detección de toxinas paralizante, diarreica y amnésica en mariscos ...

Cienc. Tecnol. Mar, 27 (2): 33-42, Detección 2004
de toxinas en mariscos de la XI Región
DETECCIÓN DE TOXINAS PARALIZANTE, DIARREICA Y AMNÉSICA EN MARISCOS DE LA XI
REGIÓN POR CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN (HPLC)
Y BIOENSAYO EN RATONES
DETECTION OF PSP, DSP AND ASP IN SHELLFISH COLLECTED ON XI REGION OF CHILE BY HPLC-
FLUOROMETRY AND MOUSE BIOASSAY
ORIALIS VILLARROEL G.
Subdepartamento Laboratorios del Ambiente
Instituto de Salud Pública de Chile
Casilla 48, Santiago, Chile.
e-mail:ovillarr@ispch.cl
Recepción: 20 de noviembre de 1999 – Versión corregida aceptada: 23 de diciembre de 2003.
RESUMEN
El objetivo de este trabajo fue determinar el nivel tóxico presente en los mariscos de la Región de
Aysén, tanto para la toxina paralizante (VPM) como para la toxina diarreica (VDM), mediante el bioensayo
de ratón. Además, investigar la presencia de toxina amnésica (VAM) por cromatografía líquida de alta
resolución (HPLC). También se identificó la presencia de saxitoxina (STX), neosaxitoxina (neoSTX),
gonyautoxinas (GTX1-4), ácido okadaico (OA) y dinophysis toxina-1 (DTX-1) por HPLC en los mariscos
recolectados. Se detectó toxina paralizante en todas las estaciones del área geográfica estudiada por
HPLC. Además, se detectó en niveles bajos la toxina diarreica por HPLC solamente en la estación Nº 5
(Melinka). No se encontró toxina amnésica en ninguna de las muestras estudiadas. El perfil tóxico de la
toxina paralizante muestra la presencia de STX, neoSTX y GTX1-4.
Palabras claves: Marea roja, toxinas marinas, cromatografía líquida de alta resolución, bioensayo.
ABSTRACT
The objective of the present work was to determine the toxicological status of the amnesic, diarrheic
and paralytic shellfish poisons in the XI Region of Chile. This was achieved with the mouse bioassay, the
only international method accepted to certify shellfish wholeness for human consumption. Furthermore,
the presence and quantities of saxitoxin (STX), gonyautoxins (GTX1-4), okadaic acid (OA) and dinophysistoxin-
1 (DTX-1) was determined by high performance liquid chromatographic (HPLC) method in different shellfish
species from the Aysén Region. Our HPLC results show that paralytic toxin was found in shellfish from all
stations studied. Diarrheic toxin was found only in station No 5 (Melinka) but in low quantities, and amnesic
toxin was not detected at all. Paralytic toxin profile shows presence of STX, neoSTX and GTX1-4.
Key words: Red tide, marine toxins, high performance liquid chromatography, bioassay.
33

34 Revista Ciencia y Tecnología del Mar, Vol. 27 (2) - 2004
INTRODUCCIÓN
Marea roja o floraciones algales nocivas se
refiere al fenómeno de proliferación de microalgas
nocivas en el fitoplancton. Conocer los perfiles
de los venenos presentes en las áreas afectadas
es de vital importancia epidemiológica, dado que
las toxinas paralizantes y diarreicas se han presentado
en la X, XI y XII Regiones del país ocasionando
numerosas intoxicaciones masivas por el
consumo de mariscos contaminados.
Toxina paralizante: se presentó por primera
vez en el país en 1972, en la Región de
Magallanes y desde 1993 en la Región de Aysén.
Es producido por Alexandrium catenella aunque
últimamente también se ha citado en el país a
Alexandrium ostenfeldi (Lembeye, G; Uribe, J. C.).
El mecanismo de acción de las toxinas paralizantes
consiste en el bloqueo selectivo de los
canales de sodio, lo que impide el flujo necesario
de iones sodio para transmitir el potencial de acción
de la membrana.
La intoxicación por PSP en el ser humano, produce
desde un ligero adormecimiento u hormigueo
en la región peribucal hasta una parálisis total y
muerte por insuficiencia respiratoria, siendo lo
más frecuente la sensación de picazón alrededor
de los labios, de las encías y de la lengua al cabo
de los primeros 5 minutos.
En los casos moderados o graves, esta sensación
en un período de 4 a 6 horas se extiende
a los brazos, piernas y cuello de manera que es
necesario un gran esfuerzo para realizar movimientos.
