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APLICACIÓN DE UN MÉTODO PCR-RFLP PARA LA RÁPIDA
DIFERENCIACIÓN DE AISLADOS DEL NUCLEOPOLIEDROVIRUS DE
Spodoptera exigua (HÜBNER)
MURILLO, R.; MUÑOZ, D.; WILLIAMS, T.; CABALLERO, P.
Laboratorio de Entomología Agrícola y Patología de Insectos, Departamento de
Producción Agraria, Universidad Pública de Navarra, Campus Arrosadía, 31006-
Pamplona, España, rosa.murillo@unavarra.es.
El nucleopolidrovirus de Spodoptera exigua (SeMNPV) es uno de los agentes
entomopatógenos más prometedores para su desarrollo como bioinsecticida y su
incorporación en programas de control integrado de su huésped natural. Las
potenciales aplicaciones prácticas en campo abierto sugieren la necesidad de
establecer un método de identificación y diagnóstico rápido que permita su
seguimiento en el medio ambiente o el control de la calidad del virus en sistemas de
producción masiva. El presente estudio comprende el desarrollo de un método
basado en la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa (Polymerase Chain
Reaction, PCR) combinado con el polimorfismo de la longitud de los fragmentos de
restricción (RFLP) generados por la digestión con endonucleasas del ADN
amplificado. Se han diseñado cinco parejas de oligonucleótidos que permiten
amplificar las zonas del genoma donde se encuentra la mayor variabilidad
intergenotípica de este virus. De un total de 36 combinaciones PCR-RFLP, la
combinación de la zona de variabilidad V01 con la enzima BglII permitió diferenciar
cinco cepas estudiadas: Se-US1, Se-US2, Se-SP1, Se-SP2 y Se-SP3. El estudio en
profundidad de la estructura genómica de dicha zona, que corresponde a la región
homologa 1 (hr1) del genoma del SeMNPV, indica que se trata de una de las zonas
que más contribuye a la plasticidad de la población viral. El método desarrollado
permite el procesamiento de un gran número de muestras de diversos orígenes,
incluyendo aquellos lugares del agroecosistema donde habitualmente persiste el
virus durante periodos de tiempo más o menos largos (planta, suelo, otros
organismos vivos).
Palabras clave: SeMNPV, baculovirus, variabilidad genotípica, identificación
genotípica, PCR-RFLP
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