de ser diluídos com tampão da amostra e 

depois desnaturados. Qualquer que seja o número das tiras de microtitulação 

utilizadas, todos os teste devem incluir soros padrão e de controle. Os soros 

padrão devem ser incluídos em duplicata. 

7.3.3 Conjugado (pronto para usar) 

Evite contaminar conjugados prontos para uso (p. ex. use pontas de pipetas 

estéreis). 

7.3.4 Solução de lavagem 

Diluir o concentrado de solução de lavagem (V1) 1:30 com água destilada a um 

volume final (V2). 

Exemplo: 

Concentrado de tampáo (V1) Volume final (V2) 

7.3.5 Substrato TMB (pronto para uso) 

português 11 

25 ml 750 ml 

1 ml 30 ml 

Evite contaminar a solução de substrato pronta para uso (p.ex. use pontas de 

pipetas estéreis). 

A solução TMB apresenta coloração verde-azulada clara. Todas as soluções que 

apresentarem cores intensas (atenuação >0,2 DO maior que a da água destilada) 

devem ser descartadas. 

7.3.6 Solução de paragem (pronta a utilizar) 


antigen/Testdurchführung/Testablauf/Überschrift Testablauf @ 

8\mod_1265793631810_38.doc @ 28927 @ 2 

PT

7.4 Execução do teste – apresentação sinóptica 



português 12 


quantitativo 

Preparação de amostras, controles e soro padrão 

Diluição da amostra 

(amostras de pacientes, soros padrão e de controle) 

Amostra 300 µl + tampão de diluição 100 µl 

INCUBAÇÃO 10 min./ 110 °C 

CENTRIFUGAÇÃO 10 min. / 10.000 × g / 4 °C 

Guardar o sobrenadante e eliminar pellet 

 

Adicionar sobrenadante das amostras (100 µl) 

 

INCUBAÇÃO 60 min./ 37 °C  

câmara úmida 

 


 

Pipetar solução de conjugado PODCR (100 µl) 

 



 


 

Adição da solução de substrato TMB (100 µl) 

 



 

Adicionar solução de paragem STOP (100 µl) 

 

LER ABSORBÂNCIA a 450 nm (ref. 650 nm)

7.5 Procedimento de teste manual 

1. Pré-tratamento de amostras (amostras de pacientes, padrões e soros de controle) da 

forma descrita. 

2. Colocar o número necessário de poços na moldura de microplaca e preparar a 

folha de protocolo. 

3. Pipetar 100 µl dos sobrenadantes do soro padrão (em duplicata), controle 

negativo e amostras de pacientes nas cavidades apropriadas das tiras de 

micropoços de teste. Separe um poço para o branco do substrato, separando um 

poço para o branco do substrato, p. ex.: 

Candida antigen quantitativo 

poço A1 branco de substrato 

poço B1 controle negativo 

poço C1 soro padrão 

poço D1 soro padrão 

poço E1 Amostra do doente 1… 

4. Incubação das amostras durante 60 minutos (+/- 3 min.) a 37ºC (+/- 1°C) em câmara 

úmida. 

5. No fim do tempo de incubação, lavar todos os poços (aparelho de lavagem ou à 

mão): 

- aspirar ou separar solução de incubação 

- encher cada poço com 300 µl de solução de lavagem 

- aspirar ou separar o tampão de lavagem 

- repetir o procedimento de lavagem 4 vezes (ou 5 vezes!) 

- esvaziar a microplaca, batendo-a sobre toalhas de papel 

6. Adição de conjugado 

Adicionar 100 µl da solução de conjugado pronta para uso nos poços apropriados 

(exceto o branco de substrato) 

7. Incubação do conjugado durante 60 minutos (+/- 3 min.) a 37°C (+/- 1ºC) em 

câmara úmida. 

8. depois de incubar, lave todos os poços com a solução de lavagem (ver acima). 

9. Adição de substrato 

Adicione 100 µl de solução de substrato TMB pronta para usar em cada cavidade, 

incluindo a cavidade do branco. 

10. Incube o substrato por 30 minutos (+/- 1 min) a 37 ºC (+/- 1 min) ao abrigo da luz e 

em câmara úmida. 

11. Parada da reação 

Adicionar 100 µl da solução de parada a cada um dos poços e agitar suavemente a 

placa de microtitulação para misturar. 

12. Leitura da densidade óptica 

Ler a densidade óptica (DO) após 60 minutos a 450 nm contra o branco do substrato; 

comprimento de onda de referência entre 620 nm e 690 nm (p. ex. 650 nm). 


português 13 

PT

7.6 Realização do teste pelo método automatizado 

Os testes SERION ELISA são adequados para o processamento automatizado, tendo 

sido avaliados com os equipamentos Immunomat TM e Gemini. O processamento 

automatizado é realizado de maneira análoga ao método manual. Leve em consideração 

que, sob condições de trabalho especiais, poderá ser necessário ajustar os tempos de 

incubação internos do laboratório. 


7.7 Controle positivo / Controle da exatidãoo 

Para a verificação periódica do método de teste, em conformidade com os requisitos dos 

sistemas internos de gestão da qualidade laboratorial, recomendamos a utilização dos 

SERION ELISA controls para determinar a precisão e a exatidão dos testes realizados 

com o SERION ELISA antigen. A utilização dos SERION ELISA controls encontra-se 

descrita num manual de instruções específico. 


português 14

8 AVALIAÇÃO DO TESTE 



8.1 Quantificação de um ponto de acordo com o método-4PL 

As funções não lineares que ajustam as curvas sigmoidais diretamente – sem outras 

transformações – aos valores DO são as que fornecem a maior exatidão possível na 

atribuição dos sinais de absorção a valores quantitativos. A determinação da 

concentração de antígenos com o SERION ELISA antigen realiza-se de acordo com o 

modelo “4-parameter logistic-log” (4PL), que é ideal para um ajuste exato da curva. A 

função matemática é descrita pela fórmula seguinte: 

DO = A + 

1 + e 

português 15 

D - A 

B(C – em conc.) 

Os parâmetros A, B, C e D representam exatamente o perfil da curva e definem: 

1. a assímptota inferior parâmetro A 

2. declive da curva parâmetro B 

3. o ponto de inflexão da curva parâmetro C 

4. a assímptota superior parâmetro D 

O Institut Virion\Serion GmbH (Würzburg, Alemanha) averigua as curvas padrão para 

cada lote do kit em testes repetidos, realizados sob condições ótimas. Os elevados custos 

e tempo despendidos na construção da curva padrão são assim poupados ao utilizador. 

Para avaliar as concentrações de antígenos, em cada embalagem do kit SERION ELISA 

antigen é fornecida uma curva padrão e uma tabela de valores específicas para o lote. O 

software de avaliação SERION evaluate e a ferramenta para Microsoft ® Excel SERION 

avidity estão disponíveis sob solicitação. 

Para compensar variações normais de testes, e para poder verificar a qualidade dos 

testes realizados, utiliza-se um soro padrão em cada teste. No controle de qualidade do 

fabricante, são atribuídos a este soro de controle um valor de referência e um intervalo de 

validade. Dentro deste intervalo, a quantificação da concentração de antígenos é segura e 

fiável. 


PT

8.2 Critérios de validade do teste 

- O branco do substrato tem de ter um valor de DO < 0,25. 

- O controle negativo tem de produzir um resultado de teste negativo. 

- Nos testes quantitativos SERION ELISA antigen, o valor médio de DO do soro 

padrão (após a subtracção do branco de substrato) tem de encontrar-se dentro do 

intervalo de validade indicado no certificado de controle de qualidade específico 

para o lote. 

- A variação dos valores de DO do soro padrão não deverá ser maior que 20%. 

Se estes critérios não forem satisfeitos, o teste será inválido e deverá ser repetido. 


8.3 Cálculos SERION ELISA antigen Candida 


8.3.1 Avaliação não automatizada 

Para a avaliação dos testes SERION ELISA antigen, é fornecido em cada kit um 

certificado de controle de qualidade, específico para o lote que contém a curva padrão e 

uma tabela de valores. O valor do branco do substrato deverá ser subtraído de todos os 

valores de DO antes da avaliação. 


Método 1: Avaliação qualitativa 

Para a determinação do intervalo cut-off, multiplica-se o valor médio da DO do soro 

padrão pelos valores numéricos indicados no certificado de controle de qualidade (vide as 

fórmulas para os sistemas especiais), p. ex.: 

DO = 0,502 x valor médio (PADRÃO) no limite superior de cut-off 

DO = 0,352 x valor médio (PADRÃO) no limite inferior de cut-off 

Se, por exemplo, o valor médio de absorção do soro padrão for de 0,970, o intervalo cutoff 

será de 0,341 a 0,487. 

português 16

Método 2: Determinação contínua das atividades de antígenos utilizando a curva 

padrão 

As variações de testes que ocorrem de dia para dia ou de laboratório para laboratório (as 

chamadas variações interensaio) são compensadas através da multiplicação do valor de 

medição atual das amostras dos doentes pelo fator de correção F. Este fator é calculado 

da seguinte forma: 

F = 

português 17 

valor DO de referência (do soro padrão) 

valor DO atual (do soro padrão) 

Este procedimento é necessário para ajustar o nível atual do teste do utilizador à curva 

padrão específica do lote. Primeiro as variações diárias deverão ser corrigidas por meio 

do cálculo do fator F. 

