Cinética y capacidad neutralizante de los anticuerpos homólogos y ...

Materiales y Métodos
3.5. Cinética de la respuesta de anticuerpos neutralizantes frente a
cepas de diferentes genotipos de virus DEN-3 en un panel de sueros
humanos.
3.5.1. Muestras Serológicas
Para este estudio se utilizaron 20 muestras de suero colectadas de pacientes
serológicamente confirmados como FD (10) y FHD/SCD (10) durante la epidemia de DEN-
3 2001/2002 (28). Estos sueros fueron colectados 18-24 meses después de la fase aguda de
la enfermedad. Los estudios serológicos previos (192) realizados durante la fase aguda de la
enfermedad permitieron la clasificación de los mismos en primarios o secundarios:
Primarios DEN-3 (4 casos de FD) y Secundarios DEN-1/DEN-3 (6 casos de FD y 10 casos
de FHD/SCD). Estos resultados iniciales no forman parte de esta tesis. Un líquido ascítico
hiperinmune murino (Cepa DEN-3 H87) fue empleado como control positivo y un suero
humano sin anticuerpos a DEN fue empleado como control negativo.
3.5.2. Estudios Serológicos
Se determinó el título de anticuerpos neutralizantes a las cepas de virus DEN-3 (tabla 2)
mediante NRNP siguiendo el protocolo descrito en el acápite III.2.4. Se empleó el método
2 en la determinación de anticuerpos neutralizantes a las diferentes cepas del mismo
genotipo. El ensayo fue repetido en 3 días diferentes con el objetivo de garantizar la
repetibilidad del estudio.
Células empleadas
Para el desarrollo de este objetivo, se emplearon las células C6/36 HT y BHK21. La
preparación de las mismas ha sido descrita en el acápite III.2.2.
Cepas empleadas en la NRNP
Las cepas virales empleadas en la NRNP se muestran en la Tabla 2. Seis de estas cepas son
del genotipo III aisladas en diferentes momentos durante la epidemia del 2001/2002 y del
Brote del 2000 respectivamente y la otra cepa perteneciente al genotipo V (cepa Puerto
Rico aislada en 1977). Los títulos virales de las mismas fluctuaron entre 2.5x10 4 y 1.3x10 5
ufp/ml.
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