Guía de referencia rápida Pseudalert* - Pàgines de la UAB

Kit de teste Pseudalert*
Introdução
O teste Pseudalert detecta Pseudomonas aeruginosa em amostras de água engarrafada, de piscinas ou spas. A base do teste é a detecção de uma enzima bacteriana, que assinala
a presença de Pseudomonas aeruginosa ao hidrolisar o substrato presente no reagente Pseudalert. As células de Pseudomonas aeruginosa crescem rapidamente e se reproduzem
devido às elevadas concentrações de aminoácidos, vitaminas e outros nutrientes presentes no reagente para Pseudalert. Cepas de Pseudomonas aeruginosa em crescimento ativo
possuem uma enzima que cliva o substrato, produzindo fluorescência azul sob luz UV. Pseudalert detecta Pseudomonas aeruginosa na concentração de 1 ufc em amostras de
100 ml ou 250 ml dentro de 24 horas em amostras de água não carbonatada e dentro de 26 horas em amostras carbonatadas.
Conteúdo
• WPSE020I contém 20 Snap Packs para amostras de 100 ml.
• WPSE200I contém 200 Snap Packs para amostras de 100 ml.
• WPSE250-20I contém 20 Snap Packs para amostras de 250 ml.
• WPSE250-100I contém 100 Snap Packs para amostras de 250 ml.
Armazenagem
Armazenar a 2°C–30°C e ao abrigo da luz.
Procedimento para testes de presença/ausência (P/A) em amostras de água não carbonatada
1. Adicione o conteúdo de um snap pack de tamanho apropriado a uma amostra de 100 ou 250 ml em um recipiente estéril,
transparente e não fluorescente.
2. Tampe o recipiente e agite.
3. Incube a 38°C ± 0,5°C por 24 horas. Os resultados serão válidos por até 28 horas.
4. Leia os resultados conforme a tabela Interpretação de resultados apresentada abaixo.
Procedimento para testes de presença/ausência (P/A) em amostras de água carbonatada
1. Desgaseifique a amostra agitando-a vigorosamente no recipiente original até que não haja mais gás visível ou audível (solte a tampa
para permitir a saída do gás após agitar).
2. Adicione o conteúdo de um snap pack de tamanho apropriado a uma amostra de 100 ou 250 ml em um recipiente estéril,
transparente e não fluorescente.
3. Agite vigorosamente o recipiente durante 30–60 segundos para liberar o gás carbônico (afrouxe a tampa para permitir a saída do gás
depois de agitar).
4. Recoloque a tampa e coloque o recipiente em um banho-maria a 38°C ± 0,5°C por 20 minutos.
5. Agite vigorosamente o recipiente até que não haja mais gás visível ou audível (afrouxe a tampa para permitir a saída do gás depois de agitar).
6. Recoloque a tampa e coloque em banho-maria a 38°C ± 0,5°C por 26 horas. Os resultados serão válidos por até 28 horas.
7. Leia os resultados conforme a tabela Interpretação de resultados apresentada abaixo.
Procedimento de enumeração Quanti-Tray* (somente amostras de 100 ml)
Observação: Ao testar amostras de água carbonatada engarrafada, siga as etapas 1–3 do “Procedimento para testes de presença/ausência
(P/A) em amostras de água carbonatada” e, em seguida, siga a etapa 3 abaixo.
1. Adicione o conteúdo de um snap pack a uma amostra de água de 100 ml em um recipiente estéril.
2. Tampe o recipiente e agite até dissolver.
3. Adicione 2 gotas da solução antiespuma IDEXX 1 à mistura de amostra/reagente.
Observação: Também estão disponíveis recipientes de amostras IDEXX de 120 ml com antiespuma. 2
4. Coloque a mistura de amostra/reagente em uma Quanti-Tray ou Quanti-Tray/2000 e vede com um selador Quanti-Tray.
5. Coloque a placa selada em banho-maria a 38°C ± 0,5°C por 24 horas (26 horas para água carbonatada). Os resultados serão válidos por até 28 horas.
6. Leia os resultados conforme a tabela Interpretação de resultados apresentada abaixo. Conte o número de cavidades positivas e consulte a tabela de número mais provável
(NMP) fornecida com as placas para verificar o número mais provável.
Interpretação do resultado
Aspecto Resultado
Sem fluorescência azul Negativo para Pseudomonas aeruginosa
Fluorescência azul † Positivo para Pseudomonas aeruginosa
† Presença de fluorescência azul em quantidade superior à observada na amostra de controle negativo.