1. Calcular o valor médio dos dois valores DO do padrão e verificar se o valor se 

encontra na gama de validade indicada. 

2. Cálculo do fator F: o valor de referência indicado deverá ser dividido pelo valor 

médio da absorção do soro padrão: 

F = valor de referência absorção soro padrão / valor médio absorção soro padrão. 

3. Todos os valores de medição das amostras dos doentes são multiplicados por F. 

4. Com base na curva padrão e nos valores de medição corrigidos, podem ser 

determinadas as atividades dos antígenos em UI/ml ou U/ml. 


PT

8.3.2 Avaliação automática do teste com o software SERION evaluate 

Depois de introduzidos os quatro parâmetros e o valor de referência do soro padrão, as 

atividades dos antígenos são calculadas pelo programa de avaliação SERION evaluate 

após o processamento e a medição dos testes SERION ELISA evaluate. 

Se a densidade óptica do padrão estiver fora do intervalo de validade, a seguinte 

mensagem será mostrada (em inglês): 

„Standard values out of ranges in following groups: Group 1-24.” ou 

„Standard value differ more than 20 % in following groups: Group 1-24.” 

Nestes casos, o teste é inválido, devendo ser repetido. 

Os parâmetros e o valor de referência só deverão ser mudados em caso de troca do lote 

(os parâmetros e o valor de referência estão indicados na tabela de valores). É possível 

verificar se os dados específicos do lote foram introduzidos corretamente com base na 

atividade (em UI/ml ou U/ml) atribuída ao soro padrão. O valor médio das unidades 

resultante deverá corresponder ao valor de unidade indicado no certificado específico do 

lote. Uma correção dos valores de medição é efetuada automaticamente. Na impressão 

dos valores de medição (versão padrão) aparecerá: 


8.4 Limites de quantificação 

português 18 

Código da amostra: 

Valor de DO 

U/ml 

Avaliação 

Os limites de quantificação estão especificados no certificado de controle de qualidade do 

teste SERION ELISA antigen. A linearidade da diluição dentro deste intervalo foi 

demonstrada em estudos de avaliação abrangentes. No caso de a amostra do doente 

apresentar um resultado acima do limite de quantificação, a amostra poderá ser analisada 

com uma diluição maior. A atividade do antígeno determinada deste modo deverá ser 

multiplicada pelo fator de diluição adicional. 


8.5 Intervalo “borderline” (nos valores-limite) 

O intervalo “borderline” (nos valores-limite) do teste SERION ELISA antigen Candida está 

especificado no certificado de controle de qualidade do teste e indica a gama de valoreslimite 

dos resultados do teste. Valores de teste obtidos de amostras de doentes que se 

situem abaixo deste intervalo indicam resultados negativos; valores que se situem acima 

deste intervalo são interpretados como positivos. Nos casos em que os resultados se 

encontrem dentro do intervalo “borderline” (valores-limite), não é possível uma 

interpretação definitiva. Nestes casos, o teste deve ser repetido paralelamente a uma 

outra amostra, colhida do doente uma ou duas semanas depois (par sérico). 

Pos: 31 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testauswertung/Kapitelüberschrift: Inter pretati on der Ergebnisse @ 8\mod_1265792956649_38.doc @ 28817 @ 2

8.6 Interpretação dos resultados 


Amostras de doentes com resultados positivos indicam fungemia por Candida. Os 

resultados só podem ser interpretados de acordo com o quadro clínico e com outros 

métodos de detecção. 

Um resultado pode ser considerado positive quando o teste mede pelo menos 2,6 

unidades. Um resultado desta natureza indica que a amostra contém a quantidade de 

Mannan associada a 2,6 ng de proteína de Candida. Contudo, o ensaio não consegue 

distinguir entre organismos vivos ou mortos. 

Resultados negativos no teste não excluem infecções aguda, sobretudo quando se 

encontram títulos elevados de anticorpos. Nestes casos, pode acontecer que o antígeno 

esteja totalmente mascarado pelos anticorpos e que mesmo o procedimento de 

desnaturação durante a preparação da amostra não seja suficiente para permitir a 

detecção do antígeno. Além disso, o momento da infecção em que a amostra é obtido, 

uma amostra inadequada, uma má preparação da amostra e um armazenamento 

inconveniente podem provocar resultados negativos. 


8.7 Intervalo de referência de indivíduos saudáveis 


A análise de soros de dadores de sangue aleatórios, colhidos na região do sul da 

Alemanha, com o teste SERION ELISA antigen Candida resultou na distribuição que se 

segue. Dos 103 soros analisados com o teste SERION ELISELISA antigen Candida, 92 

(89,3 %) foram negativos, seis (5,8%) foram positivos e cinco (4,9%) foram considerados 

limites. 


9 CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO 


9.1 Sensibilidade e especificidade 


O teste SERION ELISA antigen Candida foi validade por uma análise de 148 amostras de 

soro de doadores de sangue e 93 amostras de pacientes em unidades de terapia 

intensiva que apresentavam sinais de candidíase. Os resultados foram comparados com 

os de um ensaio disponível comercialmente produzido por um importante fabricante 

europeu. Os soros classificados como limítrodes não foram incluídos nos cálculos de 

sensibilidade e especificidade. 

Características de desempenho Sensibilidade Especificidade 

SERION ELISA antigen Candida > 99,9 % 97,8 % 

português 19 

PT

Em outro estudo interno, a reatividade cruzada com espécies de Candida guillermondii, 

Candida glabrata, Candida krusei, Candida parapsilosis e Candida tropicalis com o teste 

SERION ELISA antigen Candida foi demonstrada para garantir um diagnóstico completo 

de Candida. 

Como a manana e o hidroxietilamido (HES) usado como expansor plasmático em casos 

de falência circulatória (p.ex. choque hemorrágico, hipovolêmico ou séptico), a 

possibilidade de reatividade cruzada foi avaliada. O teste SERION ELISA antigen Candida 

não revelou nenhuma reação cruzada com HES. 


9.2 Reprodutibilidade 


A reprodutibilidade intra-ensaio foi averiguada com soros de reatividade diferente em 

preparação múltipla (n = 20) dentro de uma preparação do ensaio. Para a determinação 

da reprodutibilidade interensaio, foram testados soros com reatividades diferentes em 10 

preparações realizadas independentemente. 

português 20 

Desvio padrão 

Coeficiente de variação (CV %) = x 100 


Amostra 

Valor médio 

(OD) 

Intra-ensaio 

(CV %) 

Valor médio 

Valor médio 

(OD) 

Interensaio 

(CV %) 

negativo 0,223 9,6 0,225 7,3 

no valor limite 0,507 2,4 0,476 5,3 

positivo 1,413 2,5 1,356 2,7 

positivo 2,851 2,0 2,442 8,1 

Pos: 40 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Allgemeine T exte ELISA antigen/Sicherheitsmaßnahmen @ 8\mod_1265797262616_38.doc @ 29417 @ 122

10 MEDIDAS DE SEGURANÇA 

10.1 Advertências e medidas de precaução 

O SERION ELISA antigen destina-se a ser utilizado unicamente por pessoal especializado 

familiarizado com as boas práticas de laboratório. 

À manipulação dos reagentes de teste e das amostras dos doentes aplicam-se os 

princípios das boas práticas de laboratório. 

- Este kit de teste contém componentes de soros humanos. Embora todos os soros 

de controle sejam negativos para Ac anti-HIV, Ag HBs (antígeno de superfície do 

vírus da hepatite B) e Ac anti-HCV, eles deverão ser considerados potencialmente 

infecciosos. 

- Não pipetar com a boca. 

- Nas áreas onde se trabalha com reagentes de teste ou com amostras de doentes, 

não deverá ser permitido comer, beber ou fumar. 

- Na manipulação de reagentes de teste e de amostras de doentes, deve-se utilizar 

bata de laboratório, luvas descartáveis e óculos de proteção. A seguir, lavar muito 

bem as mãos. 

- As amostras dos doentes e todos os materiais potencialmente infecciosos deverão 

ser descontaminados após a realização do teste. 

- Guardar os reagentes fora do alcance de pessoas não autorizadas, incluindo 

crianças. 

10.2 Eliminação de resíduos 

Observar as respectivas disposições legais vigentes. 


português 21 

PT

11 LITERATURA 









62. 


