Departamento de Física Teórica, Atómica y Óptica - Quantalab ...
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3.7 Medidas <strong>de</strong>l contenido <strong>de</strong> clorofila.<br />
Nuestro objetivo es la evaluación <strong>de</strong> la capacidad <strong>de</strong> la inversión <strong>de</strong> los mo<strong>de</strong>los<br />
PROSPECT y SAILH para darnos unas estimaciones correctas <strong>de</strong> parámetros biofísicos<br />
<strong>de</strong> la vegetación. Necesitamos, por tanto, contar con medidas <strong>de</strong> estos mismos<br />
parámetros. En esta sección se presenta el protocolo y las medidas <strong>de</strong> contenido <strong>de</strong><br />
clorofila <strong>de</strong> las hojas <strong>de</strong> cebada realizas en la campaña <strong>de</strong>l 2002. Las medidas han sido<br />
llevadas a cabo en colaboración con el <strong>Departamento</strong> <strong>de</strong> Producción Vegetal y<br />
Silvopascicultura <strong>de</strong> la Escuela Técnica Superior <strong>de</strong> Ingenierías Agrarias <strong>de</strong> la<br />
Universidad <strong>de</strong> Valladolid (Campus <strong>de</strong> Palencia).<br />
El protocolo utilizado se ha basado en el <strong>de</strong>scrito por Ramos (2000). En él, el<br />
contenido <strong>de</strong> clorofila se <strong>de</strong>termina en extracto vegetal con una disolución <strong>de</strong> acetona al<br />
80%. La preparación <strong>de</strong> la muestra se realiza pesando 0.1 g <strong>de</strong> hoja. A continuación esta<br />
es macerada en un mortero junto con 2 ml <strong>de</strong> acetona pura al 80% (v/v). El tejido se ha<br />
<strong>de</strong> moler hasta que no se consiga apreciar restos <strong>de</strong> la hoja a fin <strong>de</strong> extraer <strong>de</strong> las células<br />
la práctica totalidad <strong>de</strong> la clorofila. A continuación se agregan otros 10 ml <strong>de</strong> acetona.<br />
Se transfiere cuidadosamente la disolución a un embudo provisto <strong>de</strong> un disco <strong>de</strong> papel<br />
filtro y se <strong>de</strong>ja filtrar durante unos minutos. En el papel filtro ha <strong>de</strong> quedar un residuo<br />
sólido carente <strong>de</strong> clorofila. La concentración se <strong>de</strong>termina a partir <strong>de</strong> la medida <strong>de</strong><br />
absorbancia <strong>de</strong> la disolución, la cual se obtiene mediante un espectrofotómetro. En<br />
nuestro caso se ha utilizado el mo<strong>de</strong>lo UV/VIS V-530 <strong>de</strong> Jasco (1995).<br />
Este equipo está diseñado para medir el espectro <strong>de</strong> transmitancia <strong>de</strong><br />
disoluciones. El rango <strong>de</strong> funcionamiento es <strong>de</strong> 190 nm a 1100 nm, empleando dos<br />
lámparas, una <strong>de</strong> <strong>de</strong>uterio entre 190 y 350 nm y otra halógena entre 330 y 1100 nm. En<br />
nuestro caso sólo estamos interesados en el visible, por lo que sólo se ha usado la<br />
lámpara halógena. La luz <strong>de</strong> las lámparas ilumina la rendija <strong>de</strong> entrada <strong>de</strong> un<br />
monocromador, que selecciona la luz en función <strong>de</strong> la longitud <strong>de</strong> onda. Éste está<br />
diseñado siguiendo la configuración <strong>de</strong>l círculo <strong>de</strong> Rowland, utilizando como medio<br />
dispersivo una red holografía cóncava <strong>de</strong> 1200 líneas/mm. Para evitar ór<strong>de</strong>nes<br />
superiores <strong>de</strong> difracción se antepone una serie <strong>de</strong> filtros a la entrada <strong>de</strong>l monocromador.<br />
Una vez obtenida luz monocromática se divi<strong>de</strong> en dos haces mediante una lámina<br />
separadora, conduciéndolos hacia dos cubetas <strong>de</strong> cuarzo que contienen: la muestra a<br />
medir y una referencia, habitualmente el disolvente empleado en la muestra. La luz<br />
inci<strong>de</strong> sobre dos fotodiodos <strong>de</strong> silicio. La transmitancia <strong>de</strong> la muestra se obtiene<br />
realizando el cociente entre la señal medida <strong>de</strong>spués <strong>de</strong> atravesar la cubeta con la<br />
muestra respecto <strong>de</strong> la señal medida <strong>de</strong>spués <strong>de</strong> atravesar la cubeta con el disolvente.<br />
Así mismo, se pue<strong>de</strong> <strong>de</strong>finir la absorbancia como el logaritmo <strong>de</strong>cimal <strong>de</strong> este mismo<br />
cociente con signo negativo.<br />
A = − ( I / I )<br />
(3-10)<br />
log10 0<br />
Para la realización <strong>de</strong> nuestras medidas, la cubeta <strong>de</strong>stinada a la muestra se ha<br />
llenado con el extracto <strong>de</strong> clorofila y la <strong>de</strong> referencia con acetona al 80%. A partir <strong>de</strong><br />
estos valores <strong>de</strong> absorbancia obtenidos, el contenido <strong>de</strong> clorofila se calcula mediante la<br />
ecuación (3-11) (Arnon, 1949; Bruinsma, 1963).<br />
[ Ca b ] = 8. 02A663<br />
− 20.<br />
21A645<br />
+ (3-11)<br />
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