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Resonancia Magnética Nuclear El esquema 1 con excitación y detección de los núcleos de menor γBXB sensibilidad, se toma como referencia de intensidades. , y por lo tanto de menor En el esquema 2, que corresponde al HETCOR, se excita inicialmente el protón cuya coherencia se deja evolucionar y durante el periodo de mezcla se transfiere la coherencia al heteronúcleo que es el detectado directamente. En dependencia del valor de γBXB se obtienen incrementos en sensibilidad respecto a los valores de referencia, que son mostrados a la derecha de la Figura 5.126 (γB1HB ~ 2.5 γB31PB ~4 γB13CB ~ 10 γB15NB). Al esquema 4 le corresponden la mayores sensibilidades relativas. Aquí se excita inicialmente al protón, se crea coherencia de X que evoluciona durante tB1B y finalmente durante la mezcla se vuelve a coherencia protónica que es la detectada directamente. Estos experimentos de detección inversa, que estudiaremos a continuación, representan ganancias sustanciales de sensibilidad respecto al HETCOR que para las correlaciones P PH-P 1 13 1 PC y P PH-P 15 PN son de 8 y 30 veces. Aunque estos valores teóricos de incremento de sensibilidad no sean alcanzados completamente en la práctica, aun un incremento moderado, digamos sólo un factor de 4 para las correlaciones P 13 1 PC-P PH representan una reducción del tiempo de adquisición en 16 veces. Así si un experimento HETCOR requiere por las condiciones de la muestra de un tiempo de adquisición del orden de las horas, puede obtenerse la información equivalente por los métodos inversos en cuestión de minutos. Como ventaja adicional de los experimentos de correlación inversa se tiene que en ellos en FB1B, donde se tiene menor resolución, se despliegan los desplazamientos del heteronúcleo, que normalmente están mucho menos superpuestos que los protónicos. Los experimentos de correlación inversa se han impuesto y son los que se utilizan en la actualidad para las 1 correlaciones X-P PH. Existen 2 técnicas ampliamente utilizadas para la correlación heteronuclear inversa a un enlace, que se conocen por sus siglas en inglés: la correlación heteronuclear múltiple cuántica HMQC (Heteronuclear Multiple Quantum Correlation) y la correlación heteronuclear a simple cuanto HSQC (Heteronuclear Single Quantum Correlation). La información que suministran ambas técnicas es esencialmente la misma, difiriendo sólo en detalles. El experimento HMQC es menos sensible a desajuste en los parámetros de registro, mientras que el HSQC presenta una mayor resolución, ventaja que es explotada particularmente en espectros muy cargados de señales como son los de los biopolímeros. El experimento HSQC es más versátil, existiendo numerosas variantes del mismo, lo que lo ha popularizado en la comunidad química. Ambas técnicas, como métodos inversos, requieren una supresión efectiva de las señales que no provienen de los 12 14 protones unidos al heteronúcleo activo (P PC-H y P PN-H). Esta supresión puede lograrse por 202
Resonancia Magnética Nuclear diferentes métodos. El mas utilizado y efectivo es el los gradientes de campo pulsados (PFGs- Pulsed Field Gradients). 5.9.4 HMQC Este experimento de correlación heteronuclear inverso fue desarrollado por Bax en 1986. El HMQC permite correlacionar protones y carbonos unidos directamente a través de un enlace con elevada sensibilidad. La secuencia del HMQC se muestra en la Figura 5.130. La programación de fases de pulsos y receptor mostrada es para eliminar las señales provenientes de los protones 12 unidos a P PC. Figura 5.130 Secuencia de pulsos y CTC del HMQC La secuencia básica del HMQC es relativamente simple conteniendo sólo 4 pulsos de RF. Ilustraremos su funcionamiento para un grupo CH, tal como hicimos en el HETCOR. 0 1 Preparación.- la secuencia comienza con un pulso de 90P P(P PH) que genera coherencia protónica 1 seguida de la evolución de la magnetización protónica en un intervalo Δ = 1/2P PJBCHB (~3.3ms) para poner dicha coherencia en antifase con respecto al acoplamiento con el carbono vecino. Como en el INEPT está magnetización en antifase puede transferirse a la pareja en acoplamiento mediante 0 13 un pulso. El pulso de 90P P(P PC) transfiere coherencia al carbono-13 creando lo que se conoce como coherencia a múltiple cuanto (MQC), donde hay magnetización transversal de ambos núcleos. 203
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diferentes métodos. El mas utilizado y efectivo es el los gradientes de campo pulsados (PFGs-<br />
Pulsed Field Gradients).<br />
<strong>5.9</strong>.4 HMQC<br />
Este experimento de correlación heteronuclear inverso fue desarrollado por Bax en 1986. El<br />
HMQC permite correlacionar protones y carbonos unidos directamente a través de un enlace con<br />
elevada sensibilidad. La secuencia del HMQC se muestra en la Figura 5.130. La programación de<br />
fases de pulsos y receptor mostrada es para eliminar las señales provenientes de los protones<br />
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unidos a P<br />
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Figura 5.130 Secuencia de pulsos y CTC del HMQC<br />
La secuencia básica del HMQC es relativamente simple conteniendo sólo 4 pulsos de RF.<br />
Ilustraremos su funcionamiento para un grupo CH, tal como hicimos en el HETCOR.<br />
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Preparación.- la secuencia comienza con un pulso de 90P P(P PH) que genera coherencia protónica<br />
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seguida de la evolución de la magnetización protónica en un intervalo Δ = 1/2P PJBCHB (~3.3ms) para<br />
poner dicha coherencia en antifase con respecto al acoplamiento con el carbono vecino. Como en<br />
el INEPT está magnetización en antifase puede transferirse a la pareja en acoplamiento mediante<br />
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un pulso. El pulso de 90P P(P<br />
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como coherencia a múltiple cuanto (MQC), donde hay magnetización transversal de ambos<br />
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