Rev. 3, 32-45. 






























português 22


OBSAH 

1 POUŽITÍ 

2 DIAGNOSTICKÁ RELEVANCE 

3 SERION ELISA antigen - PRINCIP TESTU 

4 SLOŽENÍ KITU 

5 POŽADOVANÝ MATERIÁL, KTERÝ NENÍ PŘEDMĚTEM DODÁVKY 

6 UCHOVÁVÁNÍ A STABILITA 

7 SERION ELISA antigen - POSTUP PŘI TESTU 

7.1 Obecné poznámky 

7.2 Příprava vzorku a uchovávání 

7.3 Příprava reagencií soupravy 

7.4 Přehled postupu použitého při testu 

7.5 Postup manuálního testu 

7.6 Postup použitý při automatickém testu 

7.7 Pozitivní kontrola/kontrola přesnosti 

8 HODNOCENÍ TESTU 

8.1 Jednobodová kvantifikace pomocí metody 4PL 

8.2 Kritéria platnosti 

8.3 Výpočet SERION ELISA antigen Candida 

8.4 Meze kvantifikace 

8.5 Hraniční rozpětí 

8.6 Interpretace výsledků 

8.7 Referenční rozsah zdravých jednotlivců 

9 CHARAKTERISTIKY VÝSLEDKŮ 

9.1 Citlivost a specificita 

9.2 Reprodukovatelnost 

10 BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ 

10.1 Výstražná upozornění 

10.2 Likvidace 

11 ODKAZY 

Současná verze č. V: V 1.12/09-1 

předchozí verze: -- 

EN 

EL ES 

PT 

CZ


česky 2 


Enzymová imunoanalýza ke stanovení kandidového antigenu 

pro použití v diagnostice in vitro 


SERION ELISA antigen Candida Objednávkové č.: ESR200 


1 POUŽITÍ 


Test SERION ELISA antigen Candida je kvantitativní a kvalitativní imunologické stanovení 

k detekci kandidového antigenu v séru nebo plazma. Stanovení je doporučováno k detekci 

systémové kandidózy. 


2 DIAGNOSTICKÁ RELEVANCE 


Candida albicans je všeobecně rozšířená kvasinka, která jako všechny druhy Candida, 

patřící do čeledi kvasinkovitých hub. Kromě kvasinkovité formy, která způsobuje primárně 

superficiální infekce, jsou dalším morfologickým projevem kvasinkovitých hub tzv. 

pseudomycelia. V případech invazivních mykóz se vyskytují zárodečné klíčky a dochází ke 

tvorbě pseudomycelií. Druhy Candida produkují a vylučují velký počet destruktivních 

enzymů, které umožňují fakultativně patogenním organismům, aby pronikly bariérami 

sliznic a cév. 

Druhy Candida se primárně přenáší těsným kontaktem mezi osobami. Primární vstupní 

branou jsou ústa. Změny fungistatických vlastností kůže následkem mírně kyselého pH a 

konkurenční bakteriální flóry mohou usnadnit vznik povrchové kandidózy na povrchu kůže. 

Systémová mykóza je výsledkem kolonizace sliznic, zejména v gastrointestinálním traktu. 

Druhy kandida dokáží ulpívat na epitelu pestré škály sliznic díky adhezním proteinům a 

dalším buněčným povrchovým strukturám. Následující schéma ukazuje hypotetické kroky, 

které mohou způsobit rozšíření infekcí v případě závažných základních podmínek: Přesný 

popis různých stadií není v rámci tohoto textu možný. (Obrázek 1) 

Kolonizace 

nasofaryngeálního traktu 

Vstup do 

krevního okruhu 

Obrázek 1: Progrese infekcí kandidami 

Průchod lumenem 

žaludku 

Přenos do 

uzlinového systému 

Invaze 

do více orgánů 

Přechod do 

lumenu střeva 

persorpce 

kandid - buněk

Kandidózy se obecně dělí do dvou hlavních skupin, jejichž hlavní charakteristiky jsou 

uvedeny v následující tabulce. 

česky 3 

infekce kandidami 

superficiální hluboká mykóza (invazivní) 

Lokalizace kůže, sliznice hlavní orgány 

Imunitní způsobilost 

hostitele 

Rizikové faktory těhotenství 

+ +,-/- 

diabetes 

AIDS 

dysfunkce kůže 

nedostatečná ústní hygiena 

Klinická progrese ve většině případů neškodné 

bez nebezpečí života 

chemoterapie 

iatrogenní potlačení imunity 

katétr centrální vény 

radioterapie 

popáleniny vysokého stupně 

chirurgický zákrok 

ve většině případů život 

ohrožující 

terapie efektivní terapie účinnost terapie závisí na stádiu 

infekce 

Tabulka 1: Charakteristiky infekcí kandidami 

Diagnóza infekcí kandidami pomocí sérologických metod není jednoduchá: na jedné 

straně může přechodná kolonizace kvasinkami vyvolat odezvu protilátek, na druhé straně 

může systémová mykóza způsobená kandidami u pacientů s imunosupresí vést pouze 

k nevýrazným změnám aktivity protilátek. Takové situace vyžadují kritickou interpretaci 

sérologických nálezů. Navíc systémové infekce kandidami nemusí způsobovat typické 

symptomy. 

V současnosti není možné přijmout závěr, že výsledky různých testovacích systémů pro 

zjištění protilátek proti kandidám jsou buď srovnatelné, nebo dokonce zaměnitelné. 

Specificita detekovaných protilátek významně závisí na systému testu (ELISA nebo HAT) 

nebo na použité antigenovém přípravku. Detekce protilátek IgM pomocí HAT je vyšší než 

detekce protilátek IgG díky vyšším aglutinačním vlastnostem molekul IgM. HAT hlavně 

detekuje protilátky proti antigenům buněčné stěny kvasinkovitých hub, které ještě dále 

komplikují sérologickou interpretaci, ale dává příležitost k diferenciaci. 

Změna v koncentraci protilátek může být detekovatelná pomocí testů ELISA, ale ne 

pomocí HAT, proto je výhodná kombinace obou postupů, např. v případě poklesu aktivity 

protilátek IgM a za současného zvýšení aktivity protilátek IgG. 

V současnosti neexistuje žádný jediný postup, který by sám o sobě umožňoval definitivní 

sérologickou diagnózu kandidózy. Sledování ohrožených pacientů a terapeutická kontrola 

EN 

EL ES 

PT 

CZ

vyžadují nasazení řady metod včetně sérologie a detekce antigenů. Test SERION ELISA 

antigen Candida je v takových situacích zvlášť užitečný, protože umožňuje zjistit specifický 

antigen kandidy ve vzorcích pacientů. 

3 SERION ELISA antigen - PRINCIP TESTU 

ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay [enzymová imunosorpční kvantitativní 

analýza]) je imunoanalýza, která je zvláště vhodná ke stanovení protilátek a antigenů na 

poli infekční sérologie. Reakce je založena na specifické interakci protilátek s jejich 

odpovídajícím antigenem. Testovací pruhy mikrotitrační desky SERION ELISA antigen 

jsou pokryty specifickými protilátkami proti zájmovému patogenu. Pokud jsou ve vzorku 

séra pacienta přítomny antigeny, váží se na fixovanou protilátku. Sekundární protilátka, 

která byla konjugována s enzymovou peroxidázou, detekuje imunní komplex a váže se na 

něj. Peroxid vodíku bezbarvého substrátu (H2O2) a chromogen tetramethylbenzidin (TMB) 

se převedou na modře zabarvený produkt. Přídavek zastavovacího roztoku změní barvu 

na žlutou. Intenzita signálu tohoto reakčního produktu je přímo úměrná koncentraci 

antigenu ve vzorku a měří se fotometricky. 

Pos: 8 /Arbeitsanleitungen ELISA antigen/Gültig für nur ein Dokument/Inhalt und 

Zusammensetzung/Candida antigen: Inhalt und Zusammensetzung @ 

11\mod_1346845806738_73.doc @ 52101 @ 1 

česky 4

4 SLOŽENÍ KITU 

Složky testu Kusy/ 

objem 

Oddělené proužky mikrotitračního testu, každý s osmi oddělitelnými jamkami 

potaženými protilátkou, 

(společně 96) MTP , 

1 rámeček. 

Standardní sérum STD , 

Antigen Candida albicans v lidském séru doplňeném o telecí fetální sérum (FCS); 

negativní na protilátky proti HIV Ab, HBs-Ag (povrchový antigen viru hepatitidy B) a 

proti HCV Ab; 

konzervační prostředek: < 0,1 % azidu sodného. 

Sérum negativní kontroly NEG , 

Lidské sérum doplňené o telecí fetální sérum (FCS); 

negativní na protilátky proti HIV Ab, HBs-Ag (povrchový antigen viru hepatitidy B) a 

proti HCV Ab; 

konzervační prostředek: < 0,1 % azidu sodného. 

