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Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) - FBMC

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Id<strong>en</strong>tificación y caracterización bioinformática <strong>de</strong> secu<strong>en</strong>cias <strong>de</strong>sconocidas<br />

Alineami<strong>en</strong>to múltiple<br />

Una <strong>de</strong> <strong>la</strong>s maneras más frecu<strong>en</strong>tes <strong>de</strong> obt<strong>en</strong>er información sobre una secu<strong>en</strong>cia o un grupo <strong>de</strong> secu<strong>en</strong>cias incógnitas,<br />

es mediante <strong>la</strong> búsqueda comparativa utilizando <strong>la</strong> información <strong>de</strong>positada <strong>en</strong> distintas bases <strong>de</strong> datos.<br />

La búsqueda comparativa pue<strong>de</strong> realizarse comparando secu<strong>en</strong>cias <strong>de</strong> a pares o comparando secu<strong>en</strong>cias múltiples.<br />

El alineami<strong>en</strong>to múltiple <strong>de</strong> secu<strong>en</strong>cias juega un papel importante a partir <strong>de</strong> <strong>la</strong> necesidad <strong>de</strong> procesami<strong>en</strong>to <strong>de</strong> <strong>la</strong> información<br />

prov<strong>en</strong>i<strong>en</strong>te <strong>de</strong> los proyectos g<strong>en</strong>ómicos <strong>de</strong> secu<strong>en</strong>ciación masiva. Tanto <strong>la</strong> anotación funcional <strong>de</strong> dichas<br />

secu<strong>en</strong>cias como <strong>la</strong>s herrami<strong>en</strong>tas <strong>de</strong> análisis <strong>de</strong>p<strong>en</strong>d<strong>en</strong> <strong>de</strong> alineami<strong>en</strong>tos múltiples a<strong>de</strong>cuados. El análisis <strong>de</strong> familias<br />

proteicas, <strong>la</strong> id<strong>en</strong>tificación <strong>de</strong> dominios y motivos, <strong>la</strong> predicción <strong>de</strong> su estructura secundaria, <strong>la</strong> estimación <strong>de</strong> los difer<strong>en</strong>tes<br />

tipos <strong>de</strong> plegami<strong>en</strong>tos así como <strong>la</strong> <strong>de</strong>tección <strong>de</strong> homólogos <strong>en</strong>tre especies distantes como pasos intermedios <strong>en</strong><br />

<strong>la</strong> construcción <strong>de</strong> árboles filog<strong>en</strong>éticos, se han constituido <strong>en</strong> principales objetivos <strong>de</strong> este tipo <strong>de</strong> alineami<strong>en</strong>to.<br />

El alineami<strong>en</strong>to múltiple <strong>de</strong> secu<strong>en</strong>cias pue<strong>de</strong> ser visto como una g<strong>en</strong>eralización <strong>de</strong>l alineami<strong>en</strong>to <strong>de</strong> pares <strong>de</strong> secu<strong>en</strong>cias,<br />

don<strong>de</strong> <strong>la</strong> complejidad <strong>de</strong> esta aproximación crece expon<strong>en</strong>cialm<strong>en</strong>te con el número <strong>de</strong> secu<strong>en</strong>cias que intervi<strong>en</strong><strong>en</strong>.<br />

El alineami<strong>en</strong>to múltiple pue<strong>de</strong> dividirse <strong>en</strong> dos categorías principales: aquellos métodos <strong>de</strong> alineami<strong>en</strong>to <strong>de</strong> secu<strong>en</strong>cias<br />

<strong>en</strong> toda su ext<strong>en</strong>sión (globales) y aquellos métodos que alinean regiones con alta similitud (locales). Tradicionalm<strong>en</strong>te,<br />

se ha focalizado <strong>en</strong> los métodos globales, que son aplicables a casos <strong>en</strong> los que <strong>la</strong>s secu<strong>en</strong>cias comparadas<br />

ti<strong>en</strong><strong>en</strong> ext<strong>en</strong>siones simi<strong>la</strong>res. Sin embargo más reci<strong>en</strong>tem<strong>en</strong>te se ha puesto mayor interés <strong>en</strong> los métodos <strong>de</strong> alineami<strong>en</strong>to<br />

múltiple local para el alineami<strong>en</strong>tos <strong>de</strong> secu<strong>en</strong>cias <strong>de</strong>rivadas <strong>de</strong> proyectos geonómicos que sólo alinean<br />

secu<strong>en</strong>cias parcialm<strong>en</strong>te (Paniego y col. 2004).<br />

En los métodos <strong>de</strong> alineami<strong>en</strong>to global, <strong>la</strong> solución clásica se basa <strong>en</strong> <strong>la</strong> formación <strong>de</strong> agrupami<strong>en</strong>tos (“clusters”) <strong>de</strong><br />

secu<strong>en</strong>cias, los cuales se resuelv<strong>en</strong> progresivam<strong>en</strong>te. Para ello, dada una medida <strong>de</strong> similitud <strong>en</strong>tre dos secu<strong>en</strong>cias, se<br />

elige aquel par correspondi<strong>en</strong>te al valor más alto y se alinean y agrupan <strong>en</strong>tre sí para formar un único grupo o cluster<br />

<strong>de</strong> secu<strong>en</strong>cias. A partir <strong>de</strong> este mom<strong>en</strong>to este cluster será tratado como una so<strong>la</strong> secu<strong>en</strong>cia, y el proceso se repetirá<br />

hasta t<strong>en</strong>er un solo cluster con todas <strong>la</strong>s secu<strong>en</strong>cias que interv<strong>en</strong>ían <strong>en</strong> el alineami<strong>en</strong>to múltiple. El programa más difundido<br />

<strong>de</strong> este tipo es el CLUSTALW <strong>en</strong> su última versión (Thompson y col.994). La calidad <strong>de</strong> los alineami<strong>en</strong>tos es<br />

aceptable, y permite alinear algunos pocos ci<strong>en</strong>tos <strong>de</strong> secu<strong>en</strong>cias. En contraste, los algoritmos <strong>de</strong> comparación múltiple<br />

local, alinean segm<strong>en</strong>tos completos <strong>en</strong> vez <strong>de</strong> residuos simples, como el DIALIGN (Morg<strong>en</strong>stern B 1999). Otros<br />

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