Volumen 79 Número 1 - Sociedad Argentina de Oftalmología
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incubado y lavado para remover el anticuerpo no<br />
unido. Luego <strong>de</strong>l lavado fue realizada la reacción<br />
<strong>de</strong> color con tetrametilbencidina (TMB, Sigma) y<br />
H2O2, la cual fue frenada con H2SO4 1N antes <strong>de</strong><br />
leer las absorbancias en lector <strong>de</strong> placa a 4 0nm<br />
y comparadas con controles <strong>de</strong> concentración<br />
conocida.<br />
Cuantificación <strong>de</strong> subclases <strong>de</strong> IgG<br />
Las subclases <strong>de</strong> IgG fueron cuantificadas por<br />
ELISA <strong>de</strong> acuerdo a métodos previamente <strong>de</strong>scriptos<br />
[11] con algunas modificaciones. En resumen,<br />
las microplacas fueron preincubadas con<br />
anticuerpo anti Fc subclase γ1, γ2, γ3 y γ4 (Minineph,<br />
Binding Site), lavadas con PBS-Tween<br />
0.0 % y bloqueadas con PBS-Tween-albúmina<br />
0,01%. Posteriormente fue agregado a cada reservorio<br />
100 µl <strong>de</strong> lágrimas en diluciones que<br />
variaron entre 1:100 y 1:1000 <strong>de</strong> acuerdo a la<br />
subclase a estudiar, incubado a 37ºC por 2 horas,<br />
lavado con PBS-Tween e incubado nuevamente<br />
con anti ca<strong>de</strong>na γ total humana <strong>de</strong> carnero marcada<br />
con peroxidasa (Binding Site, Birmingham,<br />
UK). La reacción <strong>de</strong> color fue realizada como se<br />
indicó previamente, y luego <strong>de</strong> frenada fue leída<br />
en lector <strong>de</strong> microplaca a 4 0nm.<br />
Análisis Estadístico<br />
Desviaciones estándar <strong>de</strong> la media fueron calculadas<br />
entre niños infectados y no infectados. El<br />
estudio <strong>de</strong> significación estadística fue calculada<br />
mediante el test t <strong>de</strong> Stu<strong>de</strong>nt.<br />
Resultados<br />
Agente etiológico causante <strong>de</strong> conjuntivitis<br />
En los niños <strong>de</strong> 3- meses sin dacrioestenosis y<br />
con dacrioestenosis congénita asociada a conjuntivitis<br />
se realizaron cultivos bacteriológicos e<br />
inmunomarcaciones con anticuerpos monoclonales<br />
para Herpes simplex 1, Herpes simplex 2,<br />
Chlamydia trachomatis y A<strong>de</strong>novirus.<br />
La tabla I muestra que 41/66 controles no<br />
mostraron infección bacteriana ni viral y que<br />
2 /41 niños <strong>de</strong> este grupo mostró el <strong>de</strong>sarrollo<br />
<strong>de</strong> S.epi<strong>de</strong>rmidis en el cultivo sin presentar estos<br />
últimos infiltrado inflamatorio conjuntival<br />
ni diagnóstico oftalmológico <strong>de</strong> conjuntivitis. A<br />
Primera infancia y dacrioestenosis congénita:<br />
marcada <strong>de</strong>sviación hacia respuesta no protectiva<br />
Th2 frente a ciertas infecciones conjuntivales<br />
este grupo se lo <strong>de</strong>nominó normal (no infectados).<br />
En contraste, los niños con dacrioestenosis<br />
mostraron infección bacteriana o viral en todos<br />
los casos estudiados. Se observó que los cocos<br />
fueron encontrados con mayor frecuencia en<br />
estos niños (1 0/191). La frecuencia <strong>de</strong> las infecciones<br />
con bacilos fue sensiblemente menor<br />
que para cocos (30/191), en sólo 11/191 casos se<br />
encontraron agentes virales. En /10 casos (2<br />
casos <strong>de</strong> Streptococcus, 1 caso <strong>de</strong> Enterobacter,<br />
2 casos <strong>de</strong> Herpes simplex 1) se observó el <strong>de</strong>sarrollo<br />
paralelo <strong>de</strong> S.epi<strong>de</strong>rmidis (resultados no<br />
mostrados). En estas situaciones el S epi<strong>de</strong>rmidis<br />
fue <strong>de</strong>scartado como agente patógeno <strong>de</strong>bido a<br />
ser consi<strong>de</strong>rado no patógeno frente al otro microorganismo<br />
aislado <strong>de</strong> las conjuntivas.<br />
De los resultados observados en estos niños<br />
se <strong>de</strong>cidió dividir a los niños estudiados en cuatro<br />
grupos: normal, cocos, bacilos y virus (Figura 1).<br />
Linfocitos y neutrófilos en secreción lagrimal<br />
<strong>de</strong> los grupos estudiados<br />
La lágrimas <strong>de</strong> los niños <strong>de</strong> 3- meses fueron centrifugada<br />
y el sedimento colocado en portaobjetos<br />
y coloreado con May Grünwald-Giemsa para<br />
analizar la presencia <strong>de</strong> neutrófilos, Linfocitos y<br />
eosinófilos en las secreciones. Los resultados,<br />
clasificados <strong>de</strong> +1 a +4 para cada tipo celular <strong>de</strong><br />
acuerdo a la cantidad <strong>de</strong> células por campo, se<br />
muestran en la Figura 2.<br />
El grupo <strong>de</strong> niños con cocos mostró marcada<br />
presencia <strong>de</strong> neutrófilos cuando se comparó con<br />
el grupo control (P