Konjugát protilátek proti Candida albicans (připravený k použití) PODCR , 

Protilátka proti Candida albicans konjugovaná na křenovou peroxidázu; 

stabilizováno proteinovým stabilizačním roztokem a detergentem 

konzervační prostředek: 0,1 % ProClin® 300. 

Koncentrát promývacího roztoku (dostačuje pro 1500 ml) WASH , 

Tris pufrovaný fyziologický roztok s Tween 20; 30násobně koncentrovaný; 

konzervační prostředek: < 0,1 % ProClin® 300. 

Ředící pufr SAMB , 

roztok kyseliny bez konzervačního prostředku. 

Zastavovací roztok STOP , 

0,5 N kyselina sírová. 

Roztok TMB substrátu (připravený k použití) TMB , 

Roztok substrátu TMB-hydrogen peroxidu, 

konzervační prostředek: < 0,01 % Kathon CG. 

Osvědčení o kontrole kvality se standardní křivkou a vyhodnocovací tabulkou 

INFO , 

(kvantifikace antigenů v U/ml). 



8\mod_1265796058727_73.doc @ 29314 @ 1 

česky 5 

12 kusů 

3 x 3 ml 

2 x 3 ml 

13 ml 

2 x 25 ml 

15 ml 

13 ml 

13 ml 

2 kusů 

EN 

EL ES 

PT 

CZ

5 POŽADOVANÝ MATERIÁL, KTERÝ NENÍ PŘEDMĚTEM DODÁVKY 

- běžné laboratorní vybavení 

- spektrofotometr pro mikrotitrační desky s filtrem, vlnová délka 450 nm, doporučená 

referenční vlnová délka 620 nm - 690 nm( např. 650 nm) 

- inkubátor 37 ℃; 

- topný blok 110 °C 

- zvlhčovací komora 

- destilovaná voda 

- Zaklikávací svorky (objednávkové č. VT120) 



11\mod_1346935956390_73.doc @ 52271 @ 1 

česky 6

6 UCHOVÁVÁNÍ A STABILITA 

Reagens Uchovávání Stabilita 

Mikrotitrační proužky 

(potažené protilátkou) 

Kontrolní séra 

/standardní séra 

neotevřené 

po otevření při 2 - 8 °C v uzavřeném sáčku 

z hliníkové fólie se sušicím činidlem 

Proužky, které se nepoužijí, se musí uložit 

vzduchotěsně v suchu v uzavřeném sáčku 

z hliníkové fólie. 

česky 7 

viz datum exspirace; 

minimální životnost: 

4 týdny; 

trvanlivost v případě 

správného používání a 

skladování do data 

exspirace 

po otevření při 2 - 8°C viz datum exspirace; 

Konjugát roztok připravený k použití při 2 - 8°C 

Ředicí pufr neotevřené 

Chraňte před kontaminací např. použitím sterilních 

konců. 

po otevření při 2 - 8°C 

Zakalené roztoky zlikvidujte 

Promývací roztok Koncentrát po otevření při 2 - 8°C 

pracovní naředění při 2 - 8°C 

pracovní naředění při pokojové teplotě 

Láhve použité pro pracovní naředění se musí 

pravidelně čistit. Zakalené roztoky zlikvidujte 

Substrát TMB roztok připravený k použití při 2 - 8°C, 

chraňte před světlem! 

Chraňte před kontaminací např. použitím sterilních 

konců. 

Zlikvidujte, pokud roztok zmodrá (extinkce při 650 nm 

v porovnání s destilovanou vodou > 0,2 OD). 

24 měsíců ode dne 

výroby 



výroby 



výroby 

6 měsíců 



výroby 

2 týdny 

1 týden 



výroby 

Zastavovací roztok Po otevření při pokojové teplotě viz datum exspirace 


EN 

EL ES 

PT 

CZ

7 SERION ELISA antigen - POSTUP PŘI TESTU 


7.1 Obecné poznámky 

Při používání kvantitativního imunologického testu SERION ELISA antigen používejte 

pouze reagencie SERION ELISA antigen. Složky se nesmí vyměnit za reagencie od jiných 

výrobců. Standardní a kontrolní séra a konjugát kvantitativních imunologických testů 

SERION ELISA antigen jsou definovány výlučně pro testovací sadu, která má být použita, 

a nesmí se použít v jiných šaržích. 

Ředicí pufr, promývací roztok, substrát a zastavovací roztok lze používat se všemi 

imunologickými testy SERION ELISA antigen bez ohledu na šarži a test. 

Pokud zůstanou neotevřené, mohou být všechny složky testů SERION ELISA antigen 

používány až do doby uvedené na štítcích, jestliže jsou správně skladovány. Reagencie 

se nesmí používat po uplynutí doby životnosti. 

Ředění či pozměňování reagencií může způsobit ztrátu citlivosti. 

Během skladování a inkubace chraňte reagencie před silným světlem. Reagencie musí být 

po použití pevně uzavřeny, aby se zabránilo odpařování a kontaminaci. 

Sáček z hliníkové fólie mikrotitrační desky otevřete tak, že oddělíte pouze horní část 

vyznačené strany, aby bylo zaručeno, že jej bude možné znovu správně uzavřít. Proužky 

nepoužívejte, bude-li hliníkový sáček poškozen, nebo pokud sáček obsahující zbývající 

proužky a vysušovací činidlo nebyl řádně znovu uzavřen. 

Přemístění alikvotních množství ze zkumavek s reagenciemi provádějte aseptickými 

postupy, aby se zabránilo kontaminaci. Aby nedošlo k falešně pozitivním výsledkům, 

dbejte na to, aby při pipetování konjugátu nedošlo ke kontaktu s horní částí stěn jamek ani 

k jejich zkrápění. Dávejte pozor na to, aby se nepomíchaly láhve nebo injekční lahvičky. 

Zejména roztok TMB substrátu je citlivý na oxidační látky a ionty těžkých kovů. Musí se 

chránit po celou dobu před světlem a otevírá se pouze bezprostředně před použitím za 

slabého světla. Roztok má slabě zelenomodré zabarvení. 

Zabraňte kontaktu roztoku substrátu a zastavovacího roztoku s kůží. 

Reprodukovatelnost výsledků testu je závislá na důkladném promísení reagencií. Před 

použitím důkladně protřepejte baňky obsahující kontrolní séra a stejně tak postupujte u 

všech vzorků po naředění (např. pomocí vířivého mixéru). 

Dbejte na pečlivé pipetování a dodržování stanovených inkubačních časů a teplot. 

Významné časové rozdíly mezi pipetováním do první a poslední jamky mikrotitrační desky 

při dávkování vzorků/kontrolních sér, konjugátu či substrátu mohou vést k různým 

„předinkubačním“ dobám, které mohou ovlivnit přesnost a reprodukovatelnost výsledků. 

Optimálních výsledků lze dosáhnout pouze v případě, že budete pokyny přesně dodržovat. 

česky 8

Kvantitativní imunoanalýza SERION ELISA antigen je platná pouze v případě, že budou 

splněna hodnotící kritéria specifická pro danou šarži uvedená na osvědčení o kontrole 

kvality. 

Adekvátní promývání zabraňuje nespecifickým výsledkům testů. Proto je zapotřebí při 

promývání postupovat pečlivě. Všechny jamky s plochým dnem se musí naplnit stejným 

objemem promývacího pufru. Na konci výkonu dbejte na to, aby byl z jamek odstraněn 

veškerý promývací pufr, aby nedošlo k efektům nekontrolovaného ředění. Zabraňte vzniku 

pěny! 

Dbejte na to, abyste nepoškodili popis (patogen/AG) na proužcích mikrotitračních testů 

během promývání a aspirace, jinak by mohlo dojít k záměně. 


7.2 Příprava vzorku a uchovávání 

Lipemické, hemolytické nebo ikterické vzorky (sérum nebo plazma) by se měly testovat 

velmi opatrně. Očividně kontaminované vzorky by se testovat neměly. Mezi vhodné vzorky 

patří sérum nebo plazma (EDTA, citrát, heparin) odebrané podle standardních 

laboratorních postupů. 

7.2.1 Příprava vzorků 

Před prováděním testu se musí vzorky (vzorky od pacienta, standard a negativní kontroly) 

(V1) naředit ředícím pufrem (V2) následujícím způsobem: 

V1 + V2 = 3 + 1 přidejte 300 µl vzorku (V1) 

česky 9 

k 100 µl ředícího pufru (V2) 

Po naředění a před pipetováním na mikrotitrační destičku se vzorky musí důkladně 

promíchat, aby vznikl homogenní roztok. 

Nakonec se vzorky musí ohřívat 10 minut při teplotě 110 °C (+/- 5 °C). Zásadně důležité je 

dodržovat stanovené teplotní podmínky a dobu! Standardní reagenční nádoby nejsou pro 

tento termolytický krok vhodné, a proto doporučuje používat reakční nádoby Safe-Lock 

nebo podobné nádoby se šroubovým uzávěrem. 

