Cinética y capacidad neutralizante de los anticuerpos homólogos y ...

Materiales y Métodos
1. A tubos plásticos estériles sembrados con células C6/36 HT y con monocapa celular se
les descartó el medio de crecimiento. Las células fueron inoculadas con 0.1mL de una
dilución 1/20 de las muestras de suero colectadas entre el segundo y el sexto día de
comienzo de la fiebre. Cuando se empleó la técnica de “shell vial”, las células se sembraron
en placas plásticas de 24 pozos. Una vez obtenida la monocapa confluente, se retiró el
medio de crecimiento y se inoculó 100 ul/pozo en duplicado de la muestra de suero en la
misma dilución anteriormente mencionada. Las células inoculadas se centrifugaron durante
15 min a 1500 rpm a temperatura ambiente según el protocolo descrito por Rodriguez y
colaboradores (80).
2. Las células inoculadas (en tubos o placas de 24 pozos) se incubaron durante una hora a
33ºC adicionándose posteriormente 1mL de medio de mantenimiento que consistió en
medio de crecimiento pero con 2% de SFBI en lugar del 10%.
3. Las células fueron incubadas a 33ºC nuevamente y fueron observadas durante siete días
en busca de la aparición de ECP. Al cabo de este tiempo la identificación viral se realizó
empleando la IFI con líquido ascitico hiperinmune y anticuerpos monoclonales específicos
a los cuatro serotipos del virus DEN (81). Los anticuerpos monoclonales fueron
gentilmente donados por el Dr. D. Gubler, director de la Unidad de Arbovirus del Centro
para Control de Enfermedades, EUA.
4. En la figura 1 (a y b) se muestran los cultivos de células C6/36 HT. (a) Células C6/36
HT Controles (sin inocular) y (b) Células C6/36 inoculadas con virus DEN-2 mostrando un
ECP de sincitios.
A B
Figura 2. A: Cultivo de células C6/36 HT, B: Cultivo de células C6/36 HT con ECP
Fuente: Libro de Técnicas del Laboratorio de Artbovirus, IPK, 2007.
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