En los casos mortales el paciente suele fallecer
debido a parálisis respiratoria al cabo de 2
a 12 horas después de haber ingerido el alimento
contaminado.
El tratamiento consiste en la administración
de suero glucosado al 10%. Adicionalmente, se
aconseja la administración de diuréticos con excepción
de aquellos pacientes en que su uso está
contraindicado. En los casos de mayor gravedad
se requiere de ventilación mecánica permanente.
Toxina diarreica de los moluscos se presentó
por primera vez en la X Región durante 1979 y,
posteriormente, en la XI Región en febrero de 1984
causando numerosos casos de diarrea en la población
siendo el agente causal Dinophysis acuta,
posteriormente reapareció en 1991 provocando la
intoxicación de aproximadamente 150 personas
por consumo de choritos, permaneciendo en forma
endémica hasta la fecha en la Región de Aysén.
En Chile se pueden citar además de D. acuta,
a D. acuminata y D. rotundata en la bahía de Concepción;
D. argus, D. caudata y D. operculata en
el archipiélago de Juan Fernández. Últimamente
también se ha detectado D. acuminata en la XI
Región. D. acuta es el organismo más frecuente
en nuestro país.
El mecanismo de acción del ácido okadaico
y sus derivados no ha sido completamente dilucidado
hasta ahora, pero se sabe que son
potentes inhibidores de las proteínas fosfatasas,
enzimas que revierten los efectos de
las proteínas quinasas, removiendo grupos
fosfatos.
Luego de la ingestión de mariscos contaminados
con toxina diarreica, los síntomas en humanos
comienzan entre los 30 minutos y las 12 horas,
con un promedio de 4 horas. Una vez que se
presentan éstos, el estado puede durar por 3 días.
Los síntomas más frecuentes son: escalofríos,
dolor abdominal difuso, náuseas, vómitos, diarrea
abundante y deshidratación.
El tratamiento es sintomático, se deben tomar
las siguientes medidas: Si no se presenta
vómito, evacuar el veneno del estómago induciendo
el vómito o efectuar un lavado gástrico con
suero fisiológico. En caso de dolor, administrar
antiespasmódicos inyectables.
Aparte de las consecuencias inmediatas de
la intoxicación por toxina diarreica, se ha reportado
que el ácido okadaico y DTX-1 son potentes
promotores de tumores.
La yessotoxina (YTX) producida por Protoceratium
reticulatum es una sustancia polietérea
disulfatada, está clasificada en el grupo de las
diarreicas a pesar que no tiene efectos diarreicos
ya que no inhibe la proteína fosfatasa, (en la
actualidad se está reevaluando esta clasificación).
Aunque el mecanismo de acción no está
totalmente dilucidado, estudios con linfocitos humanos
sugiere que actúa sobre los canales de
calcio celulares, aumentando los niveles de estos
iones. Las dosis letales en ratón oscilan entre
100 y 400 µg/kg siendo el corazón el órgano
diana.
Las YTXs presentan menor toxicidad por vía
oral por lo que la legislación europea (Decisión
2002/225/CEE) permite un nivel de tolerancia
superior al establecido para el resto de las toxinas
liposolubles, quedando el nivel máximo aceptado
en 1 mg/kg de cuerpo entero o cualquier
parte comestible por separado del marisco.

Toxina amnésica. El ácido domoico, también
conocido como toxina amnésica es producido
por las diatomeas del plancton marino
Pseudonitzschia multiserie, Pseudonitzschia
australis y Pseudonitzschia pseudodelicatissima.
Cuando esta toxina, es consumida a través de
los moluscos por el ser humano, produce un cuadro
de intoxicación que puede causar problemas
gastrointestinales y neurológicos como pérdida
de memoria de corto tiempo, ya que daña las
células del hipocampo y en aquellos casos de
intoxicaciones más graves, ha ocasionado la
muerte.
Los objetivos de este trabajo son:
* Determinar el nivel tóxico de los mariscos tanto
para la toxina paralizante como diarreica,
utilizando el bioensayo en ratón.
* Investigar la presencia de toxina amnésica por
HPLC.
* Identificar y cuantificar la presencia de
saxitoxina, neosaxitoxina y gonyautoxina 1, 2,
3 y 4 (VPM); ácido okadaico y dinofisistoxina-
1 (VDM) por HPLC en los mariscos recolectados
en la Región de Aysén.