• Para pesquisar fluorescência azul, coloque uma lâmpada UV de 6 watts e 365 nm a aproximadamente 12 cm da amostra em um ambiente escuro. Aponte a luz para amostra
e na direção oposta a seus olhos.
• Os Pseudalert dá resultados definitivos em 24–28 horas para amostras não carbonatadas. Além disso, resultados positivos para Pseudomonas aeruginosa observados antes
de 24 horas e negativos observados após 28 horas também são válidos.
Observações sobre o procedimento
• Use apenas água estéril, não tamponada e sem oxidantes para as diluições.
• Para comparação, pode-se utilizar um branco incubado de água estéril contendo o reagente Pseudalert (controle negativo) ao interpretar os resultados.
• Estas instruções podem não ser inteiramente compatíveis com os regulamentos cabíveis em seu local de trabalho. Para manter a conformidade, verifique se os
procedimentos regulatórios cabíveis estão sendo seguidos.
• Pseudalert é um teste para água primária. As características do desempenho do Pseudalert não se aplicam a amostras alteradas por pré-enriquecimento ou concentração.
• O Pseudalert não foi validado para uso com amostras de água engarrafada aromatizada ou água do mar.
• Empregue sempre técnicas assépticas ao utilizar o Pseudalert. Descarte os materiais de acordo com as boas práticas laboratoriais.
• A presença de altas concentrações de minerais, especialmente magnésio ou cálcio, pode turvar o reagente Pseudalert.
Procedimientos de control de calidad
Os procedimentos de controle de qualidade a seguir são recomendados para cada lote de Pseudalert e devem ser realizados com mais frequência se exigido pela
regulamentação:
1. Para cada cepa bacteriana do American Type Culture Collection (ATCC) 3 listada abaixo, repique a cultura em placas TSA ou ágar-sangue identificadas e incube a 35°C ± 0,5°C
por 18–24 horas.
2. Para cada cepa bacteriana, toque a colônia com uma alça de inoculação estéril de 1 μl e utilize-a para inocular um tubo de ensaio identificado contendo 5 ml de água
deionizada estéril. Feche a tampa e agite vigorosamente.
3. Para cada cepa bacteriana, pegue uma alça de 1 μl do tubo de ensaio e use-a para inocular um recipiente identificado contendo 100 ou 250 ml de água deionizada estéril.
Esses tubos servirão como controles.
4. Para testar os controles, siga as etapas abaixo dos testes de Presença/Ausência Pseudalert ou Quanti-Tray Enumeration. Compare os resultados obtidos com os esperados a seguir.
Controle Nº. ATCC Resultado esperado
P. aeruginosa ATCC 27853 ou ATCC 10145 Fluorescência azul
E. coli ATCC 25922 Sem fluorescência azul
P. fluorescens ATCC 13525 Sem fluorescência azul
1. Número de catálogo da solução antiespuma IDEXX: WAFDB
2. Número de catálogo de recipientes IDEXX 120 ml com lacre encolhível e antiespuma: WV120SBAF-200
3. American Type Culture Collection, 1-800-638-6597
©2010 IDEXX Laboratories, Inc. Todos os direitos reservados.
*Pseudalert e Quanti-Tray são marcas comerciais ou marcas comerciais registradas da IDEXX Laboratories, Inc. ou de suas filiais nos Estados Unidos
da América e/ou em outros países.
Pseudalert* Testkit
Einleitung
Der Pseudalert-Test weist Pseudomonas aeruginosa in Wasser in verschlossenen Behältnissen, Schwimmbeckenwasser und Spa-Wasser nach. Der Test basiert auf dem
Nachweis bakterieller Enzyme und zeigt das Vorliegen von Pseudomonas aeruginosa durch Hydrolyse eines im Pseudalert-Reagenz enthaltenen Substrats an. Die Zellen von
Pseudomonas aeruginosa wachsen und reproduzieren sich rasch, indem sie den hohen Gehalt an Aminosäuren, Vitaminen und anderen Nährstoffen im Pseudalert-Reagenz
nutzen. Aktiv wachsende Stämme von Pseudomonas aeruginosa weisen ein Enzym auf, dass das Substrat des Reagenz spaltet und im UV-Licht eine blaue Fluoreszenz bewirkt.
Pseudalert weist Pseudomonas aeruginosa im Bereich von 1 CFU (koloniebildende Einheit/KBE) in 100-ml- oder 250-ml-Proben nicht kohlensäurehaltigen Wassers binnen
24 Stunden und in Proben mit kohlensäurehaltigem Wasser innerhalb von 26 Stunden nach.
Inhalt
• WPSE020I enthält 20 Snap Packs für 100-ml-Wasserproben.
• WPSE0200I enthält 200 Snap Packs für 100-ml-Wasserproben.
