Cinética y capacidad neutralizante de los anticuerpos homólogos y ...

Materiales y Métodos
3.4. Variación de los anticuerpos neutralizantes homólogos y
heterólogos a diferentes períodos de la infección promaria. Influencia de
la ADA después de transcurrido 20 años.
3.4.1. Muestras Serológicas
Las muestras de suero estudiadas fueron recibidas a través del Sistema de Vigilancia de
dengue en el período 1981-1985 (103 muestras) y 1999 (2000 muestras) en las que no se
demostró la infección reciente por este agente. Con el objetivo de evitar cualquier error se
excluyeron las muestras de suero provenientes de la provincia de Santiago de Cuba,
teniendo en cuenta que en la misma se reportó una Epidemia de DEN-2 en 1997 (10, 196).
En el ensayo de ADA se incluyeron 24 sueros de las muestras colectadas en 1999 y que
tenían títulos de anticuerpos neutralizantes a virus DEN-2 A15 menores de 1/10.
3.4.2. Estudios serológicos
3.4.2.1. Determinación de anticuerpos IgG y neutralizantes
Se determinó el título de anticuerpos IgG mediante MEI siguiendo el protocolo descrito en
el acápite III.2.2. El título de anticuerpos neutralizantes a los 4 serotipos del virus se
realizó mediante NRNP siguiendo el protocolo descrito en este mismo acápite. En este
acápite se emplearon ambos métodos descritos en el acápite III.2.2 para la determinación de
anticuerpos neutralizantes. El primero se utilizó en la selección del grupo de sueros
inmunes a DEN-1 y el segundo en la determinación de anticuerpos neutralizantes a los 4
serotipos en los grupos de sueros estudiados (sueros colectados a 4 y 20 años de la
primoinfección). Los TPG se calcularon para cada grupo de estudio y dentro de estos para
cada serotipo viral.
Células empleadas
Para el desarrollo de este objetivo, se emplearon las células C6/36 HT y BHK21. La
preparación de lascélulas C6/36 HT y de las BHK21 han sido descritas en el acápite III.2.2.
Cepas utilizadas en la NRNP
En la tabla 1 del acápite III.2.2 se muestran las características de las cepas virales
utilizadas.
Criterios empleados en la clasificación serológica de los sueros
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