Guía de referencia rápida Pseudalert* - Pàgines de la UAB
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<strong>Pseudalert*</strong> Test Kit<br />
Introduction<br />
The Pseudalert test <strong>de</strong>tects the presence of Pseudomonas aeruginosa in bottled-, pool-, and spa- water samples. The test is based on a bacterial enzyme <strong>de</strong>tection technology<br />
that signals the presence of Pseudomonas aeruginosa through the hydrolysis of a substrate present in the Pseudalert reagent. Pseudomonas aeruginosa cells rapidly grow and<br />
reproduce using the rich supply of amino acids, vitamins, and other nutrients present in the Pseudalert reagent. Actively growing strains of Pseudomonas aeruginosa have an<br />
enzyme that cleaves the substrate to produce a blue fluorescence un<strong>de</strong>r UV light. Pseudalert <strong>de</strong>tects Pseudomonas aeruginosa at 1 cfu in either 100 mL or 250 mL samples<br />
within 24 hours for non-carbonated water samples and within 26 hours for carbonated samples.<br />
Contents<br />
• WPSE020I contains 20 Snap Packs for 100 mL samples.<br />
• WPSE200I contains 200 Snap Packs for 100 mL samples.<br />
• WPSE250-20I contains 20 Snap Packs for 250 mL samples.<br />
• WPSE250-100I contains 100 Snap Packs for 250 mL samples.<br />
Storage<br />
Store at 2°C–30°C away from light<br />
Presence/Absence (P/A) Procedure for Non-carbonated Water Samples<br />
1. Add contents of one appropriately sized snap pack to either a 100 mL or 250 mL sample in a sterile, transparent,<br />
nonfluorescing vessel.<br />
2. Cap vessel and shake.<br />
3. Incubate at 38°C ±0.5°C for 24 hours; results are valid up to 28 hours.<br />
4. Read results according to Result Interpretation table below.<br />
Presence/Absence (P/A) Procedure for Carbonated Water Samples<br />
1. De-gas sample by vigorously shaking sample in original container until no gas can be seen or heard<br />
(loosen cap to allow gas to escape after shaking).<br />
2. Add contents of one appropriately sized snap pack to either a 100 mL or 250 mL sample in a sterile, transparent, nonfluorescing vessel.<br />
3. Shake vessel vigorously for 30–60 seconds to release carbonation (loosen cap to allow gas to<br />
escape after shaking).<br />
4. Secure cap and p<strong>la</strong>ce vessel in 38°C ±0.5°C water bath for 20 minutes.<br />
5. Shake vessel vigorously until no gas can be seen or heard to release carbonation (loosen cap to allow gas<br />
to escape after shaking).<br />
6. Secure cap and p<strong>la</strong>ce in a 38°C ±0.5°C water bath for 26 hours; results are valid up to 28 hours.<br />
7. Read results according to Result Interpretation table below.<br />
Quanti-Tray* Enumeration Procedure (100 mL Samples Only)<br />
Note: If testing carbonated bottled-water samples, follow the “Presence/Absence (P/A) Procedure for<br />
Carbonated Water Samples” steps 1–3 (above), then proceed to step 3 below.<br />
1. Add contents of one snap pack to a 100 mL water sample in a sterile vessel.<br />
2. Cap vessel and shake until dissolved.<br />
3. Add 2 drops of IDEXX Antifoam Solution 1 to the sample/reagent mixture.<br />
Note: IDEXX 120 mL sample vessels 2 containing antifoam are also avai<strong>la</strong>ble.<br />
4. Pour sample/reagent mixture into a Quanti-Tray or Quanti-Tray/2000 and seal in a Quanti-Tray Sealer.<br />
5. P<strong>la</strong>ce the sealed tray in a 38°C ±0.5°C incubator for 24 hours (26 hours for carbonated samples); results are valid up to 28 hours.<br />
6. Read results according to the Result Interpretation table below. Count the number of positive wells, and refer to the MPN table provi<strong>de</strong>d with the trays to obtain a Most<br />
Probable Number.<br />
Result Interpretation<br />
Appearance Result<br />
No blue fluorescence Negative for Pseudomonas aeruginosa<br />
Blue fluorescence † Positive for Pseudomonas aeruginosa<br />
† Presence of blue fluorescent color greater than the amount present in a negative control sample<br />
• Look for fluorescence with a 6-watt, 365 nm, UV light within 5 inches of the sample in a dark environment. Face light away from your eyes and toward the sample.<br />
• Pseudalert results are <strong>de</strong>finitive at 24–28 hours for non-carbonated samples. In addition, positives for Pseudomonas aeruginosa observed before 24 hours and negatives<br />
observed after 28 hours are also valid.<br />
Procedural Notes<br />
• Use only sterile, nonbuffered, oxidant-free water for dilutions.<br />
• For comparison, an incubated sterile water b<strong>la</strong>nk containing Pseudalert reagent (negative control) can be used when interpreting results.<br />
• This insert may not reflect your local regu<strong>la</strong>tions. For compliance testing, be sure to follow appropriate regu<strong>la</strong>tory procedures.<br />