• WPSE250-20I enthält 20 Snap Packs für 250-ml-Wasserproben.
• WPSE250-100I enthält 100 Snap Packs für 250-ml-Wasserproben.
Lagerung
Bei 2–30 °C lichtgeschützt lagern.
Presence/Absence (P/A)-Verfahren für nicht kohlensäurehaltige Wasserproben
1. Den Inhalt eines entsprechend großen Snap Packs zu 100 ml oder 250 ml Wasserprobe geben, die sich in einem sterilen,
transparenten und nicht fluoreszierenden Gefäß befindet.
2. Gefäß verschließen und schütteln.
3. Bei 38 °C ± 0,5 °C 24 Stunden inkubieren; Ergebnisse sind bis zu einer Gesamtinkubationszeit von 28 Stunden gültig.
4. Die Testergebnisse gemäß der nachstehenden Tabelle zur Ergebnisinterpretation ablesen.
Presence/Absence (P/A)-Verfahren für kohlensäurehaltige Wasserproben
1. Kohlensäure aus der Probe durch kräftiges Schütteln des Originalbehältnisses so lange entfernen, bis kein Gas mehr zu sehen oder
zu hören ist (Verschlusskappe immer wieder öffnen, um das Gas nach dem Schütteln entweichen zu lassen).
2. Den Inhalt eines entsprechend großen Snap Packs zu 100 ml oder 250 ml Wasserprobe geben, die sich in einem sterilen,
transparenten und nicht fluoreszierenden Gefäß befindet.
3. Das verschlossene Probengefäß 30 bis 60 Sekunden lang schütteln, um die restliche Kohlensäure zu entfernen (Gefäßverschluss öffnen,
um das Gas nach dem Schütteln entweichen zu lassen).
4. Verschlusskappe schließen und Gefäß für 20 Minuten in ein Wasserbad mit einer Temperatur von 38 °C ± 0,5 °C geben.
5. Das verschlossene Probengefäß nochmals kräftig schütteln, bis keine Kohlensäure mehr zu sehen oder zu hören ist (Gefäßverschluss öffnen,
um das Gas nach dem Schütteln entweichen zu lassen).
6. Verschlusskappe schließen und das Gefäß für weitere 26 Stunden in ein Wasserbad mit 38 °C ± 0,5 °C stellen; Ergebnisse sind bis zu 28 Stunden gültig.
7. Die Testergebnisse gemäß der nachstehenden Tabelle zur Ergebnisinterpretation ablesen.
Quanti-Tray* Verfahren zur quantitativen Bakterienzählung (nur für 100-ml-Proben)
Hinweis: Zum Testen von Proben kohlensäurehaltigen Flaschenwassers den Anweisungen unter „Presence/Absence (P/A)-Verfahren für
kohlensäurehaltige Wasserproben”, Schritte 1 bis 3 (siehe oben), folgen, danach mit dem nachstehenden Schritt 3 fortfahren.
1. Den Inhalt eines Snap Pack zu einer 100-ml-Wasserprobe in einem sterilen Gefäß geben.
2. Gefäß verschließen und schütteln, bis das Reagenz vollkommen aufgelöst ist.
3. Zwei Tropfen IDEXX Antischaum-Lösung 1 zur Mischung aus Probe und Reagenz hinzufügen.
Hinweis: Ebenfalls erhältlich sind IDEXX 120-ml-Probengefäße, die bereits Antischaummittel enthalten. 2
4. Die Mischung aus Probe und Reagenz in einen Quanti-Tray oder Quanti-Tray/2000 gießen und im Quanti-Tray Sealer versiegeln.
5. Den versiegelten Quanti-Tray bei 38 °C ± 0,5 °C 24 Stunden inkubieren (26 Stunden für kohlensäurehaltige Wasserproben); Ergebnisse sind bis zu 28 Stunden gültig.
6. Die Testergebnisse anhand der nachstehenden Tabelle zur Ergebnisinterpretation ablesen. Die Anzahl der positiven Probenvertiefungen zählen und die wahrscheinlichste
Zahl (MPN/Most Probable Number) an Keimen anhand der MPN-Tabelle, die den Trays beiliegt, ermitteln.
Ergebnisinterpretation
Färbung Ergebnis
Keine blaue Fluoreszenz Negativ für Pseudomonas aeruginosa
Blaue Fluoreszenz † Positiv für Pseudomonas aeruginosa
† Vorliegen einer stärkeren blau fluoreszierenden Färbung als in der Negativkontrolle
• Untersuchung auf Fluoreszenz in dunklem Umfeld mittels einer 6-Watt-UV-Lampe (365 nm Wellenlänge), die nicht weiter als 12 cm von der Probe entfernt sein soll. Das Licht
nicht in die Augen, sondern auf die Probe richten.
