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DIVERSIDAD FENOTÍPICA DEL NUCLEOPOLYHEDROVIRUS DE Spodoptera exigua (HÜBNER) AISLADO EN FLORIDA MUÑOZ, D.; WILLIAMS, T.; MURILLO, R.; LASA, R.; CABALLERO, P. Laboratorio de Entomología Agrícola y Patología de Insectos, Departamento de Producción Agraria, Universidad Pública de Navarra, Campus Arrosadía, 31006-Pamplona, España, dmunoz@unavarra.es. Los baculovirus exhiben una gran diversidad intraespecífica tanto a nivel genotípico como fenotípico. Esta diversidad está resultando muy útil para el diseño de insecticidas a base de baculovirus, que aprovechan los inóculos con mejores características biológicas. El nucleopolyhedrovirus de Spodoptera exigua (SeMNPV) es una de las especies de la familia Baculoviridae que ha demostrado un gran potencial como bioinsecticida en varios cultivos tanto al aire libre como en invernadero. La diversidad del SeMNPV ha sido bien estudiada a nivel interpoblacional e intrapoblacional gracias a los numerosos aislamientos del SeMNPV que se han realizado en todo el mundo en los últimos 20 años. Los aislamientos procedentes de Estados Unidos han sido analizados con gran detalle, en particular uno originario de Florida, el SeUS2, que se ha utilizado como materia activa del bioinsecticida comercial SPOD-X. Este aislamiento está formado por una mezcla de siete fenotipos, algunos de los cuales se diferencian entre sí en características fenotípicas tan importantes para la industria bioinsecticida como la virulencia, la productividad viral o incluso la capacidad para autoreplicarse. Por ejemplo, el genotipo US2D posee una menor virulencia que el US2A, considerado como el prototipo; el genotipo US2F es incapaz de romper el tegumento de la larva huésped y tiene por tanto limitada su capacidad de dispersión; el genotipo US2E no puede autoreplicarse por la falta de dos genes esenciales y actúa como parásito en la población viral; y el genotipo US2C es incapaz de iniciar una infección per os por si solo. La selección de aislados con características biológicas adecuadas es por tanto un paso de crucial importancia para mejorar la competitividad de estos productos bioinsecticidas. Palabras clave: Baculovirus, Spodoptera exigua, nucleopolyhedrovirus, SeMNPV, diversidad intraespecífica 100
APLICACIÓN DE UN MÉTODO PCR-RFLP PARA LA RÁPIDA DIFERENCIACIÓN DE AISLADOS DEL NUCLEOPOLIEDROVIRUS DE Spodoptera exigua (HÜBNER) MURILLO, R.; MUÑOZ, D.; WILLIAMS, T.; CABALLERO, P. Laboratorio de Entomología Agrícola y Patología de Insectos, Departamento de Producción Agraria, Universidad Pública de Navarra, Campus Arrosadía, 31006- Pamplona, España, rosa.murillo@unavarra.es. El nucleopolidrovirus de Spodoptera exigua (SeMNPV) es uno de los agentes entomopatógenos más prometedores para su desarrollo como bioinsecticida y su incorporación en programas de control integrado de su huésped natural. Las potenciales aplicaciones prácticas en campo abierto sugieren la necesidad de establecer un método de identificación y diagnóstico rápido que permita su seguimiento en el medio ambiente o el control de la calidad del virus en sistemas de producción masiva. El presente estudio comprende el desarrollo de un método basado en la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa (Polymerase Chain Reaction, PCR) combinado con el polimorfismo de la longitud de los fragmentos de restricción (RFLP) generados por la digestión con endonucleasas del ADN amplificado. Se han diseñado cinco parejas de oligonucleótidos que permiten amplificar las zonas del genoma donde se encuentra la mayor variabilidad intergenotípica de este virus. De un total de 36 combinaciones PCR-RFLP, la combinación de la zona de variabilidad V01 con la enzima BglII permitió diferenciar cinco cepas estudiadas: Se-US1, Se-US2, Se-SP1, Se-SP2 y Se-SP3. El estudio en profundidad de la estructura genómica de dicha zona, que corresponde a la región homologa 1 (hr1) del genoma del SeMNPV, indica que se trata de una de las zonas que más contribuye a la plasticidad de la población viral. El método desarrollado permite el procesamiento de un gran número de muestras de diversos orígenes, incluyendo aquellos lugares del agroecosistema donde habitualmente persiste el virus durante periodos de tiempo más o menos largos (planta, suelo, otros organismos vivos). Palabras clave: SeMNPV, baculovirus, variabilidad genotípica, identificación genotípica, PCR-RFLP 101
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DIVERSIDAD FENOTÍPICA <strong>DE</strong>L NUCLEOPOLYHEDROVIRUS <strong>DE</strong><br />
Spodoptera exigua (HÜBNER) AISLADO EN FLORIDA<br />
MUÑOZ, D.; WILLIAMS, T.; MURILLO, R.; LASA, R.; CABALLERO, P.<br />
Laboratorio de Entomología Agrícola y Patología de Insectos, Departamento de Producción<br />
Agraria, Universidad Pública de Navarra, Campus Arrosadía, 31006-Pamplona, España,<br />
dmunoz@unavarra.<strong>es</strong>.<br />
Los baculovirus exhiben una gran diversidad intra<strong>es</strong>pecífica tanto a nivel<br />
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SeMNPV que se han realizado en todo el mundo en los últimos 20 años. Los<br />
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en particular uno originario de Florida, el SeUS2, que se ha utilizado como materia<br />
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mezcla de siete fenotipos, algunos de los cual<strong>es</strong> se diferencian entre sí en<br />
características fenotípicas tan important<strong>es</strong> para la industria bioinsecticida como la<br />
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ejemplo, el genotipo US2D posee una menor virulencia que el US2A, considerado<br />
como el prototipo; el genotipo US2F <strong>es</strong> incapaz de romper el tegumento de la larva<br />
huésped y tiene por tanto limitada su capacidad de dispersión; el genotipo US2E no<br />
puede autoreplicarse por la falta de dos gen<strong>es</strong> <strong>es</strong>encial<strong>es</strong> y actúa como parásito en<br />
la población viral; y el genotipo US2C <strong>es</strong> incapaz de iniciar una infección per os por<br />
si solo. La selección de aislados con características biológicas adecuadas <strong>es</strong> por<br />
tanto un paso de crucial importancia para mejorar la competitividad de <strong>es</strong>tos<br />
productos bioinsecticidas.<br />
Palabras clave: Baculovirus, Spodoptera exigua, nucleopolyhedrovirus, SeMNPV,<br />
diversidad intra<strong>es</strong>pecífica<br />
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