UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID - Biblioteca de la ...

8.2.2. Desequilibrio de ligamiento ........................................................................35
8.2.3. Parámetros que miden el desequilibrio de ligamiento.................................36
8.2.4. Origen del desequilibrio de ligamiento .......................................................36
9. Aplicaciones al estudio del sistema HLA...................................................................................37
10. El sistema HLA y la genética comparada de poblaciones........................................................37
II. ANTECEDENTES ANTROPOLÓGICOS, ARQUEOLÓGICOS E HISTÓRICOS DE CRETA ..............39
1. La isla de Creta...........................................................................................................................39
2. Antropología...............................................................................................................................39
3. La civilización minoica ..............................................................................................................40
4. Los pre-micénicos: fin del imperio cretense...............................................................................44
5. Historia contemporánea..............................................................................................................45
6. Antecedentes genéticos y culturales al presente estudio ............................................................46
OBJETIVOS .................................................................................................................................48
MATERIAL Y MÉTODOS
1. Población estudiada....................................................................................................................50
1.1. Selección de individuos ..............................................................................................50
1.2. Recogida de muestras .................................................................................................50
2. Extracción de DNA genómico....................................................................................................50
3. Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)..............................................................................50
3.1. Oligonucleótidos sintéticos.........................................................................................52
3.1.1. Síntesis de oligonucleótidos ........................................................................52
3.1.2. Purificación de oligonucleótidos .................................................................53
3.1.3. Precipitación de oligonucleótidos................................................................53
3.1.4. Medición espectrofotométrica de oligonucleótidos.....................................53
3.1.5. Oligonucleótidos empleados .......................................................................53
4. Amplificación y oligotipaje de los loci HLA de clase I .............................................................53
4.1. Amplificación de los loci HLA de clase I...................................................................53
4.1.1. Locus HLA-A..............................................................................................53
4.1.2. Locus HLA-B..............................................................................................53
4.1.3. Reacciones de amplificación del DNA........................................................54
4.1.4. Controles de amplificación..........................................................................55
4.2. Oligotipaje de los loci HLA de clase I........................................................................55
4.2.1. Oligonucleótidos empleados .......................................................................55
4.2.2. Marcaje no radiactivo de los oligonucleótidos............................................59
4.2.3. Transferencia del producto de PCR a membranas de nylon........................59
4.2.4. Hibridación de las membranas de nylon......................................................59
4.2.5. Exposición y revelado .................................................................................60
4.2.6. Deshibridación de las membranas ...............................................................60
Eduardo Gómez Casado
vii