Při použití termostatu ohřívacího bloku je zapotřebí kontrolovat skutečnou teplotu 

kalibrovaným teploměr. Zohledněte délku předehřívání ohřívacího bloku specifickou pro 

zařízení. Ohřívací blok musí v případě potřeby být nastaven na požadovanou teplotu. Při 

tepelném rozkladu vznikne bílý zakalený precipitát, který je třeba odstranit odstřeďováním 

na předchlazené (4 °C) stolní odstředivce při 10 000 x g po 10 minut. Čirý supernatant pak 

může být použit v testu. 


EN 

EL ES 

PT 

CZ

7.2.2 Uchovávání vzorků 

Vzorky od léčeného pacienta by se neměly uchovávat déle než 24 hodin při teplotě 2 až 

8°C. Neléčené vzorky je zapotřebí uchovávat při 2 – 8 °C nejvýše 7 dnů. Prodloužené 

uchovávání je možné při ≤-20 °C. Zabraňte opakovanému zmrazování a rozmrazování 

vzorků. 

Pos: 16 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testdurchführ ung/R eagenzienvorbereitung ELISA antigen @ 11\mod_1346845998930_73.doc @ 52135 @ 2333333 

7.3 Příprava reagencií soupravy 

Před prováděním testů nechte všechny reagencie dosáhnout pokojové teploty. 

7.3.1 Proužky mikrotitračního testu 

Proužky mikrotitračního testu v rámečcích jsou zabaleny s vysušovacím činidlem 

v sáčku z hliníkové fólie. Z rámečku odstraňte nežádoucí kavity a vložte jej zpět 

hliníkového do sáčku s vylisovaným uzávěrem. Pečlivě uzavřete sáček, aby se 

zajistila vzduchotěsnost. 

7.3.2 Kontrolní séra /standardní séra 

Kontrolní a standardní séra musí být naředěna pufrem vzorku a následně 

denaturována. Do každého provedeného testu – nezávisle na počtu použitých 

proužků mikrotitračního testu – musí být zahrnuta kontrolní a standardní séra. 

Standardní séra je třeba vytvořit dvojmo. 

7.3.3 Konjugát (připravený k použití) 

Konjugát připravený k použití chraňte před kontaminací např. použitím sterilních 

konců. 

7.3.4 Promývací roztok 

Nařeďte koncentrát promývacího pufru (V1) 1 : 30 destilovanou vodou na konečný 

objem V2. 

Příklad: 

7.3.5 Substrát TMB (připravený k použití) 

česky 10 

Koncentrát pufru (V1) 

Konečný objem 

(V2) 

25 ml 750 ml 

1 ml 30 ml 

Roztok substrátu připravený k použití chraňte před kontaminací např. použitím 

sterilních konců. 

Substrát TMB je světle modro-zelený a jakékoli roztoky, které vykazují intenzivní 

zbarvení (extinkce proti destilované vodě při 650 nm >0,2 OD), je třeba zlikvidovat. 

7.3.6 Zastavovací roztok (připravený k použití) 

Pos: 17 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testdurchführ ung/T establauf/Überschrift T establauf @ 8\mod_1265793631810_73.doc @ 28934 @ 2

7.4 Přehled postupu použitého při testu 


česky 11 


kvantitativní 

Příprava vzorků a kontrolních a standardních sér 

Ředění vzorků 

(Vzorky od pacientů, kontrolní a standardní sérum) 

Vzorek 300 µl + ředicí pufr 100 µl 

INKUBACE 10 min / 110 °C 

ODSTŘEDĚNÍ 10 min / 10 000 × g / 4 °C 

Uchovat supernatant, zlikvidovat peletu 

 

Přidat supernatant ze vzorků (100 µl) 

 


zvlhčovací komora 

 

PROMÝVÁNÍ (5 x 300 µl DIL WASH ) 

 

Pipetování roztoku konjugátu PODCR (100 µl) 

 



 

PROMÝVÁNÍ (5 x 300 µl DIL WASH ) 

 

Pipetování roztoku substrátu TMB (100 µl) 

 



 

Pipetování zastavovacího roztoku STOP (100 µl) 

 

ODEČTENÍ EXTINKCE při 450 nm (ref. 650 nm) 

EN 

EL ES 

PT 

CZ


7.5 Postup manuálního testu 

1. Předběžné zpracování vzorků séra (vzorky od pacientů, standardní a kontrolní sérum) 

jak popsáno. 

2. Umístěte do rámečku požadovaný počet jamek a připravte si pipetovací protokol. 

3. Do příslušných jamek pásků mikrotitračního testu přidejte 100 µl supernatantů ze 

standardního séra (dvojmo), negativní kontrolní sérum a vzorky od pacientů. 

Jednu jamku nechte volnou pro holý substrát, např.: 

Candida antigen kvantitativní 

Jamka A1 Holý substrát 

Jamka B1 Negativní kontrolní sérum 

Jamka C1 Standardní sérum 

Jamka D1 Standardní sérum 

Jamka E1 Vzorek od pacienta 1... 

4. Inkubace vzorku po 60 minut (+/- 3 minuty) při 37 ℃ (+/- 1 °C) ve zvlhčovací komoře. 

5. Po inkubaci promyjte všechny jamky promývacím roztokem (automatickou 

promývačkou nebo manuálně): 

- odsajte nebo vytřepte inkubační roztok 

- naplňte každou jamku 300 µl promývacího roztoku 

- odsajte nebo vytřepte promývací pufr 

- opakujte promývací proces 4krát (dohromady 5krát!) 

- vysušte odkapáním mikrotitrační desky na filtračním papíru 

6. Přidání konjugátu 

Přidejte 100 µl konjugátu připraveného k použití do příslušných jamek (s výjimkou 

holého substrátu). 

7. Inkubace konjugátu po 60 minut (+/- 3 minuty) při 37 °C (+/- 1 °C) ve zvlhčovací 

komoře. 

8. Po inkubaci promyjte všechny jamky promývacím roztokem (viz výše). 

9. Přidání substrátu 

Přidejte 100 µl roztoku substrátu TMB připraveného k použití do každé jamky 

(včetně jamky pro holý substrát!). 

10. Inkubace substrátu po 30 minut (+/-1 minuta) při 37 °C (+/- 1 °C) chráněného před 

světlem ve zvlhčovací komoře. 

11. Zastavení reakce 

Přidejte 100 µl zastavovacího roztoku do každé jamky. Promíchejte jemným 

protřepáváním mikrotitrační desky. 

12. Odečtení extinkce 

Odečtěte extinkci (OD) během 60 minut při vlnové délce 450 nm proti holému 

substrátu, referenční vlnová délka mezi 620 nm a 690 nm (např. 650 nm). 


česky 12

7.6 Postup použitý při automatickém testu 

SERION ELISA je vhodná pro zpracování na automatech, vyhodnocení použití pomocí 

přístroje Immunomat a Gemini. Automatické zpracování se provádí analogicky jako při 

manuálním použití. Prosím, nezapomeňte, že za zvláštních pracovních podmínek může 

být v laboratoři nezbytná vnitřní úprava inkubační doby. 


7.7 Pozitivní kontrola/kontrola přesnosti 

Pro stanovení přesnosti a spolehlivosti průběhu testů SERION ELISA antigen a periodické 

o věření testovací metody doporučujeme používat SERION ELISA antigen, aby byly 

splněny požadavky vnitřních systémů řízení kvality laboratoře. Používání SERION ELISA 

controls je popsáno v příslušných návodech k obsluze. 


česky 13 

EN 

EL ES 

PT 

CZ

8 HODNOCENÍ TESTU 



8.1 Jednobodová kvantifikace pomocí metody 4PL 

Optimalizované přiřazení extinkčních signálů kvantitativním hodnotám je zaručeno 

použitím nelineárních funkcí, které upravují esovitou křivku bez jakékoliv další 

transformace hodnot extinkce. Určení koncentrací antigenu pomocí metody SERION 

ELISA angiten se provádí logisticko-logaritmickým modelem (4 PL, čtyřparametrová), která 

je ideální pro přesné stanovení křivky. Je založena na vzorci: 

OD = A + 

česky 14 

D - A 

1 + e 

B(C -ln koncentrace) 

Parametry A, B, C a D jsou pro přesný tvar křivky vypovídající: 

1. dolní asymptota parametr A 

2. Sklon křivky parametr B 

3. bod zlomu parametr C 

4. horní asymptota parametr D 

U každé šarže se vyhodnocuje standardní křivka v Institut Virion\Serion GmbH (Würzburg, 

Německo) pomocí opakovaných chodů testů za optimálních podmínek. Není tedy nutné, 

aby uživatel prováděl časově náročnou a nákladnou konstrukci standardní křivky. 

