USO DE COMPUESTOS PARA ELEVAR LA ACTIVIDAD DE ... - Inicio

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ES 2 217 754 T3
Un grupo protector adecuado para un grupo fenol es, por ejemplo, un éter alquílico, por ejemplo metílico, un éter
silílico, por ejemplo éter trimetilsilílico o éter t-butildimetilsilílico, un éter oxialquílico, por ejemplo éter metoximetílico
o éter metoxietoximetílico, o un éster, por ejemplo acetato o benzoato. Las condiciones de desprotección para los
grupos protectores anteriores variarán necesariamente con la elección del grupo protector. De este modo, por ejemplo,
un éter alquílico se puede eliminar por tratamiento con un reactivo adecuado, tal como yodotrimetilsilano, o con un
ácido de Lewis adecuado, tal como tribromuro de boro. Como alternativa, un éter silílico se puede eliminar mediante
hidrólisis catalizada por ácidos o por un ion fluoruro. Como alternativa, los éteres oxialquílicos se pueden eliminar por
tratamiento con un ácido adecuado, tal como ácido acético o ácido clorhídrico. Como alternativa, los ésteres se pueden
eliminar mediante hidrólisis con un ácido adecuado o con una base adecuada.
Un grupo protector adecuado para un grupo carboxi es, por ejemplo, un grupo esterificante, por ejemplo un grupo
metilo o un grupo etilo, que se puede eliminar, por ejemplo, mediante hidrólisis con una base, tal como hidróxido
de sodio, o, por ejemplo, un grupo t-butilo, que se puede eliminar, por ejemplo, por tratamiento con un ácido, por
ejemplo un ácido orgánico tal como ácido trifluoroacético, o, por ejemplo, un grupo bencilo, que se puede eliminar,
por ejemplo, mediante hidrogenación sobre un catalizador, tal como paladio sobre carbón.
Los grupos protectores se pueden eliminar en cualquier etapa conveniente en la síntesis, usando técnicas convencionales
bien conocidas en la técnica química.
En los casos en los que los compuestos de fórmula (I) sean suficientemente básicos o ácidos para formar sales de
ácidas o básicas estables, puede ser apropiada la administración del compuesto como una sal, y las sales farmacéuticamente
aceptables se pueden obtener por métodos convencionales tales como los descritos a continuación. Ejemplos
de sales adecuadas farmacéuticamente aceptables son sales de adición de ácidos orgánicos formadas con ácidos que
forman un anión fisiológicamente aceptable, por ejemplo, tosilato, metanosulfonato, acetato, tartrato, citrato, succinato,
benzoato, ascorbato, α-cetoglutarato, y α-glicerofosfato. También se pueden formar sales inorgánicas adecuadas,
tales como sulfato, nitrato, e hidrocloruro.
Las sales farmacéuticamente aceptables se pueden obtener usando procedimientos estándares bien conocidos en
la técnica, por ejemplo haciendo reaccionar un compuesto suficientemente básico de fórmula (I) (o su éster) con un
ácido adecuado, dando un anión fisiológicamente aceptable. También es posible, con la mayoría de los compuestos de
la invención, obtener una sal correspondiente de metal alcalino (por ejemplo, sodio, potasio, o litio) o de metal alcalinotérreo
(por ejemplo, calcio) tratando un compuesto de fórmula (I) (y, en algunos casos, el éster) con un equivalente de
un hidróxido o alcóxido (por ejemplo, el etóxido o metóxido) de un metal alcalino o de un metal alcalino- térreo en
un medio acuoso, seguido de técnicas de purificación convencionales.
Los ésteres rompibles in vivo de compuestos de a invención se pueden obtener acoplándolos con un ácido carboxílico
farmacéuticamente aceptable o con derivado activado del mismo. Por ejemplo, el acoplamiento se puede llevar
a cabo tratando un compuesto de la fórmula (I) con un cloruro de ácido apropiado (por ejemplo, cloruro de acetilo,
cloruro de propionilo, o cloruro de benzoilo), o con un anhídrido de ácido (por ejemplo, anhídrido acético, anhídrido
propiónico, o anhídrido benzoico), en presencia de una base adecuada, tal como trietilamina. Los expertos en la técnica
apreciarán que se conocen en la técnica otros ácidos carboxílicos adecuados (incluyendo sus derivados activados)
para la formación de ésteres rompibles in vivo, y aquéllos también están destinados a ser incluidos en el alcance de la
invención. También se pueden emplear de forma útil catalizadores tales como 4-dimetilaminopiridina.
Muchos de los intermedios definidos aquí son nuevos, y se proporcionan como una característica adicional de la
invención.
La identificación de compuestos que elevan la actividad de PDH es el objeto de la presente invención. Estas
propiedades se pueden determinar, por ejemplo, usando uno o más de los procedimientos explicados a continuación:
(a) Elevación in vitro de la actividad de PDH
Este ensayo determina la capacidad de un compuesto de ensayo para elevar la actividad de PDH. El ADNc, que
codifica PDH quinasa, se puede obtener mediante Reacción en Cadena de Polimerasa (PCR), y clonado subsiguiente.
Éste se puede expresar en un sistema de expresión adecuado para obtener un polipéptido con actividad de PDH quinasa.
Por ejemplo, se encontró que PDHquinasaII de rata (rPDHKII), obtenida por expresión de proteína recombinante en
Escherichia coli (E. coli), desarrolla actividad de PDH quinasa.
En el caso de rPDHKII (número de acceso Genbank U10357), se aisló mediante PCR un fragmento de 1,3kb que
codifica la proteína, a partir de ADNc de hígado de rata, y se clonó en un vector (por ejemplo, pQE32 - Quiagen
Ltd.). El constructo recombinante se transformó en E. coli (por ejemplo, M15pRep4 - Quiagen Ltd.). Los clones
recombinantes se identificaron, se aisló ADN plásmido, y se sometió a un análisis de secuencia de ADN. Para el
trabajo de expresión se seleccionó un clon, que tuvo la secuencia de ácidos nucleicos esperada. Los detalles de los
métodos para el ensamblaje de moléculas de ADN recombinante, y la expresión de proteínas recombinantes en los
sistemas bacterianos, se puede encontrar en textos estándares, por ejemplo Sambrook et al, 1989, Molecular Cloning
- A Laboratory Manual, 2ª edición, Cold Spring Harbour Laboratory Press. Se pueden clonar y expresar de manera
similar otras PDH quinasas conocidas para uso en ensayos.
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