• Pseudalert is a primary water test. Pseudalert performance characteristics do not apply to samples altered by preenrichment or concentration.<br />
• Pseudalert has not been validated for use with f<strong>la</strong>vored bottled-water or marine water samples.<br />
• Aseptic technique should always be followed when using Pseudalert. Dispose of materials in accordance with Good Laboratory Practices.<br />
• The presence of a high mineral content (especially magnesium and or calcium) can cause Pseudalert reagent to become cloudy.<br />
Quality Control Procedures<br />
The following quality control procedure is recommen<strong>de</strong>d for each lot of Pseudalert or more often as regu<strong>la</strong>tions require:<br />
1. For each of the American Type Culture Collection (ATCC) 3 bacterial strain listed below, streak the culture onto <strong>la</strong>beled TSA or blood agar p<strong>la</strong>tes, and incubate at 35°C<br />
±0.5°C for 18–24 hours.<br />
2. For each bacterial strain, touch a sterile 1 μL inocu<strong>la</strong>ting loop to a colony, and use it to inocu<strong>la</strong>te a <strong>la</strong>beled test tube containing 5 mL of sterile <strong>de</strong>ionized water. Close cap<br />
and shake thoroughly.<br />
3. For each bacterial strain, take a 1 μL loop from the test tube, and use it to inocu<strong>la</strong>te a <strong>la</strong>beled vessel containing either 100 mL or 250 mL of sterile <strong>de</strong>ionized water. These<br />
are your controls.<br />
4. Follow the Pseudalert Presence/Absence or Quanti-Tray Enumeration steps above to test these controls. Compare test results to the expected results below.<br />
Control ATCC # Expected Result<br />
P. aeruginosa ATCC 27853 or ATCC 10145 Blue fluorescence<br />
E. coli ATCC 25922 No blue fluorescence<br />
P. fluorescens ATCC 13525 No blue fluorescence<br />
1. IDEXX Antifoam Solution catalog number: WAFDB<br />
2. IDEXX 120 mL Shrink-ban<strong>de</strong>d Vessels with Antifoam catalog number: WV120SBAF-200<br />
3. American Type Culture Collection, 1-800-638-6597<br />
©2010 IDEXX Laboratories, Inc. All rights reserved.<br />
*Pseudalert and Quanti-Tray are tra<strong>de</strong>marks or registered tra<strong>de</strong>marks of IDEXX Laboratories, Inc. or its affiliates in the United States and/or other countries.<br />
Kit <strong>de</strong> test <strong>Pseudalert*</strong><br />
Introduction<br />
Le test Pseudalert détecte <strong>la</strong> présence <strong>de</strong> Pseudomonas aeruginosa dans les échantillons d’eau en bouteille, d’eau <strong>de</strong> piscine et d’eau thermale. Le test est basé sur <strong>la</strong><br />
détection d’une enzyme bactérienne qui, en hydrolysant le substrat présent dans le réactif Pseudalert, met en évi<strong>de</strong>nce <strong>la</strong> présence <strong>de</strong> <strong>la</strong> bactérie Pseudomonas aeruginosa.<br />
Avec le milieu enrichi en aci<strong>de</strong>s aminés, vitamines et autres nutriments présents dans le réactif Pseudalert, <strong>la</strong> croissance et <strong>la</strong> reproduction <strong>de</strong> Pseudomonas aeruginosa<br />
sont rapi<strong>de</strong>s. Les souches <strong>de</strong> Pseudomonas aeruginosa en pleine croissance expriment une enzyme qui clive le substrat, ce qui produit une fluorescence bleue visible sous<br />
lumière ultraviolette. Pseudalert détecte Pseudomonas aeruginosa à 1 ufc dans <strong>de</strong>s échantillons <strong>de</strong> 100 ml ou <strong>de</strong> 250 ml en 24 heures pour les échantillons d’eau non<br />
gazeuse et en 26 heures pour les échantillons d’eau gazeuse.<br />
Contenu<br />
• WPSE020I contient 20 sachets Snap pour <strong>de</strong>s échantillons <strong>de</strong> 100 ml.<br />
• WPSE200I contient 200 sachets Snap pour <strong>de</strong>s échantillons <strong>de</strong> 100 ml.<br />
• WPSE250-20I contient 20 sachets Snap pour <strong>de</strong>s échantillons <strong>de</strong> 250 ml.<br />
• WPSE250-100I contient 100 sachets Snap pour <strong>de</strong>s échantillons <strong>de</strong> 250 ml.<br />
Conditions <strong>de</strong> conservation<br />
À conserver entre 2 °C et 30 °C, à l’abri <strong>de</strong> <strong>la</strong> lumière.<br />
Procédure <strong>de</strong> présence/absence (P/A) pour les échantillons d’eau non gazeuse<br />
1. Ajouter le contenu d’un sachet Snap <strong>de</strong> taille appropriée dans un échantillon <strong>de</strong> 100 ml ou <strong>de</strong> 250 ml p<strong>la</strong>cé dans un récipient<br />
stérile, transparent et non fluorescent.<br />
2. Fermer le récipient et agiter.<br />
3. Incuber à 38 °C ± 0,5 °C pendant 24 heures. Les résultats peuvent être lus jusqu’à 28 heures.<br />
4. Interpréter les résultats en se référant au tableau d’interprétation <strong>de</strong>s résultats ci-<strong>de</strong>ssous.<br />
Procédure <strong>de</strong> présence/absence (P/A) pour les échantillons d’eau gazeuse<br />