• Pseudalert-Testergebnisse sind für nicht kohlensäurehaltige Proben nach 24–28 Stunden definitiv. Auch die vor Ablauf von 24 Stunden beobachteten positiven sowie die nach
Ablauf von 28 Stunden beobachteten negativen Reaktionen auf Pseudomonas aeruginosa sind gültige Ergebnisse.
Hinweise zur Testdurchführung
• Nur steriles, nicht gepuffertes, keine Oxidanzien enthaltendes Wasser zur Verdünnung verwenden.
• Zum Vergleich kann zur Ergebnisinterpretation eine inkubierte Blindprobe aus sterilem Wasser, dass das Pseudalert-Reagenz enthält (Negativkontrolle), herangezogen werden.
• Manche Angaben in dieser Packungsbeilage entsprechen möglicherweise nicht Ihren örtlichen Vorschriften. Stellen Sie sicher, dass die anwendbaren behördlichen
Vorschriften befolgt werden.
• Pseudalert ist ein primärer Wassertest. Die Leistungsmerkmale für Pseudalert gelten nicht für Proben, die durch Voranreicherung oder Konzentration modifiziert wurden.
• Pseudalert ist nicht für die Verwendung bei Wasserproben von mit Geschmack versetztem Flaschenwasser oder Meerwasser validiert.
• Bei der Verwendung von Pseudalert sollte stets auf ein aseptisches Vorgehen geachtet werden. Entsorgung der Materialien gemäß den Standard-Laborpraktiken (Gute Laborpraxis/GLP).
• Bei hohem Mineralstoffgehalt des Wassers (insbesondere von Magnesium oder Kalzium) kann sich das Pseudalert-Reagenz trüben.
Qualitätskontrollverfahren
Für jede Charge von Pseudalert (bzw. auch häufiger, je nach örtlichen Bestimmungen) müssen die folgenden Verfahren zur Qualitätskontrolle angewendet werden:
1. Für jeden Bakterienstamm der American Type Culture Collection (ATTC) 3 , der unten aufgeführt ist, die Kultur auf markierte TSA- oder Blutagarplatten ausstreichen und bei
35 °C ± 0,5 °C 18–24 Stunden inkubieren.
2. Für jeden Bakterienstamm 1 μl einer Kolonie mittels steriler Inokulationsöse in ein markiertes Teströhrchen mit 5 ml sterilen, entionisierten Wassers transferieren. Röhrchen
verschließen und kräftig schütteln.
3. Für jeden Bakterienstamm 1 μl mittels geeigneter Inokulationsöse aus dem Teströhrchen entnehmen und in ein markiertes Gefäß mit 100 ml oder 250 ml sterilen,
entionisierten Wassers überführen. Dies sind die Kontrollen.
4. Folgen Sie zum Testen dieser Kontrollen den Anweisungen der oben beschriebenen Schritte des Pseudalert Presence/Absence-Verfahrens oder des Quanti-Tray-Verfahrens
zur quantitativen Bakterienzählung. Vergleichen Sie die Testergebnisse mit den nachfolgenden erwarteten Resultaten.
Kontrolle ATCC Nr Erwartetes Resultat
P. aeruginosa ATCC 27853 oder ATCC 10145 Blaue Fluoreszenz
E. coli ATCC 25922 Keine blaue Fluoreszenz
P. fluorescens ATCC 13525 Keine blaue Fluoreszenz
1. IDEXX Antischaum-Lösung - Katalognummer: WAFDB
2. IDEXX mit Schrumpfband verschlossene Einwegbehälter (120 ml) mit Antischaum-Lösung - Katalognummer: WV120SBAF-200
3. American Type Culture Collection 1-800-638-6597
©2010 IDEXX Laboratories, Inc. Alle Rechte vorbehalten.
*Pseudalert und Quanti-Tray sind Schutzmarken oder eingetragene Schutzmarken von IDEXX Laboratories, Inc. oder eines Tochterunternehmens von IDEXX
in den Vereinigten Staaten und/oder in anderen Ländern.
Pseudalert *
06-18569-01
IDEXX Laboratories, Inc., One IDEXX Drive, Westbrook, Maine 04092 USA
North/South America: 1-207-556-4496/1-800-321-0207
For Technical Support, please call:
www.idexx.com/water
UK: +44 (0) 1638 676800
Europe: 00800 4339 9111
China: +86-21-61279528
Japan: +81 422 71 5921
Australia: 1800 655 978