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Resonancia Magnética Nuclear vectorial (Figura 5.148), toda vez que aquí los acoplamientos escalares no juegan ningún papel. Después de la excitación inicial (Figura 5.148-2) y durante la evolución (tB1B) los vectores de magnetización están en el plano xy (coherencias) y evolucionarán en dicho plano de acuerdo con sus desplazamientos químicos (Figura 5.148-3, υ - offset respecto a 0 la RF). El segundo pulso de 90P P lleva componentes de la magnetización al eje –z (Figura 5.148-4), creando la inversión de poblaciones requerida para observar NOE transitorios que se desarrollan durante el tiempo de mezcla. La fracción de magnetización remanente en el plano xy daría lugar al COSY si se adquiriera inmediatamente. Al final del tiempo de mezcla las magnetizaciones resultantes en el eje z son convertidas en coherencias por 0 el pulso final de 90P P y detectadas durante tB2B. El período de evolución sirve para marcar los desplazamientos químicos. Si partimos de la excitación de un núcleo S, este evolucionará a su frecuencia durante tB1B y su magnetización, invertida por el segundo 0 pulso de 90P P, se puede transferir a un núcleo vecino I si hay relajación cruzada (σBISB) entre los mismos. Esta magnetización transferida se detecta a la frecuencia de I durante tB2B por lo que observamos un pico de cruce (FB1 B- υBSB, FB2B - υBIB) que indica el contacto NOE entre los mismos. La magnetización no transferida durante el período de mezcla da lugar a los picos diagonales. La secuencia es repetida para los diferentes valores de los tiempos de evolución. Generalmente el período de preparación incluye un intervalo de recuperación de las magnetizaciones previo al pulso inicial de 1-3 s. Figura 5.148 Modelo vectorial del experimento NOESY La secuencia NOESY requiere una programación de fases de pulsos y receptor (no mostrada en la Figura 5.147) para eliminar coherencias indeseadas. Como en el NOESY durante el período de mezcla sólo interesa la magnetización longitudinal (p = 0), cualquier coherencia a simple o doble cuanto indeseada puede eliminarse de forma relativamente sencilla. Una alternativa a la programación de fases es el uso de un pulso 224
Resonancia Magnética Nuclear de gradientes durante el período de mezcla. La inhomogeneidad asociada al pulso de gradientes en z (inhomogeneidad a lo largo de z, campos BB0B efectivos que varían linealmente) desfasa y anula toda coherencia SQ o DQ durante este tiempo pero no afecta la magnetización longitudinal, que es la de interés en el NOESY. Las interferencias más difíciles de eliminar son las coherencias a cero cuanto existentes durante el período de mezcla que sean convertidas por el pulso final en coherencias a simple cuanto detectables. El procedimiento más común para eliminar estas interferencias es variar ligeramente en forma aleatoria el tiempo de mezcla de un incremento de tB1B a otro. La magnetización de interés para el NOESY (magnetización longitudinal) es poco sensible a pequeños cambios en τBmB, mientras que las coherencias a cero cuanto (oscilarán de acuerdo al offset y serán muy sensible aún a cambios moderados de τBmB, anulándose efectivamente por este procedimiento. Los espectros NOESY presentan una apariencia similar al COSY, con simetría respecto a la diagonal. Se prefiere su presentación en formato sensible a la fase, donde pueden ajustarse todas las señales como absortivas positivas o negativas. Lo importante es el signo relativo de las señales. Si ajustamos las señales en la diagonal como positivas, el signo de los picos de cruce depende del origen del pico y de la movilidad de la red, como se muestra en la Tabla 5.29. Tabla 5.29 Signo de los picos de cruce en NOESY Signo diagonal Origen pico cruce Signo pico de cruce Positivo NOE positivo (alta movilidad) Negativo (convenio) NOE negativo (baja movilidad) Positivo Intercambio químico Positivo Dos espines en intercambio químico lento (señales independientes) pueden intercambiar magnetización y dar lugar a picos de cruce en el NOESY. En moléculas pequeñas con NOEs positivos los picos de cruce por contacto NOE y por intercambio químico pueden ser distinguidos por su signo. Sin embargo en macromoléculas ambos picos de cruce tienen el mismo signo y no pueden ser diferenciados. Un parámetro importante a definir al diseñar un experimento NOESY es el tiempo de mezcla (ver Tabla 5.30). Este debe por una parte ser lo suficientemente largo para permitir la creación del NOE, pero por otra su duración esta limitada por la relajación longitudinal que tiende a debilitar todas las señales. Si se quieren determinar distancias intenucleares se debe trabajar en la zona lineal inicial de desarrollo del NOE, evitándose además la aparición de picos de cruce falsos por 225
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Resonancia Magnética Nuclear<br />
vectorial (Figura 5.148), toda vez que aquí los acoplamientos escalares no juegan ningún<br />
papel. Después de la excitación inicial (Figura 5.148-2) y durante la evolución (tB1B) los<br />
vectores de magnetización están en el plano xy (coherencias) y evolucionarán en dicho<br />
plano de acuerdo con sus desplazamientos químicos (Figura 5.148-3, υ - offset respecto a<br />
0<br />
la RF). El segundo pulso de 90P P lleva componentes de la magnetización al eje –z (Figura<br />
5.148-4), creando la inversión de poblaciones requerida para observar NOE transitorios<br />
que se desarrollan durante el tiempo de mezcla. La fracción de magnetización remanente<br />
en el plano xy daría lugar al COSY si se adquiriera inmediatamente. Al final del tiempo<br />
de mezcla las magnetizaciones resultantes en el eje z son convertidas en coherencias por<br />
0<br />
el pulso final de 90P P y detectadas durante tB2B. El período de evolución sirve para marcar<br />
los desplazamientos químicos. Si partimos de la excitación de un núcleo S, este<br />
evolucionará a su frecuencia durante tB1B y su magnetización, invertida por el segundo<br />
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pulso de 90P P, se puede transferir a un núcleo vecino I si hay relajación cruzada (σBISB) entre<br />
los mismos. Esta magnetización transferida se detecta a la frecuencia de I durante tB2B por<br />
lo que observamos un pico de cruce (FB1 B- υBSB, FB2B - υBIB) que indica el contacto NOE entre<br />
los mismos. La magnetización no transferida durante el período de mezcla da lugar a los<br />
picos diagonales.<br />
La secuencia es repetida para los diferentes valores de los tiempos de evolución.<br />
Generalmente el período de preparación incluye un intervalo de recuperación de las<br />
magnetizaciones previo al pulso inicial de 1-3 s.<br />
Figura 5.148 Modelo vectorial del experimento NOESY<br />
La secuencia NOESY requiere una programación de fases de pulsos y receptor (no<br />
mostrada en la Figura 5.147) para eliminar coherencias indeseadas. Como en el NOESY<br />
durante el período de mezcla sólo interesa la magnetización longitudinal (p = 0),<br />
cualquier coherencia a simple o doble cuanto indeseada puede eliminarse de forma<br />
relativamente sencilla. Una alternativa a la programación de fases es el uso de un pulso<br />
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