1. Dégazer l’échantillon en agitant vigoureusement le récipient dans lequel il a été prélevé jusqu’à ce qu’il soit impossible <strong>de</strong> voir ou<br />
d’entendre le gaz (<strong>de</strong>sserrer le bouchon pour permettre au gaz <strong>de</strong> s’échapper après l’agitation).<br />
2. Ajouter le contenu d’un sachet Snap <strong>de</strong> taille appropriée dans un échantillon <strong>de</strong> 100 ml ou <strong>de</strong> 250 ml p<strong>la</strong>cé dans un récipient stérile,<br />
transparent et non fluorescent.<br />
3. Agiter le récipient vigoureusement pendant 30 à 60 secon<strong>de</strong>s pour libérer <strong>la</strong> carbonatation (<strong>de</strong>sserrer le bouchon pour permettre au gaz<br />
<strong>de</strong> s’échapper après l’agitation).<br />
4. Refermer le récipient et le p<strong>la</strong>cer dans un bain-marie à 38 °C ± 0,5 °C pendant 20 minutes.<br />
5. Agiter le récipient vigoureusement pour libérer <strong>la</strong> carbonatation jusqu’à ce qu’il soit impossible <strong>de</strong> voir ou d’entendre le gaz (<strong>de</strong>sserrer le<br />
bouchon pour permettre au gaz <strong>de</strong> s’échapper après l’agitation).<br />
6. Refermer le récipient et le p<strong>la</strong>cer dans un bain-marie à 38 °C ± 0,5 °C pendant 26 heures. Les résultats peuvent être lus jusqu’à 28 heures.<br />
7. Interpréter les résultats en se référant au tableau d’interprétation <strong>de</strong>s résultats ci-<strong>de</strong>ssous.<br />
Procédure <strong>de</strong> numération Quanti-Tray* (échantillons <strong>de</strong> 100 ml uniquement)<br />
Remarque : Si l’analyse concerne <strong>de</strong>s échantillons d’eau gazeuse en bouteille, suivre les étapes 1 à 3 <strong>de</strong> <strong>la</strong> « Procédure <strong>de</strong> présence/<br />
absence (P/A) pour les échantillons d’eau gazeuse » ci-<strong>de</strong>ssus, puis passer directement à l’étape 3 ci-<strong>de</strong>ssous.<br />
1. Ajouter le contenu d’un sachet Snap dans un échantillon d’eau <strong>de</strong> 100 ml p<strong>la</strong>cé dans un récipient stérile.<br />
2. Fermer le récipient et agiter jusqu’à dissolution.<br />
3. Ajouter 2 gouttes <strong>de</strong> solution anti-mousse IDEXX 1 au mé<strong>la</strong>nge échantillon/réactif.<br />
Remarque : <strong>de</strong>s récipients IDEXX <strong>de</strong> 120 ml contenant déjà un agent anti-mousse sont également disponibles. 2<br />
4. Verser le mé<strong>la</strong>nge échantillon/réactif dans un Quanti-Tray ou Quanti-Tray/2000 et fermer hermétiquement à l’ai<strong>de</strong> d’une scelleuse Quanti-Tray Sealer.<br />
5. P<strong>la</strong>cer le p<strong>la</strong>teau scellé dans un incubateur à 38 °C ± 0,5 °C pendant 24 heures (26 heures pour les échantillons d’eau gazeuse). Les résultats peuvent être lus jusqu’à 28 heures.<br />
6. Interpréter les résultats en se référant au tableau d’interprétation <strong>de</strong>s résultats ci-<strong>de</strong>ssous. Compter le nombre <strong>de</strong> puits positifs et se référer au tableau NPP fourni avec les<br />
p<strong>la</strong>teaux pour obtenir le Nombre le plus probable (NPP).<br />
Interprétation <strong>de</strong>s résultats<br />
Aspect Résultat<br />
Absence <strong>de</strong> fluorescence bleue Échantillon négatif pour Pseudomonas aeruginosa<br />
Fluorescence bleue † Échantillon positif pour Pseudomonas aeruginosa<br />
† Présence d’une fluorescence <strong>de</strong> couleur bleue plus importante que <strong>la</strong> fluorescence détectée dans un échantillon <strong>de</strong> contrôle négatif.<br />
• Analyser <strong>la</strong> fluorescence à l’ai<strong>de</strong> d’une <strong>la</strong>mpe UV <strong>de</strong> 6 watts, émettant un rayonnement <strong>de</strong> 365 nm, située à une distance <strong>de</strong> 12 cm du f<strong>la</strong>con, dans un endroit obscur. Orienter<br />
<strong>la</strong> <strong>la</strong>mpe en direction <strong>de</strong> l’échantillon et <strong>la</strong> tenir à l’écart <strong>de</strong>s yeux.<br />
• Les résultats <strong>de</strong> Pseudalert doivent être lus entre 24 et 28 heures pour les échantillons non gazeux. Les échantillons positifs pour Pseudomonas aeruginosa observés avant<br />
24 heures et les échantillons négatifs observés après 28 heures sont également vali<strong>de</strong>s.<br />
Remarques concernant <strong>la</strong> procédure<br />
• Utiliser uniquement <strong>de</strong> l’eau stérile, non tamponnée et sans oxydant pour les dilutions.<br />
• Afin <strong>de</strong> réaliser une comparaison, il est possible d’utiliser <strong>de</strong> l’eau stérile incubée avec du réactif Pseudalert (contrôle négatif) au moment d’interpréter les résultats.<br />
• Cette notice peut différer <strong>de</strong>s réglementations en vigueur dans votre pays. Pour que tout test soit réalisé en conformité avec ces <strong>de</strong>rnières, suivre les procédures<br />