Každá testovací souprava SERION ELISA antigen obsahuje specifickou standardní křivku 

pro hodnocení koncentrací antigenu a specifickou hodnotící tabulku pro danou šarži. Na 

požádání je k dispozici hodnotící software SERION evaluate společně se softwarovým 

nástrojem SERION activity, který je založen na programu Microsoft® Excel. 

Při každém individuálním testu se používá standardní sérum pro kompenzaci běžných 

odchylek testu a rovněž pro kontrolu průběhu testu. Pro toto kontrolní sérum stanoví 

referenční hodnotu s rozsahem platnosti kontrola kvality výrobce. V tomto rozsahu je 

zajištěna správná kvantifikace koncentrace antigenu. 

Pos: 24 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testauswertung/T estg ültig keitskriteri en @ 8\mod_1265793547923_73.doc @ 28918 @ 2

8.2 Kritéria platnosti 

- Extinkce holého substrátu musí být < 0,25. 

- Negativní kontrola musí dát negativní výsledek testu. 

- Při použití kvantitativních testů SERION ELISA antigen musí být průměrná hodnota 

extinkce standardního séra v rozsahu platnosti, který je určen konkrétním 

osvědčením kontroly kvality pro danou šarži (po odečtení holého substrátu!) 

- Odchylka hodnot extinkce standardního séra nesmí být vyšší než 20 %. 

Pokud tato kritéria nebudou splněna, test není platný a musí být opakován. 


antigen/Testauswertung/Auswertung: Überschrift @ 8\mod_1265792620271_73.doc @ 

28777 @ 2 

8.3 Výpočet SERION ELISA antigen Candida 


8.3.1 Neautomatizované hodnocení 

Pro hodnocení testu SERION ELISA antigen je k testovací soupravě přidáno osvědčení 

kontroly kvality specifické pro danou šarži se standardní křivkou společně s 

vyhodnocovací tabulkou. Hodnota holého séra musí být před vyhodnocováním odečtena 

od všech hodnot extinkce. 


Metoda 1: Kvalitativní hodnocení 

Pro určení horní a dolní hranice normálních hodnot (cut-off value), prosím, vynásobte 

průměrnou hodnotu naměřené standardní extinkce číselnými údaji z osvědčení o kontrole 

kvality (viz speciální případové vzorce), např.: 

EXTINKCE = 0,502 x MW(STD) s horní hranicí normálních hodnot 

EXTINKCE = 0,352 x MW(STD) s dolní hranicí normálních hodnot 

Jestliže je naměřená průměrná hodnota absorbance standardního séra 0,970, rozsah 

horní a dolní hranice normálních hodnot (cut-off) je 0,341 až 0,487. 

česky 15 

EN 

EL ES 

PT 

CZ

Metoda 2: Průběžné stanovení aktivit antigenu pomocí standardní křivky. 

Takzvané meziesejní odchylky (odchylky mezi jednotlivými dny a odchylky mezi 

laboratořemi) se kompenzují vynásobením aktuálně naměřené hodnoty, získané ze vzorku 

od pacienta, korekčním faktorem F. Tento faktor se vypočítá následovně: 

F = 

česky 16 

Referenční hodnota extinkce (standardního séra) 

Aktuální hodnota extinkce (standardních sér) 

Je nezbytné upravit aktuální úroveň testu uživatele pomocí standardní křivky specifické 

pro jednotlivou šarži. Za prvé se musí denní odchylky opravit vypočítáním opravného 

faktoru F: 

1. Musí se vypočítat průměr dvou hodnot extinkce standardního séra a zkontrolovat, 

zdali je v daném rozsahu platných hodnot. 

2. Výpočet faktoru F: daná referenční hodnota se vydělí průměrnou extinkcí 

standardního séra: 

F = referenční hodnota extinkce standardního séra / průměrná hodnota extinkce 

standardního séra 

3. Všechny naměřené hodnoty vzorků od pacienta se vynásobí F. 

4. Aktivity antigenu v IU/ml nebo U/ml lze určit ze standardní křivky pomocí 

opravených hodnot. 

Pos: 28 /Ar bei tsanl eitungen ELISA antigen/Gültig für alle D okumente/ELISA antigen/Testauswertung/Automatische Auswertung @ 8\mod_1265792721689_73.doc @ 28793 @ 3

8.3.2 Automatické hodnocení testu pomocí softwaru SERION evaluate 

Po zadání čtyřech parametrů a referenční hodnoty standardního séra, se aktivity antigenu 

vypočítají v režimu online ze zpracovaných a naměřených průběhů testu SERION ELISA 

antigen pomocí softwaru SERION evaluate. 

Jestliže je extinkce standardu mimo platný rozsah, objeví se následující hlášení. 

„Standardní hodnoty mimo rozsahy v následujících skupinách: Skupina 1-24.“ nebo 

„Standardní hodnoty se liší o více než 20 % v následujících skupinách: Skupina 1-24.“ 

V takových případech je průběh testu neplatný a měl by být opakován. 

Parametry a referenční hodnota se musí změnit pouze v případě, že došlo ke změně 

šarže (vyhodnocovací tabulka ukazuje parametry a referenční hodnoty). Správné zadání 

údajů specifických pro danou šarži lze zkontrolovat na základě aktivity standardního séra 

(v IU/ml nebo U/ml) přiřazené standardnímu séru. Vypočítaná průměrná hodnota jednotek 

musí odpovídat jednotkové hodnotě uvedené na osvědčení specifickém pro danou šarži. U 

naměřených hodnot se provádí automatická oprava. Ve standardní verzi je na výtisku 

uvedeno následující: 


8.4 Meze kvantifikace 

česky 17 

Kód vzorku 

Hodnota extinkce 

U/ml 

Vyhodnocení 

Meze kvantifikace jsou uvedeny na osvědčení kontroly kvality testu SERION ELISA 

antigen. Linearita ředění byla v tomto rozsahu prokázána komplexními hodnotícími 

studiemi. V případě, že vzorek pacienta dává výsledek testu nad horní mezí kvantifikace, 

vzorek lze testovat při vyšším ředění. Takto stanovená aktivita antigenu se musí vynásobit 

faktorem dodatečného ředění. 


8.5 Hraniční rozpětí 

Hraniční rozpětí testu SERION ELISA antigen Candida je stanoveno na osvědčení 

kontroly kvality a indikuje rozpětí hraničních výsledků testů. Hodnoty získané při testování 

vzorku pacienta, které spadají pod toto rozpětí, indikují negativní výsledek testu; hodnoty 

nad hraniční rozpětí jsou vykládána jako pozitivní. V případě, že výsledky budou uvnitř 

v hraničním rozpětí, definitivní interpretace výsledků není možná. V takových případech 

test je třeba opakovat souběžně se sledovacím vzorkem odebraným o 1 až 2 týdny 

později. 


EN 

EL ES 

PT 

CZ

8.6 Interpretace výsledků 


Pozitivní výsledky u vzorků od pacientů jsou projevem kandidémie. Výsledky lze pouze 

interpretovat v kombinaci s klinickým obrazem a ostatním detekčními metodami. 

Výsledek lze považovat za pozitivní, když bude v testu naměřeno nejméně 2,6 jednotky. 

Takový výsledek naznačuje, že vzorek obsahuje takové množství mannanu, které je 

spojeno s 2,6 ng proteinu kandidy. Nedokáže však rozlišit mezi živými a mrtvými 

organismy. 

Negativní výsledky testů nevylučují akutní infekci, zvláště pokud se zjistí vysoké titry 

protilátek. V takovém případě může dojít k tomu, že antigen bude zcela maskován 

protilátkami a ani proces denaturace během přípravy vzorku nestačí k tomu, aby umožnil 

detekci antigenu. Kromě toho může vést k negativnímu výsledku časový bod v průběhu 

infekce, kdy je získán vzorek, nevhodný vzorek, špatná příprava vzorku a jeho 

uchovávání. 


8.7 Referenční rozsah zdravých jednotlivců 


Testování náhodných sér dárců krve shromážděných v oblasti jižního Německa testy 

SERION ELISA antigen Candida poskytlo následující rozdělení. Ze 103 sér od dárců krve 

testovaných testem SERION ELISA antigen Candida bylo 92 (89,3 %) negativních, šest 

sér (5,8 %) reagovalo pozitivně a pět vzorků (4,9 %) bylo stanoveno jako hraniční. 


9 CHARAKTERISTIKY VÝSLEDKŮ 


9.1 Citlivost a specificita 


Test SERION ELISA antigen Candida byl validován analýzou 148 vzorků séra od dárců 

krve a 93 vzorků od pacientů, kteří vykázali příznaky kandidózy při léčbě v rámci intenzivní 

péče, ve srovnání s výsledky při použití komerčně dostupného testu vedoucího 

evropského výrobce. Vzorky séra hodnocené jako hraniční nebyly do výpočtu specificity a 

citlivosti zahrnuty. 

