Departamento de Física Teórica, Atómica y Óptica - Quantalab ...

apartado 3.7. Por lo tanto se ha modificado la metodología empleada en la campaña del
año 2003.
Tras recoger las muestras, y una vez en el laboratorio, las hojas se han
conservado en un frigorífico a 4ºC y se ha procedido a continuación a realizar las
medidas necesarias para calcular la reflectancia y transmitancia foliar. Posteriormente,
hasta la extracción de clorofila, se han conservado en un congelador a –8ºC. De cada
hoja, de la que se tienen medidas de reflectancia y transmitancia foliar, se ha recortado
un círculo con un troquel de 0.7 cm de diámetro. Cada círculo se ha machacado en un
mortero, junto con 4 ml de acetona al 80%, hasta disolver por completo el tejido,
vertiendo el extracto a un tubo de ensayo. Tras lavar por dos veces el mortero con otros
4 ml de acetona, se ha añadido todo al tubo. En total se ha utilizado 12 ml de disolvente.
Se han utilizado tapones de caucho para evitar la evaporación de la acetona. Se ha
observado que durante el proceso de maceración de la hoja se pierde un promedio de
0.8 ml, lo cual se ha tenido en cuenta a la hora de realizar los cálculos.
Los tubos así preparados se guardaron en el frigorífico, en oscuridad, entre 24 y
48 horas para que la acetona tenga tiempo suficiente para extraer toda la clorofila del
tejido vegetal y evitando que la clorofila pueda degradarse. Posteriormente se han
realizado medidas con un espectrofotómetro modelo Jasco UV/VIS V-530, para obtener
los valores de absorbancia de los extractos de clorofila. El tiempo de calentamiento del
espectrofotómetro ha sido de 20 minutos. Las medidas se han realizado de 400 a 700
nm en intervalos de 1 nm. Se han realizado medidas cada 30 minutos al aire para
controlar posibles variaciones en las condiciones de medida. En los casos en los que
hubiera variaciones superiores a ± 0.001 a 500 nm se ha repetido la línea base.
La disolución se ha filtrado con papel de filtro, pasándolo a otro tubo con ayuda
de un embudo. El extracto resultante se ha introducido en una de las cubetas. La cubeta
se ha de homogenizar en cada medida de un nuevo extracto. La otra cubeta se ha
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Contenido de clorofila Ca+b (μg/cm 2 )
60
50
40
30
20
10
0
z01
z02
z03
z04
z05
z06
z07
z08
z09
Zonas de estudio
z10
z11
z12
z13
z16
Figura 4-21 Promedios de contenido de clorofila registrados en cada parcela.