Cinética y capacidad neutralizante de los anticuerpos homólogos y ...
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Materiales y Métodos<br />
3.2.2. Estudios Serológicos<br />
Se <strong>de</strong>terminó el título <strong>de</strong> <strong>anticuerpos</strong> IgG anti<strong>de</strong>ngue mediante un Elisa <strong>de</strong> Inhibición<br />
(MEI) y la presencia <strong>de</strong> <strong>anticuerpos</strong> <strong>neutralizante</strong>s a <strong>los</strong> virus DEN-1 y DEN-2 mediante<br />
NRNP siguiendo <strong>los</strong> protoco<strong>los</strong> <strong>de</strong>scritos a continuación.<br />
3.2.2.1. Determinación <strong>de</strong>l título <strong>de</strong> <strong>anticuerpos</strong> IgG anti<strong>de</strong>ngue<br />
La <strong>de</strong>tección <strong>de</strong> <strong>anticuerpos</strong> IgG a virus <strong>de</strong>ngue se realizó en todos <strong>los</strong> casos que fue<br />
necesario siguiendo el protocolo <strong>de</strong> Técnicas <strong>de</strong>l Laboratorio <strong>de</strong> Arbovirus según las<br />
modificaciones realizadas por Vázquez y cols (192). Los criterios <strong>de</strong> positividad seguidos<br />
fueron <strong>los</strong> siguientes:<br />
Criterios empleados en la clasificación por esta técnica<br />
Una muestra <strong>de</strong> suero obtenida entre 5-7 dia <strong>de</strong>l comienzo <strong>de</strong> la fiebre con un titulo <strong>de</strong><br />
<strong>anticuerpos</strong> <strong>de</strong> IgG anti<strong>de</strong>ngue >=1/1280 mediante MEI fue consi<strong>de</strong>rada como un caso <strong>de</strong><br />
infección secundaria mientras que aquellas muestras con un titulo <strong>de</strong> <strong>anticuerpos</strong> < =20 se<br />
consi<strong>de</strong>raron como casos <strong>de</strong> infección primaria.<br />
3.2.2.2. Detección <strong>de</strong> Anticuerpos <strong>neutralizante</strong>s a <strong>los</strong> virus DEN-1 y DEN-2 por la<br />
técnica <strong>de</strong> NRNP.<br />
Células empleadas<br />
Para el <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> este objetivo, se emplearon las células BHK21. La línea celular BHK-<br />
21 clono 15 (riñón <strong>de</strong> Hámster) obtenida a partir <strong>de</strong> la línea BHK-21 clono 13 (ATCC<br />
1992) y donada al laboratorio <strong>de</strong> Arbovirus por el Prof. S.B. Halstead (Director Científico<br />
<strong>de</strong> la Iniciativa para la Vacuna Pediátrica <strong>de</strong> Dengue) fue empleada en la NRNP y en la<br />
titulación <strong>de</strong> <strong>los</strong> lotes virales. Las células fueron crecidas a 37ºC en frascos plásticos<br />
estériles <strong>de</strong> 75 cm 2 utilizando medio MEM suplementado con 1% <strong>de</strong> aminoácidos no<br />
esenciales (100X) y 10% <strong>de</strong> SFBI, y pasadas semanalmente a una razón <strong>de</strong> pase <strong>de</strong> 1:8.<br />
Para la realización <strong>de</strong> ambas técnicas se prepararon suspensiones celulares a una<br />
concentración <strong>de</strong> 2 x 10 5 células/mL.<br />
Cepas empleadas en la NRNP<br />
La tabla 1 muestra las cepas virales <strong>de</strong> <strong>los</strong> 4 serotipos empleadas en <strong>los</strong> diferentes estudios.<br />
Tabla 1. Historial <strong>de</strong> pases, lugar y año <strong>de</strong> aislamiento <strong>de</strong> las cepas utilizadas en la<br />
NRNP<br />
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