MATERIAL Y MÉTODOS
Las muestras se recolectaron durante el crucero
oceanográfico Cimar 4 - Fiordos realizado en
los fiordos y canales comprendidos entre la Boca
del Guafo y el estero Elefantes (XI Región), a bordo
del AGOR “Vidal Gormaz” embarcación de la
Armada de Chile, entre el 25 de febrero y el 9 de
marzo de 1999 (Fig. 1).
Se muestrearon 8 de las 11 estaciones programadas.
Las muestras fueron recolectadas por
buzos mariscadores (Tabla I).
Los métodos utilizados fueron:
Toxina paralizante:
a) Bioensayo en ratón (A.O.A.C., 1984). Este método
consiste en inyectar intraperitonealmente
1 ml del sobrenadante de un extracto ácido de
moluscos bivalvos a cada uno de 3 ratones de
la cepa CF-1 de 19 a 21 gramos de peso y la
determinación del tiempo de muerte. La sensibilidad
de la colonia de ratones usada en el
ensayo debe determinarse calculando el Factor
de Conversión (CF) después de la inyección
intraperitoneal del estándar de saxitoxina (STX).
El tiempo de muerte se convierte a unidad ra-
Detección de toxinas en mariscos de la XI Región
35
tón (UR) empleando la Tabla de Sommer y la
concentración de toxina se calcula usando el
Factor de Conversión, asumiendo que la toxina
corresponde a saxitoxina. El análisis se considera
positivo si 2 de los 3 ratones inyectados
mueren en el lapso de 1 hora con los síntomas
característicos de la intoxicación.
El método es cuantitativo y el límite de detección
en nuestro Laboratorio es de 32 µg STX
eq/100 g de carne. El estándar de STX es
suministrado por la FDA de EE.UU.
Valores superiores a 80 µg/100 g se considera
peligroso y no apto para el consumo.
b) Cromatografía líquida de alta resolución
(Oshima et al., 1995). Las toxinas son
extraídas en medio ácido y a ebullición,
centrifugadas y purificadas a través de
cartridge Sep-pak C18. Posteriormente el extracto
se analiza por HPLC provisto de un detector
de fluorescencia mediante derivatización
post columna. Las condiciones cromatográficas
fueron: columna RP C-8 (250 mm-4),
T° columna: 30 °C, T° de reactor: 78 °C, flujo
fase móvil: 0,8 ml/min, flujo de oxidante y
acidificante: 0,3 ml/min, λ de Ex: 330 nm y
de Em: 390 nm. Fase móvil para STX y NeoSTX:
1-heptanosulfonato de sodio 2 mM en fosfato
de amonio 30 mM, pH 7,1: acetonitrilo
(100+3) y para GTX1-GTX4: 1-heptanosulfonato
de sodio 2mM en fosfato de amonio
10 mM, pH 7,1. Como reactivo oxidante se
usó ácido periódico 7 mM en buffer de fosfato
de potasio 50 mM, pH 9 y como reactivo
acidificante el ácido acético 0,5 M.
Toxina diarreica:
a) Bioensayo en ratón, (Yasumoto, 1984 modificado).
Este procedimiento es aplicable a
los análisis de ácido okadaico (AO) y
dinofisistoxinas (DTXs), pectenotoxinas
(PTXs) y yesotoxinas (YTXs) en moluscos
bivalvos. Consiste en homogeneizar el
hepatopáncreas de mariscos y extraer con tres
volúmenes de acetona, evaporar y luego eliminar
la toxina paralizante por partición en
diclorometano, evaporar este último solvente
y resuspender en tween 60, luego inyectar 1
mL intraperitoneal a cada uno de los tres ratones
de 18 a 20 gramos de peso. El
bioensayo se considera positivo cuando se
produce la muerte de al menos 2 de 3 ratones
inyectados en un período menor o igual a
24 horas tras la inyección. El límite de detección
es 0,8 µg de AO eq/g de hepatopáncreas.

36 Revista Ciencia y Tecnología del Mar, Vol. 27 (2) - 2004
44°
45°
46°
47°
47 S
1
2
Canal Darwin
37
74° W 73°
3 4
Estero Elefantes
Golfo Corcovado
5
10
11
I. Meninea
12
13
36
35
33
27
34
26
23
24
25
9
8
6
7
17 17a
18
19
16
Seno Aysén
30 Estero
Quitralco
Estero
Cupquelán
Fig. 1: Posición de las estaciones de muestreo oceanográfico en el área de estudio.
