Cinética y capacidad neutralizante de los anticuerpos homólogos y ...

Materiales y Métodos
2. De acuerdo al titulo viral previamente calculado, se preparó la dilución de trabajo para
cada una de las cepas virales empleadas la que consistió en 80 (ufp) por cada 0,1 mL de
dilución.
3. Las diluciones de los sueros se mezclaron con igual volumen de la dilución viral de
trabajo (0,1mL de cada una). Para cada virus se preparó un control viral que consistió
en mezclas de 0,1mL de medio de mantenimiento con 0,1mL de la dilución de trabajo
de la cepa viral correspondiente.
4. Las mezclas de virus más suero o virus más medio se incubaron durante una hora a
37ºC en atmósfera de CO2 al 5%.
5. Posteriormente, 0,05mL de cada una de las mezclas virus-suero y de los controles
virales (virus-medio) fueron inoculados en 0,5mL de la suspensión de células BHK-21
clono 15 previamente sembradas en las placas plásticas de 24 pozos a la concentración
previamente mencionada en este acápite.
6. Las células inoculadas se incubaron durante 4 horas a 37ºC en atmósfera de CO2 al
5%.
7. El medio de recubrimiento se añadió a razón de 0,5mL por pozo. Las células fueron
incubadas durante cinco días para el virus DEN-2, seis días para el DEN-4, y 7 días
para los virus DEN-1 y DEN-3.
8. Luego de la incubación se descartó el medio y se lavaron las monocapas celulares con
agua de la pila. A cada pozo le fue añadido 0,5 mL de una solución del colorante
(Acido Acético 60 mL, Napthol Blue Black 1g y 13,6 g Acetato de Sodio).
9. El valor porcentual de reducción del número de placas con respecto al control viral se
calculó según la relación:
% de reducción = [1- (Xs/Xm)] x 100%
En la cual:
Xs -- promedio del número de placas obtenido para cada dilución de suero.
Xm -- promedio del número de placas obtenido para el control viral.
Para conocer el título de anticuerpos de un suero pueden emplearse 2 métodos.
Método 1
Cuando el suero se prueba a una dilución específica (1/30), frente a una dilución constante
de virus (193) . En este caso se obtiene el % de reducción de placas para la dilución de
50