UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID - Biblioteca de la ...

El día de uso, pesar 5 g de resina AG 501-X8 (Biorad)
por cada 100 ml de formamida. Agitar con imán durante
30 minutos. Eliminar la resina filtrada por papel de filtro
normal.
λ Geles de secuenciación
(Gel al 6% de acrilamida y 8.3 M de urea)
Se mezcla:
-50 g de urea
-15 ml de acrilamida al 40%
-10 ml de TBE 10x.
-enrasar a 100 ml con H2O bidestilada.
λ Geles de agarosa al 2%
- Se pesan 6 gramos de agarosa "Sigma tipo II" (Sigma,
St. Louis, MO) .
- Se disuelven completamente por ebullición en 300 ml
de agua bidestilada y 6 ml de tampón TEA 50x.
- Se realiza un enfriamiento rápido bajo el grifo en
constante agitación manual hasta alcanzar una
temperatura de 50ºC aproximadamente.
- Se añade 15 µl de Bromuro de Etidio (10 mg/ml).
- Se agita para homogeneizar la mezcla y se vierte sobre
una bandeja de metacrilato. Previamente se habrá
colocado un "peine" que sirve de molde para crear los
pocillos donde se carga la muestra de DNA.
- El enfriamiento a temperatura ambiente de la mezcla
hace que el gel polimerice por completo.
λ IPTG (Isopropylthio-β-D-galactoside)
Disolver 2 g de IPTG en 8 ml de H2O bidestilada.
Ajustar el volumen a 10 ml y esterilizar por filtración
(0.2 µm). Alicuotar en volúmenes de 1 ml y guardarlas
a -20ºC.
λ Medio LB
Para 1 litro, pesar en un Erlenmeyer:
-10 g de Bacto-Triptona.
-5 g de Bacto-Yeast Extract.
-10 g de NaCl.
Disolver en H2O bidestilada y ajustar el pH a 7.5.
Ajustar el volumen final a 1 litro y autoclavar.
λ NaCl 5M
Disolver 292.2 g de NaCl en 1 litro de H2O bidestilada.
Autoclavar la solución.
λ NaOH 0.4M
Pesar 16 g de NaOH y disolver en 1 litro de H2O
bidestilada.
Eduardo Gómez Casado
λ NH4 + Ac - 2M
Material y Métodos 76
Pesar 154 g de NH4 + Ac - y disolver en 1 litro de H2O
bidestilada.
λ PBS
Disolver 8 g de NaCl, 0.2 g de KCl, 1.44 g de
Na2HPO4, y 0.24 g de KH2PO4 en 800 ml de H2O
bidestilada. Ajustar el pH a 7.4 con HCl y llevar a 1
litro. Esterilizar en autoclave.
λ Placas de siembra
Para 1 litro mezclar:
-Medio LB y 12 g de Bacto-Agar.
-Autoclavar y dejar enfriar a 40ºC aproximadamente.
-Añadir ampicilina (50 µg/µl), X-gal (50 mg/ml) e IPTG
(100 mM).
-Repartir 25 ml de esta mezcla por placa de Petri y dejar
enfriar. Cerrar las placas con Parafilm y guardar a 4ºC
hasta su uso.
λ SDS 10%
Pesar 100 g de dodecílsulfato sódico y disolver en 1
litro de H2O bidestilada mediante agitación magnética.
λ Solución Conservante (SC)
Dimetilsulfóxido al 25% saturado con NaCl.
λ SSPE 20x
Disolver en 1 litro de H2O bidestilada 175.3 g de NaCl
+ 27.6 g de Na2HPO4· H2O + 7.4 g de EDTA.
λ Tampón 0
100 mM TRIS pH 7.5.
150 mM NaCl.
λ Tampón 1
Tampón 0 + 0.1% de Tween 20.
λ Tampón 2
Tampón 0 + 1% de Blocking Reagent (Boehringer
Mannheim). Ajustar a pH 7.5.
λ Tampón 3
100 mM Tris pH 9.5.
100 mM NaCl.
100 mM MgCl2.