réglementaires appropriées.<br />
• Pseudalert est avant tout un test <strong>de</strong> contrôle <strong>de</strong> l’eau. Les caractéristiques <strong>de</strong> performance <strong>de</strong> Pseudalert ne s’appliquent pas aux échantillons altérés par un enrichissement<br />
préa<strong>la</strong>ble ou une concentration.<br />
• Pseudalert n’a pas été validé pour une utilisation avec <strong>de</strong>s échantillons d’eau en bouteille aromatisée ou d’eau <strong>de</strong> mer.<br />
• Utiliser systématiquement <strong>de</strong>s techniques aseptiques lors <strong>de</strong> l’emploi <strong>de</strong> Pseudalert. Éliminer le matériel conformément aux bonnes pratiques <strong>de</strong> <strong>la</strong>boratoire.<br />
• Le réactif Pseudalert peut se troubler en présence d’une haute teneur en minéraux (particulièrement en magnésium et (ou) en calcium).<br />
Contrôle qualité<br />
Il est recommandé d’exécuter <strong>la</strong> procédure <strong>de</strong> contrôle <strong>de</strong> qualité suivante pour chaque lot <strong>de</strong> Pseudalert, ou plus souvent si <strong>la</strong> réglementation l’exige.<br />
1. Pour chaque souche bactérienne <strong>de</strong> l’American Type Culture Collection (ATCC) 3 dont <strong>la</strong> liste est donnée ci–<strong>de</strong>ssous, déposer <strong>la</strong> culture sur un milieu TSA ou une gélose au<br />
sang dûment étiquetés, et incuber à 35 °C ± 0,5 ºC pendant 18 à 24 heures.<br />
2. Pour chaque souche bactérienne, prélever une colonie avec une anse d’inocu<strong>la</strong>tion <strong>de</strong> 1 μl et l’introduire dans un tube à essai étiqueté contenant 5 ml d’eau déminéralisée<br />
stérile. Le fermer et bien homogénéiser.<br />
3. Pour chaque souche bactérienne, prélever 1 μl du tube à essai à l’ai<strong>de</strong> d’une anse 1 μl et l’inoculer dans un récipient étiqueté contenant soit 100 ml soit 250 ml d’eau<br />
déminéralisée stérile. Il s’agit <strong>de</strong> vos contrôles.<br />
4. Suivre les étapes <strong>de</strong> <strong>la</strong> procédure présence/absence ou <strong>de</strong> <strong>la</strong> procédure <strong>de</strong> numération Quanti-Tray du kit Pseudalert décrites ci-<strong>de</strong>ssus pour analyser ces contrôles.<br />
Comparer les résultats du test aux résultats escomptés indiqués ci-<strong>de</strong>ssous.<br />
Contrôle Nº ATCC Résultat escompté<br />
P. aeruginosa ATCC 27853 o<strong>de</strong>r ATCC 10145 Fluorescence bleue<br />
E. coli ATCC 25922 Pas <strong>de</strong> fluorescence bleue<br />
P. fluorescens ATCC 13525 Pas <strong>de</strong> fluorescence bleue<br />
1. Numéro <strong>de</strong> catalogue <strong>de</strong> <strong>la</strong> solution anti-mousse IDEXX : WAFDB<br />
2. Numéro <strong>de</strong> catalogue <strong>de</strong>s récipients IDEXX avec anti-mousse protégés par une ban<strong>de</strong> thermorétractable : WV120SBAF-200<br />
3. American Type Culture Collection : 1-800-638-6597<br />
©2010 IDEXX Laboratories, Inc. Tous droits réservés.<br />
*Pseudalert et Quanti-Tray sont <strong>de</strong>s marques commerciales ou <strong>de</strong>s marques déposées d’IDEXX Laboratories, Inc. ou <strong>de</strong> ses filiales aux États-Unis et/ou<br />
dans d’autres pays.<br />
Kit <strong>de</strong>l test <strong>Pseudalert*</strong><br />
Introduzione<br />
Il test Pseudalert rileva <strong>la</strong> presenza di Pseudomonas aeruginosa in acque imbottigliate, e di piscine e centri termali. Il test si basa sul rilevamento di un enzima batterico<br />
presente nel<strong>la</strong> Pseudomonas aeruginosa, che catalizza l’idrolisi <strong>de</strong>l substrato contenuto nel reagente Pseudalert. I batteri Pseudomonas aeruginosa crescono e si riproducono<br />
rapidamente sfruttando <strong>la</strong> ricca fonte di aminoacidi, vitamine e altri nutrienti presenti nel reagente Pseudalert. I ceppi di Pseudomonas aeruginosa che proliferano rapidamente<br />
possiedono un enzima che idrolizza il substrato, producendo una fluorescenza blu in presenza di luce UV. Pseudalert è in grado di rilevare entro 24 ore <strong>la</strong> presenza di Pseudo-<br />
monas aeruginosa ad una concentrazione di 1 organismo in campioni da 100 ml o 250 ml di acqua non gassata ed entro 26 ore in campioni di acqua gassata.<br />
Contenuto<br />
• WPSE020I contiene 20 dosi di reagente Snap per campioni da 100 ml.<br />
• WPSE200I contiene 200 dosi di reagente Snap per campioni da 100 ml.<br />
• WPSE250-20I contiene 20 dosi di reagente Snap per campioni da 250 ml.<br />
• WPSE250-100I contiene 100 dosi di reagente Snap per campioni da 250 ml.<br />
Conservazione<br />
Conservare a 2–30 °C lontano dal<strong>la</strong> luce.<br />
Procedura di presenza/assenza (P/A) per campioni di acqua non gassata<br />
1. Aggiungere il contenuto di una dose di reagente Snap <strong>de</strong>l<strong>la</strong> dimensione appropriata ad un campione di 100 ml o 250 ml in un<br />