Fig. 1: Locations of oceanographic sampling stations in the study area.
32
14
15
22
29
31
B.Tic-toc
Canal Jacaf
P. Puyuguapi
P. Cisnes
Canal Puyuguapi
20° S
30°
40°
53 46’
o
o
60 46’
o
80 05’
Isla San Félix
21
o
105 20’
o
109 20’
P. Chacabuco
21a
Isla San Ambrosio
Isla Salas y Gómez
Arch. Juan Fernández
I. Alejandro
Selkirk
Isla de Pascua
I. Robinson Crusoe
o
78 49’
90°W 53° W
60°
Territorio Chileno Antártico
80° W 60° W
60°
26 27’
33 37’
26 27’
o
o
o
20°
30°
40°
50°

Tabla I. Procedencia y recursos muestreados.
Table I. Origin of shellfish samples collected.
Los síntomas que presenta el ratón debido a
las YTXs mediante inyección intraperitoneal son
similares a VPM con un tiempo de supervivencia
por encima de 20 minutos, preferentemente
entre 40 min y 5 h.
b) Cromatografía líquida de alta resolución para
detectar AO y DTXs (Lee et al., 1989). El método
consiste en una extracción metanólica
de la toxina presente en el hepatopáncreas
del molusco, derivatización con 9-7antryldiazometano
(ADAM) y posterior separación
y cuantificación por cromatografía líquida de
alta resolución (HPLC) utilizando detector de
fluorescencia.
Las condiciones cromatográficas fueron: columna
RP C-18 (4 µm, 250 mm x 4 mm); λ
excitación 365 y λ emisión 415 nm; fase móvil
acetonitrilo-agua (75+25); flujo 1,1 mL/
min; temperatura 40 ºC.
Los estándares fueron adquiridos en Wako
Chemicals USA y derivatizados de la misma
forma que las muestras.
c) Cromatografía líquida de alta resolución para
detectar YTXs (Yasumoto & Takizawa). Con-
Detección de toxinas en mariscos de la XI Región
Nº Estación Fecha Localidad Coordenadas Recurso
5 27.02.99 Melinka 43° 54’ S-73° 48’ W almejas
locos
cholgas
picorocos
18 01.03.99 Punta Tortuga 45° 20’ S-73° 06’ W cholgas
choritos
27 03.03.99 Islotes Ruiz – Punta Leopardo 46° 30’ S-73° 51’ W cholgas
choritos
30 04.03.99 Estero Quitralco 45° 46’ S-73° 32’ W cholgas
choritos
choros
ostiones (músculo)
ostiones (vísceras)
locos (músculo)
locos (vísceras)
33 04.03.99 Puerto Harchy 45° 43’ S-73° 53’ W choritos
37 04.03.99 Boca Estero Duble Norte 45° 29’ S-73° 18’ W choritos
locos (músculo)
locos (vísceras)
35 05.03.99 Punta San Emilio, Canal Darwin 45° 27’ S-73° 47’ W choritos
almejas
locos (músculo)
locos (vísceras)
11 05.03.99 Islote El Morro 45° 09’ S-73° 38’ W choritos
locos (músculo)
locos (vísceras)
37
siste en extraer la YTX desde la glándula digestiva
(1 g) con metanol/agua (8+2), limpieza
por sep-pak y derivatización con DMEQ-TAD.
El análisis se realiza mediante detector de fluorescencia,
observándose en el cromatograma
dos peaks debido a la formación de dos
epímeros producidos por el reactivo de
derivatización.
El estándar de YTX y el reactivo DMEQ-TAD
fueron proporcionados por Dr. T. Yasumoto.
Toxina amnésica:
Método HPLC: Consiste en extraer el ácido
domoico de los mariscos con metanol (1+1),
siguiendo el procedimiento descrito por
Quilliam et al. (1995).
El equipo utilizado fue un HPLC con detector
de arreglo de diodos, λ 242. Las condiciones
de trabajo fueron: columna RP C18 de 250 x
4,6 mm D. I., 40 ºC, fase móvil acetonitrilo:
0,1% ácido trifluoroacético (15+85) y volumen
de inyección 20 µl.
Se separó cromatográficamente el ácido
domoico del triptofano (aminoácido presente

38 Revista Ciencia y Tecnología del Mar, Vol. 27 (2) - 2004
en los mariscos) ya que éste puede dar falsos
positivos.