Charakteristiky výsledků Citlivost Specificita 

SERION ELISA antigen Candida > 99,9 % 97,8 % 

V jiné interní studii byla prokázána zkřížená reaktivita testu SERION ELISA antigen 

Candida s druhy Candida guillermondii, Candida glabrata, Candida krusei, Candida 

parapsilosis a Candida tropicalis s cílem zaručit komplexní diagnózu kandid. 

česky 18

Vzhledem k podobnosti mannanu a hydroxyethylškrobu (HES), který se používá v 

přípravcích pro zvýšení objemu plazmy při léčbě oběhového selhání (hypovolemický, 

hemoragický a septický šok), byla vyhodnocena potenciální zkřížená reaktivita. Žádná 

zkřížená reaktivita s HES však nebyla při použití testu SERION ELISA antigen Candida 

měřitelná. 


9.2 Reprodukovatelnost 


Vnitroesejní reprodukovatelnost byla dvacetkrát stanovena testováním sér různé reaktivity 

v jednom průběhu testu. Vnitroesejní reprodukovatelnost byla stanovena testováním 

vzorků sér různé reaktivity v 10 nezávislých průběhů testu. 

česky 19 

Směrodatná odchylka 

Variační koeficient (CV %) = x 100 


Vzorek 

Průměrná 

hodnota 

extinkce 

(OD) 

Průměrná hodnota extinkce 

Vnitroesejní 

(VK %) 

Průměrná 

hodnota 

extinkce 

(OD) 

Meziesejní 

(VK %) 

negativní 0,223 9,6 0,225 7,3 

mezní 0,507 2,4 0,476 5,3 

pozitivní 1,413 2,5 1,356 2,7 

pozitivní 2,851 2,0 2,442 8,1 


EN 

EL ES 

PT 

CZ

10 BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ 

10.1 Výstražná upozornění 

Test SERION ELISA antigen je určen k používání kvalifikovaným personálem, který je 

obeznámen se správnou laboratorní praxí. 

Se všemi reagenciemi v soupravě a vzorky humánních biologických materiálů se musí 

pečlivě nakládat při uplatnění zásad zavedené správné laboratorní praxe. 

- Tato souprava obsahuje složky lidské krve. Ačkoliv všechna kontrolní séra a séra 

pro stanovení horní a dolní hranice normálních hodnot (cut-off sera) byla negativní 

s ohledem na protilátky proti HIV-ab, HBs-Ag (povrchový antigenu viru hepatitidy B) 

a HCV-ab , je zapotřebí je považovat za potenciálně infekční. 

- Nepipetujte ústy. 

- Nekuřte, nejezte ani nepijte v místech, kde se nakládá se vzorky nebo reagenciemi 

kitu. 

- Používejte rukavice na jedno použití, laboratorní plášť a bezpečnostní brýle při práci 

s reagenciemi v kitu nebo vzorky. Poté si důkladně omyjte ruce. 

- Materiál od pacienta a další potenciálně infekční materiál musí být po proběhnutí 

testu dekontaminován. 

- Reagencie musí být uchovávány na bezpečném místě a chráněny před 

neoprávněnými osobami, např. dětmi. 

10.2 Likvidace 

Prosím, dodržujte příslušné zákonné požadavky! 


česky 20

11 ODKAZY 









62. 


Rev. 3, 32-45. 






























česky 21 

EN 

EL ES 

PT 

CZ

2°C 

SERION ELISA antigen (V 12/09-1) 

Symbole auf den Etiketten/ symbols on labels/ symboles et étiquettes/ simboli sulle etichette/ символы на 

этикетках/símbolos sobre las etiquetas/ σύµβολα στις ετικέτες/ símbolos nos rótulos / Symboly na štítcích / 

symboler på etiketter/ symboler på etiketterna/ Symbole na etykietach/ symboly na označení/ Simboli na 

oznakah/ symbol på etiketter 

96 

Hersteller/ Manufacturer/ Fabricant/ Produttore/ Производитель/ Fabricante/ Κατασκευαστής/ 

Fabricante/ Výrobce/ Fremstiller/ Tillverkare/ Producent/ Výrobca/ Izdelovalec/ Produsent 

Ausreichend für 96 Tests/ sufficient for 96 tests/ suffisant pour 96 tests/ sufficiente per 96 test/ 

достаточно для 96 тестов / suficiente para 96 pruebas/ επαρεκεί για 96 δοκιµασίες/ suficiente para 

96 ensaios/ stačí na 96 testů/ nok til 96 test/ tillräckligt för 96 tester/ Wystarcza na 96 testów/ 

postačuje na 96 testov/ Zadostuje za 96 testov/ Tilstrekkelig til 96 tester 

LOT Charge/ lot/ lot / lotto/ lote/ παρτίδα/ lote/ šarže/ lot/ lot/ seria/ šarža/ serija/ lot /lot 

REF Referenz oder Bestellnummer/ reference or order number/ numéro de référence ou de commande/ 

numero di riferimento o ordinazione/ ссылка или номер для заказа / referencia o número de 

pedido/ Αριθµός αναφοράς ή παραγγελίας/ referência ou número para encomenda/ reference nebo 

číslo objednávky/ reference eller bestillingsnummer/ referens eller beställningsnummer/ Numer 

referencyjny lub numer zamówienia/ referenčné číslo alebo číslo objednávky/ referenčna ali 

kataloška številka/ Referanse eller ordrenummer 

8°C 

Lagern zwischen 2 und 8 Grad Celsius/ store between 2 and 8 degree celsius/ entre 2 et 8 degré 

celsius/ conservare a temperatura compresa tra 2 e 8 gradi centigradi/ хранить при температуре 

от 2 до 8 градусов цельсия / conservar entre 2 y 8 grados celsius/ Φύλαξη µεταξύ 2 και 8 βαθµούς 

Κελσίου/ Armazenar entre 2º e 8º Celsius/ uchovávejte při teplotě 2 až 8 °C/ opbevares mellem 2 

og 8 grader celsius/ förvara vid 2 till 8 grader Celsius/ Przechowywać w temp. pomiędzy 2 a 8 

stopni Celsjusza/ skladovať pri teplote 2 až 8 stupňov Celzia/ Shranjujte pri temperaturi od 2 do 8 C/ 

Oppbevares mellom 2 og 8 grader Celsiu 

CE-Markierung bei Erfüllung der IVD Richtlinie 98/79 EG/ CE marking according to IVD guideline 

98/79 EC/ Étiquetage CE selon les directives DIV/ marcatura CE in conformità alla direttiva IVD 

98/79 EC/ маркировка СЕ согласно директивам IVD 98/79 /marca CE según la directiva IVD 

98/79 CE/ Σήµανση CE σύµφωνα µε την οδηγία IVD 98/79 EΕ/ Marcação CE de acordo com a 

Directiva 98/79/ značení CE podle směrnice IVD 98/79/ES/ CE-mærkning iht. IVD-retningslinje 

98/79/EF/ CE-märkning enligt riktlinjerna för IVD i direktiv 98/79/EC/ Oznakowanie CE zgodne z 

wytycznymi dot. diagnostyki in vitro 98/79 EC/ označenie CE podľa smernice IVD 98/79/ES/ oznaka 

CE, skladna s smernico IVD 98/79/ES/ CE-merking i henhold til IVD-retningslinjer 98/79/EØF 

0197 CE-Markierung bei Erfüllung der IVD Richtlinie 98/79 EG gemäß Anhang II, Liste B/ CE marking 

according to IVD guideline 98/79 EC according to annex II, list B/ Étiquetage CE selon les directives 

DIV 98/79 CE selon l'annexe II, liste B/ marcatura CE in conformità alla direttiva IVD 98/79 EC 

secondo l’allegato II, elenco B/ маркировка СЕ согласно директивам IVD 98/79, приложение II, 

список В / marca CE según la directiva IVD 98/79 CE de acuerdo con el anexo II, lista B/ Σήµανση 

CE σύµφωνα µε την οδηγία IVD 98/79 EΕ, σύµφωνα µε το παράρτηµα ΙΙ, κατάλογο Β/ Marcação 

CE de acordo com a Directiva 98/79/ CE relativo aos dispositivos médicos de diagnóstico in vitro, 

segundo a lista B do anexo II/ značení CE podle směrnice IVD 98/79/ ES podle příloh II, seznamu 

B/ CE-mærkning iht. IVD-retningslinje 98/79 /EF iflg. anneks II, liste B/ CE-märkning enligt 

riktlinjerna för IVD i direktiv 98/79/EC, bilaga II, lista B/ Oznakowanie CE zgodne z wytycznymi dot. 

diagnostyki in vitro 98/79 EC, zgodnie z aneksem II, lista B/ označenie CE podľa smernice IVD 