recipiente sterile, trasparente e non fluorescente.<br />
2. Chiu<strong>de</strong>re il recipiente ed agitarlo.<br />
3. Incubare a 38 °C ± 0,5 °C per 24 ore. I risultati sono validi per un periodo non superiore a 28 ore.<br />
4. Leggere i risultati in base al<strong>la</strong> seguente tabel<strong>la</strong> di interpretazione <strong>de</strong>i risultati.<br />
Procedura di presenza/assenza (P/A) per campioni di acqua gassata<br />
1. Degassificare il campione agitandolo vigorosamente nel contenitore originale fino a quando non è possibile osservare o udire <strong>la</strong><br />
presenza <strong>de</strong>l gas (dopo averlo agitato, allentare il tappo per <strong>la</strong>sciare fuoriuscire il gas).<br />
2. Aggiungere il contenuto di una dose di reagente Snap <strong>de</strong>l<strong>la</strong> dimensione appropriata ad un campione da 100 ml o 250 ml in un<br />
recipiente sterile, trasparente e non fluorescente.<br />
3. Agitare il recipiente vigorosamente per 30–60 secondi per <strong>la</strong>sciare fuoriuscire il gas (dopo averlo agitato, allentare il tappo per<br />
<strong>la</strong>sciare fuoriuscire il gas).<br />
4. Chiu<strong>de</strong>re il recipiente e collocarlo in un bagno termostatato a 38 °C ± 0,5 °C per 20 minuti.<br />
5. Agitare il recipiente vigorosamente fino a quando non è possibile osservare o udire <strong>la</strong> presenza <strong>de</strong>l gas per <strong>la</strong>sciarlo fuoriuscire<br />
completamente (dopo averlo agitato, allentare il tappo per <strong>la</strong>sciare fuoriuscire il gas).<br />
6. Chiu<strong>de</strong>re il recipiente e posizionarlo in un bagno termostatato a 38 °C ± 0,5 °C per 26 ore. I risultati sono validi per un periodo non<br />
superiore a 28 ore.<br />
7. Leggere i risultati in base al<strong>la</strong> seguente tabel<strong>la</strong> di interpretazione <strong>de</strong>i risultati.<br />
Procedura di enumerazione Quanti-Tray* (solo per campioni da 100 ml)<br />
Nota: per l’analisi di campioni di acqua gassata, seguire i passaggi 1–3 <strong>de</strong>scritti prece<strong>de</strong>ntemente nel<strong>la</strong> sezione “Procedura di presenza/<br />
assenza (P/A) per campioni di acqua gassata” e quindi proseguire con il passaggio 3.<br />
1. Aggiungere il contenuto di una dose di reagente Snap ad un campione di acqua da 100 ml, in un recipiente sterile.<br />
2. Chiu<strong>de</strong>re il recipiente ed agitarlo fino al<strong>la</strong> dissoluzione.<br />
3. Aggiungere 2 gocce di soluzione antischiuma IDEXX 1 al<strong>la</strong> misce<strong>la</strong> campione/reagente.<br />
Nota: sono disponibili anche recipienti per campioni IDEXX da 120 ml già contenenti antischiuma. 2<br />
4. Versare <strong>la</strong> misce<strong>la</strong> campione/reagente in un Quanti-Tray o un Quanti-Tray/2000 e sigil<strong>la</strong>rlo con un sigil<strong>la</strong>tore Quanti-Tray Sealer IDEXX.<br />
5. Posizionare il contenitore sigil<strong>la</strong>to in un incubatore a 38 °C ± 0,5 °C per 24 ore (26 ore per campioni di acqua gassata). I risultati sono validi per un periodo non superiore<br />
a 28 ore.<br />
6. Leggere i risultati in base al<strong>la</strong> seguente tabel<strong>la</strong> di interpretazione <strong>de</strong>i risultati. Contare il numero <strong>de</strong>i pozzetti positivi e consultare <strong>la</strong> tabel<strong>la</strong> MPN in dotazione con il<br />
contenitore per ottenere il numero più probabile (MPN).<br />
Interpretazione <strong>de</strong>l risultato<br />
Aspetto Risultato<br />
Nessuna fluorescenza blu Negativo per Pseudomonas aeruginosa<br />
Fluorescenza blu † Positivo per Pseudomonas aeruginosa<br />
† Presenza di un livello di fluorescenza blu superiore a quello presente nel campione di controllo negativo.<br />
• Ricercare <strong>la</strong> presenza di fluorescenza usando una <strong>la</strong>mpada UV da 6 watt con lunghezza d’onda di 365 nm a circa 12 centimetri dal campione e in ambiente buio. Indirizzare <strong>la</strong><br />
luce verso il campione e lontano dagli occhi.<br />
• In caso di campioni di acqua non gassata, i risultati di Pseudalert sono consi<strong>de</strong>rati <strong>de</strong>finitivi dopo 24–28 ore. Inoltre, sono validi anche i risultati positivi per Pseudomonas<br />
aeruginosa osservati prima <strong>de</strong>lle 24 ore ed i risultati negativi osservati dopo 28 ore.<br />
Note procedurali<br />
• Per le diluizioni usare solo acqua sterile, non tamponata e senza ossidanti.<br />
• Per il confronto, durante l’interpretazione <strong>de</strong>i risultati è possibile utilizzare come bianco un campione di acqua sterile incubato contenente il reagente Pseudalert (controllo negativo).<br />
• Questo inserto informativo potrebbe non riflettere i rego<strong>la</strong>menti locali <strong>de</strong>ll’utente. Per i test in conformità, assicurarsi di seguire le appropriate procedure normative.<br />
