USO DE COMPUESTOS PARA ELEVAR LA ACTIVIDAD DE ... - Inicio

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774), en una cantidad de 150 mg/kg, intraperitonealmente, aumentó la proporción de PDH en su forma activa (Vary
et al. (1988) Circ. Shock 24, 3-18), y después de la administración repetida dio como resultado una disminución
significativa de la glucosa en plasma (Evans y Stacpoole (1982) Biochem. Pharmacol. 31, 1295-1300).
Se trataron grupos de ratas (intervalo de peso de 140-180 g) con única dosis o con dosis múltiples del compuesto de
interés, mediante cebado oral en un vehículo apropiado. Un grupo de control de ratas se trató solamente con vehículo.
A un tiempo fijo después de la administración final del compuesto, los animales se anestesiaron terminalmente, los
tejidos se retiraron y se congelaron en nitrógeno líquido. Para la determinación de la actividad de PDH, se disgregaron
muestras de músculo en nitrógeno líquido antes de la homogenización, mediante un estallido de 30 segundos en un
homogeneizador Polytron, en 4 volúmenes de un tampón que contiene 40 mM de fosfato de potasio, pH 7,0, 5 mM
de EDTA, 2 mM de DTT, 1% de Triton X-100, 10 mM de piruvato sódico, 10 µM de cloruro de fenilmetilsulfonilo
(PMSF) y 2 µg/ml de cada una de leupeptina, pepstaína A y aprotinina. Los extractos se centrifugaron antes del ensayo.
Una porción del extracto se trató con PDH fosfatasa, preparada a partir de corazón de cerdo por el método de Siess y
Wieland (Eur. J. Biochem (1972) 26, 96): 20 µl de extracto, 40 µl de fosfatasa (dilución 1:20), en un volumen final de
125 µl que contiene 25 mM de cloruro de magnesio, 1 mM de cloruro de calcio. La actividad de la muestra no tratada
se compara con la actividad del extracto desfosforilado así preparado. La actividad de PDH se analiza por el método
de Stansbie et al., (Biochem. J. (1976) 154, 225). Se incubaron 50 µl de extracto con 0,75 mM de NAD, 0,2 mM de
CoA, 1,5 mM de pirofosfato de tiamina (TPP) y 1,5 mM de piruvato sódico en presencia de 20 µg/ml de ácido p(paminofenilazo)benceno-sulfónico
(AABS) y 50 mU/ml de arilamina transferasa (AAT) en un tampón que contiene 100
mM de tris(hidroximetil)-aminometano, 0,5 mM de EDTA, 50 mM de fluoruro de sodio, 5 mM de 2-mercaptoetanol y
1 mM de cloruro de magnesio, pH 7,8. La AAT se prepara a partir de hígados de pichón por el método de Tabor et al.
(J. Biol. Chem. (1953) 204, 127). La velocidad de formación de acetil CoA se determina por la velocidad de reducción
de AABS que se indica por una disminución de la densidad óptica a 460 nm.
Se prepararon muestras hepáticas por un método esencialmente similar, excepto que se excluye piruvato de sodio
del tampón de extracción, y se añade a la incubación con fosfatasa hasta una concentración final de 5 mM.
El tratamiento de un animal con un compuesto activo da como resultado un aumento en la actividad del complejo
de PDH en tejidos. Esto se indica por un aumento en la cantidad de PDH activa (determinada por la actividad de
extracto no tratado como un porcentaje de la actividad total de PDH en el mismo extracto después del tratamiento con
fosfatasa).
Según un aspecto adicional de la invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un
compuesto de la fórmula (I), como se define aquí anteriormente, o una sal farmacéuticamente aceptable o un éster
hidrolizable in vivo del mismo, en asociación con un excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable.
Según un aspecto adicional de la invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un
compuesto de la fórmula (I’), como se define aquí anteriormente, o una sal farmacéuticamente aceptable o un éster
hidrolizable in vivo del mismo, en asociación con un excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable.
La composición puede estar en una forma adecuada para administración oral, por ejemplo como un comprimido o
cápsula, para inyección parenteral (incluyendo intravenosa, subcutánea, intramuscular, intravascular o por infusión),
por ejemplo como una disolución estéril, suspensión o emulsión, para administración tópica, por ejemplo como un
ungüento o crema, o para administración rectal, por ejemplo como un supositorio. En general, las composiciones
anteriores se pueden preparar de manera convencional usando excipientes convencionales.
Las composiciones de la presente invención se presentan ventajosamente en forma de dosificación unitaria. El
compuesto se administrará normalmente a un animal de sangre caliente a una dosis unitaria dentro del intervalo de 5-
5000 mg por metro cuadrado de superficie corporal del animal, es decir, aproximadamente 0,1-100 mg/kg. Se prevé
una dosis unitaria en el intervalo de, por ejemplo, 1-100 mg/kg, preferiblemente 1-50 mg/kg, y esto normalmente
proporciona una dosis terapéuticamente eficaz. Una forma de dosificación unitaria, tal como un comprimido o cápsula,
habitualmente contendrá, por ejemplo, 1-250 mg de ingrediente activo.
Según un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un compuesto de la fórmula (I), o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo, como se define anteriormente aquí, como se define aquí anteriormente, para
uso en un método de tratamiento del cuerpo humano o animal mediante terapia.
Según un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un compuesto de la fórmula (I’), o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo, como se define anteriormente aquí, como se define aquí anteriormente, para
uso en un método de tratamiento del cuerpo humano o animal mediante terapia.
Se ha encontrado que los compuestos de la presente invención elevan la actividad de PDH, y por lo tanto son de
interés por sus efectos reductores de la glucosa en sangre.
Una característica adicional de la presente invención es un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente
aceptable del mismo, para uso como un medicamento, convenientemente un compuesto de fórmula (I), o una sal
farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso como un medicamento para producir una elevación de la actividad
de PDH en un animal de sangre caliente, tal como un ser humano.
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