Cinética y capacidad neutralizante de los anticuerpos homólogos y ...

Cepas virales Historial de pases
DEN-1 Angola *
4P C6/36 2P Vero
1P C6/36 HT
Lugar de
aislamiento
Materiales y Métodos
Año de
aislamiento
Angola 1988
DEN-2 A15/1981 4PR 4P C6/36 HT Cuba 1981
DEN 2 I348600*
4P C6/36
Colombia 1986
DEN-3 116/00 3P C6/36 HT Cuba 2000
DEN-4 Dominica* 1P C6/36 6P C6/36 HT Dominica 1981
P: Pase, R: Ratón
* Cepas gentilmente donadas por el Dr. Robert Shope (ya fallecido) de la
Universidad de Texas, EUA.
En este estudio la NRNP se realizó a los virus DEN-1 y DEN-2 dado que en el momento
del mismo sólo se habían reportado epidemias de estos dos serotipos en nuestro país. Los
datos de las cepas DEN-1 Angola y DEN-2 A15/1981 utilizadas aparecen en la tabla 1
anterior.
Preparación de los lotes virales para la NRNP
1. Frascos plásticos estériles de 25cm 2 con monocapa confluente de células C6/36 HT
fueron inoculados con 500 μl de la dilución de las cepas virales utilizadas en el estudio
(ver acápite de cepas virales empleadas en cada uno de los estudios realizados). Todas
las cepas fueron inoculadas a una multiplicidad de infección de 0.001, empleando
medio de mantenimiento para la dilución viral.
2. Las células inoculadas se incubaron durante una hora a 33ºC para facilitar la entrada del
virus.
3. Posteriormente se añadieron 5 ml de medio de mantenimiento a cada uno de los frascos.
4. Los cultivos infectados con las diferentes cepas fueron incubados a 33ºC y observados
diariamente hasta que el ECP se extendió por toda la monocapa celular (figura 1(b)). En
las cepas que no mostraron ECP la replicación se detectó por inmunofluorescencia
(Hronovsky, 1981) utilizando líquido ascítico hiperinmune de ratón anti DEN
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