• Pseudalert è principalmente un test per l’acqua. Le caratteristiche di prestazione di Pseudalert non sono applicabili a campioni alterati da qualsiasi pre-arricchimento<br />
o concentrazione.<br />
• Pseudalert non è stato validato per l’utilizzo con campioni di acqua imbottigliata aromatizzata o di acqua marina.<br />
• Quando si usa Pseudalert è necessario impiegare tecniche asettiche. Smaltire i materiali seguendo le buone pratiche di <strong>la</strong>boratorio.<br />
• La presenza di un elevato contenuto di minerali (in partico<strong>la</strong>re di magnesio e/o calcio) può ren<strong>de</strong>re torbido il reagente Pseudalert.<br />
Procedure per il controllo di qualità<br />
La seguente procedura di controllo di qualità <strong>de</strong>ve essere eseguita su ogni lotto di Pseudalert oppure con una maggiore frequenza, in conformità a quanto previsto dalle<br />
normative specifiche:<br />
1. Per ciascuno <strong>de</strong>i ceppi batterici ATCC (American Type Culture Collection) 3 sotto elencati, effettuare uno striscio <strong>de</strong>l<strong>la</strong> coltura su piastre all’agar sangue o TSA con etichetta<br />
e incubare a 35 °C ± 0,5 °C per 18-24 ore.<br />
2. Per ciascun ceppo batterico, strisciare sul<strong>la</strong> colonia un’ansa da inocu<strong>la</strong>zione sterile da 1 μl e usar<strong>la</strong> per inocu<strong>la</strong>re una provetta etichettata contenente 5 ml di acqua<br />
<strong>de</strong>ionizzata sterile. Chiu<strong>de</strong>re <strong>la</strong> provetta e agitar<strong>la</strong> accuratamente.<br />
3. Per ciascun ceppo batterico, usare un’ansa da 1 μl, inserir<strong>la</strong> nel<strong>la</strong> provetta e inocu<strong>la</strong>re un recipiente etichettato contenente 100 ml o 250 ml di acqua <strong>de</strong>ionizzata sterile.<br />
Questi campioni rappresentano i controlli per il test.<br />
4. Per analizzare i controlli, seguire i passaggi <strong>de</strong>l<strong>la</strong> procedura di presenza/assenza Pseudalert o di enumerazione Quanti-Tray <strong>de</strong>scritti prece<strong>de</strong>ntemente. Confrontare i risultati<br />
ottenuti con quelli previsti riportati di seguito.<br />
Controllo N. ATCC Risultato previsto<br />
P. aeruginosa ATCC 27853 o ATCC 10145 Fluorescenza blu<br />
E. coli ATCC 25922 Nessuna fluorescenza blu<br />
P. fluorescens ATCC 13525 Nessuna fluorescenza blu<br />
1. Numero di catalogo <strong>de</strong>l<strong>la</strong> soluzione antischiuma IDEXX: WAFDB<br />
2. Numero di catalogo <strong>de</strong>i contenitori da 120 ml con pellico<strong>la</strong> termoretraibile e antischiuma IDEXX: WV120SBAF-200<br />
3. American Type Culture Collection 1-800-638-65977<br />
©2010 IDEXX Laboratories, Inc. Tutti i diritti riservati.<br />
*Pseudalert e Quanti-Tray sono marchi o marchi registrati di IDEXX Laboratories, Inc. o di suoi associati negli Stati Uniti e/o in altri Paesi.<br />
Kit <strong>Pseudalert*</strong><br />
Introducción<br />
El kit Pseudalert <strong>de</strong>tecta <strong>la</strong> presencia <strong>de</strong> Pseudomonas aeruginosa en muestras <strong>de</strong> agua embotel<strong>la</strong>da, <strong>de</strong> agua <strong>de</strong> piscina y <strong>de</strong> agua termal. El análisis se basa en <strong>la</strong><br />
<strong>de</strong>tección <strong>de</strong> una enzima bacteriana <strong>de</strong> Pseudomonas aeruginosa que cataliza <strong>la</strong> hidrólisis <strong>de</strong>l sustrato presente en el reactivo <strong>de</strong>l kit Pseudalert. Las bacterias Pseudomonas<br />
aeruginosa crecen y se multiplican con rapi<strong>de</strong>z gracias al gran aporte en aminoácidos, vitaminas y otros nutrientes <strong>de</strong>l reactivo <strong>de</strong>l kit Pseudalert. Las cepas en crecimiento<br />
activo <strong>de</strong> Pseudomonas aeruginosa poseen una enzima que hidroliza el sustrato <strong>de</strong>l reactivo y produce una fluorescencia azul cuando se expone a <strong>la</strong> luz UV. Pseudalert<br />
<strong>de</strong>tecta bacterias Pseudomonas aeruginosa a una concentración <strong>de</strong> 1 UFC en muestras <strong>de</strong> 100 ml o 250 ml, en 24 horas en muestras <strong>de</strong> agua no carbonatada y en 26 horas<br />
en muestras <strong>de</strong> agua carbonatada.<br />
Contenido<br />
• WPSE020I contiene 20 dosis Snap para muestras <strong>de</strong> 100 ml.<br />
• WPSE200I contiene 200 dosis Snap para muestras <strong>de</strong> 100 ml.<br />
• WPSE250-20I contiene 20 dosis Snap para muestras <strong>de</strong> 250 ml.<br />
• WPSE250-100I contiene 100 dosis Snap para muestras <strong>de</strong> 250 ml.<br />
Conservación<br />
Almacenar a una temperatura entre 2 y 30 °C protegido <strong>de</strong> <strong>la</strong> luz.<br />