98/79 ES v znení dodatku II, zoznam B/ oznaka CE, skladna s smernico IVD 98/79/ES in 

seznamom B v Dodatku II/ CE-merking i henhold til IVD-retningslinjer 98/79/EØF, tillegg II, liste B 

Verfallsdatum/ expiry date/ date d'expiration/ data di scadenza/ срок годности до/ fecha de 

caducidad/ ηµεροµηνία λήξης/ data de validade/ datum exspirace/ udløbsdato/ förfallodatum/ data 

upływu ważności/ dátum exspirácie/ datum izteka roka uporabnosti/ utløpsdatp 

MTP Mikrotiterplatte (brechbare Streifen)/ microtiter plate (breakable strips)/ plaque de microtitration 

(bandelettes détachables)/ piastra per microtitolazione (strisce separabili)/ микротитровальная 

панель (отрывные стрипы) /placa de microtitulación (tiras rompibles)/ Πλάκα µικροτιτλοποίησης 

(αποσπωµενες ταινίες)/ placa de microtitulação (tiras quebráveis)/ mikrotitrační deska (rozlomitelné 

proužky)/ mikrotiterplade (afbrækkelige strimler)/ mikrotiterplatta (brytbara strips)/ Płytka 

mikrotitracyjna (paski do odrywania)/ mikrotitračná platnička (rozlomiteľné prúžky)/ vsebnik za 

mikrotitriranje (z razdelki, ki jih je mogoče odlomiti)/ Mikrotiterplate (avbrytbare strips)

AK Antikörper/ antibodies/ Anticorps/ anticorpi/ антитела / anticuerpos/ αντίσωµα/ anticorpos/ 

protilátky/ antistoffer/ antikroppar/ Przeciwciała/ protilátky/ protitelesa/ Antistoffer 

STD Standardserum/ standard serum/ Sérum standard/ siero standard/ стандартная сыворотка /suero 

patrón/ πρότυπος ορός/ soro padrão/ standardní sérum/ standardserum/ standardserum/ Surowica 

standardowa/ štandardné sérum/ standardni serum/ Standardserum 

NEG Negativkontrolle/ negative control/ Contrôle négatif/ controllo negativo/ отрицательные контроли 

/control negativo/ αρνητικός έλεγχος/ controlo negativo/ negativní kontrola/ negativ kontrol/ negativ 

kontroll/ Kontrola negatywna/ negatívna kontrola/ negativna kontrola/ Negativ kontroll 

PODCR Peroxidase Konjugat (gebrauchsfertig)/ peroxidase conjugate (ready-to-use)/ conjugué peroxydase 

(prêt à l'emploi)/ coniugato con perossidasi (pronto per l’uso)/ конъюгат пероксидазы (готовый к 

применению)/ conjugado de peroxidasa (listo para usar)/ Συζευξη υπεροξειδάσης (έτοιµο προς 

χρήση)/ conjugado com peroxidase (pronto a utilizar)/ konjugát peroxidázy (připravený k použití)/ 

peroxidasekonjugat (klar til brug)/ peroxidaskonjugat (bruksfärdigt)/ Koniugat peroksydazy (gotowy 

do użycia)/ konjugát peroxidázy (pripravený na použitie)/ konjugat peroksidaze (pripravljena za 

uporabo)/ Peroksidasekonjugat (bruksklart) 

SAMB Probenpuffer/ buffer of specimens/ tampon pour échantillons/ tampone per campioni/ буфер проб 

/solución amortiguadora de muestras/ Ρυθµιστικό διάλυµα δειγµάτων/ tampão para espécimes/ pufr 

vzorků/ prøvebuffer/ provbuffert/ Bufor próbek/ vzorkový pufor/ pufer za vzorce/ Prøvebuffer 

WASH Waschlösungskonzentrat/ washing solution concentrate/ concentré de solution de lavage / 

soluzione di lavaggio concentrata / промывочный концентрат /concentrado de solución de lavado/ 

συµπύκνωµα έκπλυσης/ concentrado de solução de lavagem/ koncentrát promývacího roztoku/ 

vaskeopløsningskoncentrat/ tvättlösningskoncentrat/ Stężony roztwór do płukania/ koncentrát 

premývacieho roztoku/ koncentrat za raztopino za izpiranje/ Vaskeløsningskonsentrat 

TMB TMB Substratlösung/ TMB substrate solution/ solution de substrat TMB/ soluzione substrato TMB/ 

раствор субстрата ТМВ /solución sustrato TMB/ ∆ιάλυµα υποστρώµατος ΤΜΒ/ solução do 

substrato TMB/ roztok substrátu TMB/ TMB-substratopløsning/ TMB-substratlösning/ Roztwór TMB 

substrat/ substrátový roztok TMB/ raztopina substrata TMB/ TMB-substratløsning 

STOP Stopplösung/ stopping solution/ solution d'arrêt/ soluzione di arresto/стоп-раствор/ solución de 

parada/ διάλυµα διακοπής/ solução de paragem/ zastavovací roztok/ stopopløsning/ stopplösning/ 

roztwór zatrzymujący reakcję/ ukončovací roztok/ raztopina za ustavitev reakcije/ stoppeløsning 

CERT Zertifikat/ certificate/ certificat/ certificato/ сертификат /certificado/ Πιστοποιητικό/ certificado/ 

certifikát/ certifikat/ certifikat/ Certyfikat/ certifikát/ certifikat/ Sertifikat 

INFO Gebrauchsanweisung, Zertifikat (Standardkurve und Auswertetabelle), CD/ instructions, certificate 

(standard curve and evaluation table), CD/ instructions, certificat (courbe de référence et tableau 

d'évaluation), CD/ istruzioni per l’uso, certificato (curva standard e tabella interpretativa), CD/ 

Инструкция по применению, сертификат (стандартная кривая и таблица для оценки), 

компактный диск /instrucciones, certificado (curva patrón y tabla de evaluación), CD/ Οδηγίες 

χρήσης, Πιστοποιητικό (πρότυπη καµπύλη και πίνακας υπολογισµού), CD/ instruções, certificado 

(curva padrão e tabela de avaliação), CD/ (standardní křivka a vyhodnocovací tabulka), CD/ 

brugsanvisning, certifikat (standardkurve og evalueringstabel), CD/ instruktioner, certifikat 

(standardkurva och utvärderingstabell), CD/ Instrukcje, certyfikat (krzywa standardowa i tabela do 

określania wyników/ CD/ pokyny, certifikát (štandardná krivka a hodnotiaca tabuľka), disk CD/ 

navodila, certifikat (standardna krivulja in ocenjevalna tabela), CD/ Instruksjoner, sertifikat 

(standardkurve og evalueringstabell), CD 

RTU gebrauchsfertig/ ready-to-use/ prêt à l'emploi/ pronto per l'uso/ готовый к использованию /listo 

para usar/ έτοιµο προς χρήση/ pronto a utilizar/ připravený k použití/ klar til brug/ bruksfärdig/ 

gotowy do użycia/ pripravené na použitie/ pripravljen za uporabo/ klar til bruk 

CONC Konzentrat/ concentrate/ concentré/ concentrato/ концентрат / concentrado/ Συµπύκνωµα/ 

concentrado/ koncentrát/ koncentrat/ koncentrat/ Koncentrat/ koncentrát/ koncentrat/ Konsentrat 

DIL verdünnen oder lösen in/ dilute or disolve in/ diluez ou dissoudre dans/ diluire o sciogliere in/ 

разбавить или растворить в /diluir o disolver en/ αραίωση ή διάλυση σε/ diluir ou dissolver em/ 

nařeďte nebo rozpusťte v/ fortynd eller opløs i/ späd eller lös i/ Rozcieńczyć lub rozpuścić w/ 

rozriediť alebo rozpustiť v/ razredčite ali raztopite v/ Fortynnes eller løses opp i 

AQUA destilliertes Wasser/ aqua detillata/ eau distillée/ acqua distillata/ дистиллированная вода /agua 

destilada/ αποσταγµένο νερό/ água destilada/ destilovaná voda/ destilleret vand/ destillerat vatten/ 

woda destylowana/ destilovaná voda/ destilirana voda/ Destillert vann 

IVD In-vitro Diagnostik Anwendung/ in-vitro diagnostic use/ utilisation en diagnostic in-vitro/ uso 

diagnostico in vitro/ использование в диагностике ин-витро /uso diagnóstico in-vitro/ ∆ιάγνωση,

200 Candida 

χρήση in-vitro/ para diagnóstico in vitro/ diagnostické použití in-vitro/ til in-vitro diagnostik/ in vitrodiagnostisk 

användning/ do diagnostyki in vitro/ diagnostické použitie in-vitro/ uporaba pri 

diagnostiki in vitro/ In vitro-diagnostisk bruk

SERION ELISAantigen - virion\serion

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

Delete template?

Save as template?