Castanea sativa Miller - Ministerio de Agricultura, Alimentación y ...
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tra que pue<strong>de</strong> ser: micelio, una sección <strong>de</strong>l<br />
carpóforo o <strong>de</strong> la ma<strong>de</strong>ra dañada, corte <strong>de</strong><br />
una hoja, etcétera; una vez en la placa se recubre<br />
con agua <strong>de</strong>stilada procurando empapar<br />
bien el papel y mojando ligeramente la<br />
muestra.<br />
Después se <strong>de</strong>be vigilar cada 24 horas, <strong>de</strong>bido<br />
a que se facilita, no sólo el <strong>de</strong>sarrollo<br />
<strong>de</strong>l hongo en cuestión, sino también el <strong>de</strong>sarrollo<br />
<strong>de</strong> gran variedad <strong>de</strong> saprofitos que<br />
nos dificultan la observación.<br />
b) Siembra en medio <strong>de</strong> cultivo artificial:<br />
consiste en crear, no sólo una temperatura<br />
y humedad propicia, sino también un alimento<br />
artificial sustitutivo para po<strong>de</strong>r vigilar<br />
mejor el <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong>l hongo.<br />
Existen muchos medios <strong>de</strong> cultivo artificial,<br />
sólo vamos a reseñar los utilizados en<br />
este trabajo. Para lo cual vamos a citar las<br />
fórmulas para la fabricación <strong>de</strong> estos cultivos:<br />
Agar <strong>de</strong> patata glucosado<br />
Echandi 1971 (PDA)<br />
Patatas peladas y partidas 200 gr.<br />
Dextrosa (glucosa) 20 gr.<br />
Agar 17 gr.<br />
Agua <strong>de</strong>stilada 1.000 mi.<br />
Medio Ponchet (P)<br />
PONCHET et al, 1972<br />
Este medio es selectivo para Phytophthora<br />
spp.<br />
Agua <strong>de</strong>stilada 1.000 mi.<br />
Agar 17 gr.<br />
Malta 10 gr.<br />
Penicilina G (400.000 VI) 2 cajas<br />
Polymixina 75 % 0,25 gr.<br />
PNCB 75 % 0,134 gr.<br />
Benomilo 50 % 0,03 gr.<br />
Agar malta<br />
Medio para micoflora total <strong>de</strong> suelos.<br />
Malta extrac 33 gr.<br />
Agar técnica 10 gr.<br />
H2O <strong>de</strong>stilada 1 litro<br />
Medio Komada<br />
Es selectivo para Fusarium en suelo.<br />
A. Agua <strong>de</strong>stilada o <strong>de</strong>sionizada<br />
1.000 mi.<br />
44<br />
Asparagina 2 gr.<br />
Fosfato bipotásico 1 gr.<br />
Sulfato <strong>de</strong> Magnesio .. 0,5 gr.<br />
Cloruro Potásico 0,5 gr.<br />
Galactosa 10 gr.<br />
Agar 20 gr.<br />
B. Solución <strong>de</strong> Sulfato<br />
ferroso<br />
EDTA 37,5 gr.<br />
SO4 Fe. 7H2O 27,85 gr.<br />
Agua <strong>de</strong>stilada 1.000 mi.<br />
De esta solución se aña<strong>de</strong>n 2 mi. a la formulación<br />
indicada en A, <strong>de</strong>ben prepararse<br />
cantida<strong>de</strong>s acor<strong>de</strong>s, dado que no se pue<strong>de</strong><br />
conservar.<br />
Después, estos medios <strong>de</strong> cultivo se meten<br />
en matraces y se esterilizan en el autoclave<br />
durante un tiempo variable según el<br />
medio.<br />
Una vez tenemos el medio <strong>de</strong> cultivo, se<br />
vierte en placas Petri con un dispensador automático<br />
a razón <strong>de</strong> 20 ce. por placa y se disponen<br />
sobre la bancada <strong>de</strong>l laboratorio durante<br />
24 horas para observar la existencia <strong>de</strong><br />
posibles contaminaciones <strong>de</strong> dichas placas<br />
durante el proceso <strong>de</strong> elaboración <strong>de</strong>l medio,<br />
y se guarda envuelto en papel <strong>de</strong> aluminio<br />
en cámara frigorífica hasta su utilización.<br />
Debe anotarse el tipo <strong>de</strong> cultivo y la fecha<br />
<strong>de</strong> elaboración <strong>de</strong>l medio en las placas,<br />
dado que algunos tienen un tiempo <strong>de</strong> caducidad.<br />
El proceso <strong>de</strong> siembra <strong>de</strong>be ser lo suficientemente<br />
rápido para evitar la infección <strong>de</strong>l<br />
cultivo. Debe realizarse cerca <strong>de</strong> una llama,<br />
para po<strong>de</strong>r <strong>de</strong>sinfectar el instrumental: asa<br />
<strong>de</strong> siembra, aguja enmangada o bisturí. Una<br />
vez realizada la siembra las placas se sellan<br />
con papel <strong>de</strong> parafilm para evitar <strong>de</strong>secación<br />
y la contaminación <strong>de</strong>l cultivo.<br />
3. Existe una micoflora edáfica, muy importante<br />
y <strong>de</strong> difícil aislamiento; para po<strong>de</strong>r<br />
estudiar estos hongos <strong>de</strong>l suelo, utilizamos<br />
materia orgánica <strong>de</strong> origen vegetal como<br />
«trampa» en un medio líquido, para po<strong>de</strong>r<br />
captar las esporas flageladas <strong>de</strong> este tipo <strong>de</strong><br />
hongos. En nuestro caso hemos utilizado pétalos<br />
<strong>de</strong> clavel y en raras ocasiones aguacate.<br />
El método es el siguiente:<br />
Primero hemos recogido tierra <strong>de</strong> la rizos-