Procedimiento <strong>de</strong> presencia/ausencia (P/A) para muestras <strong>de</strong> agua no carbonatada<br />
1. Añadir el contenido <strong>de</strong> <strong>la</strong> dosis Snap a<strong>de</strong>cuadamente predispensada a una muestra <strong>de</strong> 100 o 250 ml en un recipiente estéril<br />
transparente, no fluorescente.<br />
2. Tapar y agitar el recipiente.<br />
3. Incubar a 38 °C ± 0,5 °C durante 24 horas; los resultados son válidos hasta transcurridas 28 horas.<br />
4. Leer los resultados <strong>de</strong> acuerdo con <strong>la</strong> tab<strong>la</strong> <strong>de</strong> interpretación <strong>de</strong> resultados que figura abajo.<br />
Procedimiento <strong>de</strong> presencia/ausencia (P/A) para muestras <strong>de</strong> agua carbonatada<br />
1. Extraer el gas <strong>de</strong> <strong>la</strong> muestra agitándo<strong>la</strong> enérgicamente <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong> su recipiente original hasta que el gas no se pueda ver ni oír<br />
(aflojar <strong>la</strong> tapa para que pueda salir el gas <strong>de</strong>spués <strong>de</strong> haber agitado <strong>la</strong> muestra).<br />
2. Añadir el contenido <strong>de</strong> <strong>la</strong> dosis Snap a<strong>de</strong>cuadamente predispensada a una muestra <strong>de</strong> 100 o 250 ml en un recipiente estéril<br />
transparente, no fluorescente.<br />
3. Agitar el recipiente enérgicamente durante 30–60 segundos para extraer el dióxido <strong>de</strong> carbono (aflojar <strong>la</strong> tapa para que pueda salir el gas<br />
<strong>de</strong>spués <strong>de</strong> haber agitado el recipiente).<br />
4. Cerrar bien <strong>la</strong> tapa y poner el recipiente en un baño María a 38 °C ± 0,5 °C durante 20 minutos.<br />
5. Agitar el recipiente enérgicamente para extraer el dióxido <strong>de</strong> carbono hasta que el gas no se pueda ver ni oír (aflojar <strong>la</strong> tapa para que pueda<br />
salir el gas <strong>de</strong>spués <strong>de</strong> haber agitado el recipiente).<br />
6. Cerrar bien <strong>la</strong> tapa y poner el recipiente en un baño María a 38 °C ± 0,5 °C durante 26 horas; los resultados son válidos hasta transcurridas 28 horas.<br />
7. Leer los resultados <strong>de</strong> acuerdo con <strong>la</strong> tab<strong>la</strong> <strong>de</strong> interpretación <strong>de</strong> resultados que figura abajo.<br />
Procedimiento <strong>de</strong> enumeración Quanti-Tray* (sólo muestras <strong>de</strong> 100 ml)<br />
Nota: En caso <strong>de</strong> analizar muestras <strong>de</strong> agua embotel<strong>la</strong>da carbonatada, seguir los pasos 1 a 3 <strong>de</strong>l “Procedimiento <strong>de</strong> presencia/ausencia<br />
(P/A) para muestras <strong>de</strong> agua carbonatada” <strong>de</strong>scrito anteriormente y continuar con el paso 3 que figura abajo.<br />
1. Añadir el contenido <strong>de</strong> una dosis Snap a una muestra <strong>de</strong> 100 ml <strong>de</strong> agua, en un recipiente estéril.<br />
2. Tapar y agitar el recipiente hasta que el contenido se haya disuelto.<br />
3. Añadir 2 gotas <strong>de</strong> solución antiespumante <strong>de</strong> IDEXX 1 a <strong>la</strong> mezc<strong>la</strong> muestra/reactivo.<br />
Nota: IDEXX también comercializa recipientes para muestras <strong>de</strong> 120 ml que ya contienen antiespumante. 2<br />
4. Verter <strong>la</strong> mezc<strong>la</strong> muestra/reactivo en una Quanti-Tray o Quanti-Tray/2000 y sel<strong>la</strong>r utilizando un dispositivo <strong>de</strong> sel<strong>la</strong>do para Quanti-Tray.<br />
5. Colocar <strong>la</strong> ban<strong>de</strong>ja sel<strong>la</strong>da en una estufa <strong>de</strong> incubación a 38 °C ± 0,5 °C durante 24 horas (26 horas para muestras <strong>de</strong> agua carbonatada). Los resultados son válidos<br />
hasta transcurridas 28 horas.<br />
6. Leer los resultados <strong>de</strong> acuerdo con <strong>la</strong> tab<strong>la</strong> <strong>de</strong> interpretación <strong>de</strong> resultados que figura abajo. Contar el número <strong>de</strong> pocillos positivos y referirse a <strong>la</strong> tab<strong>la</strong> NMP<br />
proporcionada con <strong>la</strong>s ban<strong>de</strong>jas para obtener el número más probable.<br />
Interpretación <strong>de</strong> resultados<br />
Apariencia Resultado<br />
Sin fluorescencia azul Muestra negativa para Pseudomonas aeruginosa<br />
Con fluorescencia azul † Muestra positiva para Pseudomonas aeruginosa<br />
† Intensidad <strong>de</strong> <strong>la</strong> fluorescencia azul superior a <strong>la</strong> <strong>de</strong> <strong>la</strong> fluorescencia <strong>de</strong>l control negativo.<br />
