UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID - Biblioteca de la ...

5. Amplificación y oligotipaje de los loci HLA de clase II............................................................60
5.1. Locus HLA-DQA1......................................................................................................60
5.2. Loci HLA-DRB y -DQB1...........................................................................................60
5.2.1. Amplificación de los loci HLA-DRB y -DQB1 ..........................................61
5.2.2. Controles de amplificación..........................................................................62
5.2.3. Oligotipaje de los loci HLA-DRB y -DQB1 ...............................................62
6. Secuenciación de DNA ..............................................................................................................62
6.1. Secuenciación mediante clonaje .................................................................................62
6.1.1. Purificación de productos de PCR...............................................................63
6.1.2. Ligado en el vector de clonaje.....................................................................64
6.1.3. Transformación de bacterias competentes...................................................65
6.1.4. Selección, confirmación y crecimiento de clones recombinantes ...............65
6.1.5. Purificación de recombinantes ....................................................................65
6.2. Secuenciación directa..................................................................................................66
6.3. Reacciones de secuenciación .....................................................................................66
6.3.1. Reacciones de secuenciación en el termociclador.......................................67
6.3.2. Purificación de las reacciones de secuenciación .........................................67
6.4. Desarrollo electroforético de los productos de secuenciación; detección y
obtención de las secuencias ........................................................................................67
7. Análisis estadístico .....................................................................................................................68
7.1. Cálculo de frecuencias alélicas ...................................................................................69
7.2. Poblaciones comparadas .............................................................................................69
7.3. Distancias genéticas y dendrogramas .........................................................................69
7.4. Análisis de correspondencia .......................................................................................69
7.5. Estimación de haplotipos y desequilibrio de ligamiento.............................................69
8. Soluciones empleadas.................................................................................................................70
RESULTADOS
1. Alelos del sistema HLA encontrados en la población cretense..................................................75
2. Distribución de alelos HLA obtenidos en la población cretense................................................75
2.1. Frecuencias alélicas de los loci HLA de clase I..........................................................75
2.2. Frecuencias alélicas de los loci HLA de clase II ........................................................84
3. Análisis filogenéticos .................................................................................................................88
3.1. Distancias genéticas, dendrogramas y análisis de correspondencia............................88
3.1.1. Loci HLA-A, -B y -DRB1...........................................................................91
3.1.2. Locus HLA-DRB1 ......................................................................................91
3.1.3. Loci HLA-DRB1 y -DQB1 .........................................................................93
4. Estudio de haplotipos bi-locus en la población cretense ..........................................................104
4.1. Desequilibrio de ligamiento entre alelos de los loci HLA de clase I y II .................104
4.1.1. Desequilibrio de ligamiento entre alelos de HLA-A y -B .........................104
4.1.2. Desequilibrio de ligamiento entre alelos de HLA-DRB1 y -DQB1 ..........106
Eduardo Gómez Casado
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