Cinética y capacidad neutralizante de los anticuerpos homólogos y ...

Materiales y Métodos
Toda muestra de suero con niveles de anticuerpos IgG por MEI a virus DEN >= 20 fue
considerada como un caso con una infección pasada por virus DEN (192) .
Teniendo en cuenta que en el periodo de 1977 a 1999 sólo se habían reportado epidemias
de DEN-1 y DEN-2 en Cuba, los sueros con títulos de anticuerpos neutralizantes de 1/30 o
mayores a DEN-1 fueron considerados como de infección primaria por DEN-1, los que
tenían títulos de 1/30 o mayores a DEN-2 A15 (cepa aislada durante la epidemia de 1981)
fueron considerados como infección primaria por DEN-2 y los que mostraron un título
mayor o igual a 1/30 a ambos serotipos fueron considerados de infección secundaria (197).
Sólo los sueros de individuos inmunes a DEN-1 (Primarios DEN-1) fueron empleados en
esta investigación. Es importante señalar que los anticuerpos fueron medidos a la cepa de
DEN-2 que circuló durante la epidemia de 1981 y a una cepa de DEN-1 del mismo
genotipo de la que circuló en 1977.
3.4.3. Ensayo de Amplificación Dependiente de Anticuerpos (ADA)
Células empleadas
Para el desarrollo de este objetivo, se emplearon las células K562. La línea celular K562 de
macrófagos humanos fue mantenida por pases seriados en medio RPMI suplementado con
10% de SFBI a una razón de pase semanal de 1:3. La misma se utilizó para la realización
de la técnica de ADA y fue donada a nuestro laboratorio por el Prof. S.B. Halstead
(Director Científico de la Iniciativa para la Vacuna Pediátrica de Dengue).
3.4.3.1. Procedimiento seguido para la ADA
Este ensayo se realizó en micrométodo empleando células K562. Las condiciones del
ensayo (multiplicidad del virus, concentración de células, diluciones y tiempo de
incubación) fueron previamente normalizadas usando un suero humano inmune a DEN-1
de título de anticuerpos conocido por ADA (estos datos no forman parte de este estudio).
Se prepararon diluciones en base 10 en medio RPMI de los sueros estudiados. Se
mezclaron 50ul de cada dilución de suero con 50ul de virus DEN-2 A15 diluido para
producir una multiplicidad de infección de m=0.0006. Las mezclas virus-suero se
incubaron por una hora a 37 0 C. A 100ul de la suspensión celular de 2x10 5 cels/ml se le
inocularon 100 ul de la mezcla virus-suero. Cada mezcla de dilución de suero más virus se
inoculó por duplicado. Después de 48h de incubación a 37 0 C en 5% de atmósfera de CO2,
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