• Observar <strong>la</strong> fluorescencia en un ambiente oscuro y con una luz UV <strong>de</strong> 6 vatios y 365 nm, a unos 12 cm <strong>de</strong> <strong>la</strong> muestra. Aleje <strong>la</strong> luz <strong>de</strong> sus ojos y oriénte<strong>la</strong> hacia <strong>la</strong> muestra.<br />
• Los resultados <strong>de</strong> Pseudalert para muestras no carbonatadas son <strong>de</strong>finitivos transcurridas entre 24 y 28 horas. A<strong>de</strong>más, los positivos para Pseudomonas aeruginosa observados<br />
antes <strong>de</strong> 24 horas y los negativos observados <strong>de</strong>spués <strong>de</strong> 28 horas también son válidos.<br />
Notas sobre el procedimiento<br />
• Utilizar so<strong>la</strong>mente agua estéril, no tamponada, libre <strong>de</strong> oxidantes, para efectuar <strong>la</strong>s diluciones.<br />
• Para po<strong>de</strong>r realizar <strong>la</strong>s comparaciones a <strong>la</strong> hora <strong>de</strong> interpretar los resultados, se pue<strong>de</strong> utilizar como b<strong>la</strong>nco agua estéril incubada con el reactivo Pseudalert (control negativo).<br />
• Es posible que este prospecto no refleje <strong>la</strong> normativa local <strong>de</strong> su país. Para realizar pruebas que <strong>la</strong> cump<strong>la</strong>n, asegúrese <strong>de</strong> seguir los procedimientos reg<strong>la</strong>mentarios correspondientes.<br />
• Pseudalert es fundamentalmente una prueba para analizar agua. Las características <strong>de</strong> rendimiento <strong>de</strong> Pseudalert no se pue<strong>de</strong>n aplicar a muestras que hayan sido alteradas<br />
previamente por algún tipo <strong>de</strong> enriquecimiento o concentración.<br />
• El kit Pseudalert no se ha validado para ser utilizado con muestras <strong>de</strong> agua embotel<strong>la</strong>da aromatizada o con muestras <strong>de</strong> agua marina.<br />
• Siempre <strong>de</strong>be aplicarse una técnica aséptica cuando se utilice Pseudalert. El material <strong>de</strong>be <strong>de</strong>secharse <strong>de</strong> acuerdo con <strong>la</strong>s buenas prácticas <strong>de</strong> <strong>la</strong>boratorio.<br />
• El reactivo <strong>de</strong>l kit Pseudalert pue<strong>de</strong> volverse turbio cuando <strong>la</strong> muestra presenta un alto contenido en minerales (especialmente magnesio y/o calcio).<br />
Procedimientos <strong>de</strong> control <strong>de</strong> calidad<br />
Se recomienda seguir el siguiente procedimiento <strong>de</strong> control <strong>de</strong> calidad con cada lote <strong>de</strong> Pseudalert o más frecuentemente si <strong>la</strong> normativa así lo exige:<br />
1. Para cada una <strong>de</strong> <strong>la</strong>s cepas bacterianas <strong>de</strong>l American Type Culture Collection (ATCC) 3 que se indican a continuación, siembre el cultivo en p<strong>la</strong>cas <strong>de</strong> TSA o agar sangre<br />
<strong>de</strong>bidamente marcadas e incúbe<strong>la</strong>s a 35 °C ± 0,5 °C durante 18 a 24 horas.<br />
2. Para cada cepa bacteriana, recoja una muestra <strong>de</strong> <strong>la</strong> colonia con una asa <strong>de</strong> siembra estéril <strong>de</strong> 1μl e inocúle<strong>la</strong> en un tubo <strong>de</strong> ensayo marcado que contenga 5 ml <strong>de</strong> agua<br />
<strong>de</strong>sionizada estéril. Cierre <strong>la</strong> tapa y agite bien.<br />
3. Para cada cepa bacteriana, introduzca una asa <strong>de</strong> siembra estéril <strong>de</strong> 1μl en el tubo <strong>de</strong> ensayo e inocule con el<strong>la</strong> un recipiente marcado que contenga 100 o 250 ml <strong>de</strong> agua<br />
<strong>de</strong>sionizada estéril. Las muestras así obtenidas serán sus controles.<br />
4. Para analizar estos controles, siga el procedimiento <strong>de</strong> presencia/ausencia <strong>de</strong> Pseudalert o los pasos <strong>de</strong>l procedimiento <strong>de</strong> enumeración Quanti-Tray <strong>de</strong>scritos<br />
anteriormente. Compare los resultados <strong>de</strong>l análisis con los resultados previstos que se indican a continuación.<br />
Control N.º ATCC Resultado previsto<br />
P. aeruginosa ATCC 27853 o ATCC 10145 Fluorescencia azul<br />
E. coli ATCC 25922 Sin fluorescencia azul<br />
P. fluorescens ATCC 13525 Sin fluorescencia azul<br />
1. Referencia <strong>de</strong> <strong>la</strong> solución antiespumante <strong>de</strong> IDEXX: WAFDB<br />
2. Referencia <strong>de</strong> los recipientes <strong>de</strong> 120 ml <strong>de</strong> IDEXX con antiespumante y pelícu<strong>la</strong> termoretráctil: WV120SBAF-200<br />
3. American Type Culture Collection, 1-800-638-6597<br />
©2010 IDEXX Laboratories, Inc. Todos los <strong>de</strong>rechos reservados.<br />
*Pseudalert y Quanti-Tray son marcas o marcas registradas <strong>de</strong> IDEXX Laboratories, Inc. o sus filiales en Estados Unidos <strong>de</strong> América y/o en otros países..