Este método permite confirmar la toxina ya
que el detector arreglo de diodos nos muestra
el espectro de absorbancia del compuesto
y además nos indica su pureza.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Como consecuencia del brote ocurrido en enero
de 1991 el Servicio de Salud Aysén y el Instituto
de Salud Pública de Chile iniciaron un programa
de vigilancia de la toxina diarreica en
moluscos bivalvos en todo el litoral de la región,
principalmente de los recursos choritos, cholgas
y almejas, detectándose en mayo de 1992 la
presencia de la toxina paralizante, hecho no descrito
hasta ese momento en Aysén. Los resultados
obtenidos hasta esta fecha nos indicaban
concentraciones globales de estas toxinas (método
bioensayo en ratón), sin embargo ante la
adquisición de un cromatógrafo líquido de alta
Tabla II. Resultados
Table II. Results.
resolución (HPLC) e implementación de nuevas
técnicas analíticas, el laboratorio tiene la oportunidad
de conocer tanto las concentraciones
como los perfiles de las toxinas presentes en
base a los estándares disponibles en el Instituto
de Salud Pública de Chile. Considerando estos
antecedentes se estimó conveniente efectuar
este estudio para conocer la realidad de las
toxinas durante el período en que se realizó este
crucero.
El crucero se realizó entre el 25 de febrero
al 9 de marzo de 1999 en el área geográfica
donde frecuentemente se detecta la presencia
de las toxinas paralizantes y diarreicas y contempló
8 estaciones de muestreo entre la Boca
del Guafo y el estero Elefantes de la XI Región
(Fig. 1). Los resultados obtenidos para la
cuantificación del VPM y VDM por bioensayo
en ratones y VAM por HPLC, se muestran en la
Tabla II.
Veneno Paralizante de Moluscos (VPM) por
bioensayo en ratón: En Chile como en la mayor
Nº Estación Localidad Recurso VPM (g/100g)
bioensayo
VDM
bioensayo
5 Melinka almejas ND ND ND
locos ND ND ND
cholgas ND ND ND
picorocos ND ND ND
18 Punta Tortuga cholgas 36 ND ND
choritos ND ND ND
27 Islotes Ruiz – Punta Leopardo cholgas ND ND ND
choritos ND ND ND
30 Estero Quitralco cholgas 450 ND ND
choritos 158 ND ND
VAM
HPLC
choros 52 ND ND
ostiones
(músculo)
35 - ND
ostiones
(vísceras)
42 ND ND
locos (músculo) 41 - ND
locos (vísceras) 55 ND ND
33 Puerto Harchy choritos 129 ND ND
37 Boca Estero Dublé Norte choritos 165 ND ND
locos (músculo) 42 - ND
locos (vísceras) 35 ND ND
35 Punta San Emilio, Canal Darwin choritos 142 ND ND
almejas 54 ND ND
locos (músculo) 35 - ND
locos (vísceras) ND ND ND
11 Islote El Morro choritos 60 ND ND
locos (músculo) 33 - ND
locos (vísceras) ND ND ND

parte de los países que realizan control de toxinas
VPM en los mariscos, se utiliza el bioensayo
en ratón.
Todas las estaciones desde el paralelo 45°
09’ S al sur, excepto la estación Nº 27 Islote
Ruiz-Punta Leopardo (46° 30’ S - 73° 51’ W)
ubicada en el extremo sur del estero Elefantes,
presentaron toxina paralizante por bioensayo en
ratón.
La concentración más alta de VPM correspondió
al estero Quitralco (45° 46’ S - 73° 32’
W) con 450 µg/100 g de mariscos en el recurso
cholguas. Se observó que en la misma estación
el recurso más contaminado fue cholga
(Aulacomya ater) con 450 µg/100 g, seguida
de chorito (Mytilus chilensis) con 158 µg/100
g, choros (Choromytilus chorus) con 52 µg/100
g, locos (Concholepas concholepas) con 41 µg/
100 g de músculo) y ostiones (Argopecten
purpuratus) con 35 µg/100 g de músculo.
En las estaciones Nº 33, 35 y 37 solamente
los choritos contenían concentraciones de
toxina paralizante por sobre los 80 µg/100 g,
límite máximo establecido en nuestra legislación.
La estación Nº 5 correspondiente a la localidad
de Melinka no presentó VPM ni VDM por
bioensayo en ratón
Si comparamos estos resultados con los obtenidos
durante el año 1992 en que los niveles
de VPM se encontraban entre 30 y 50 µg/100
gramos de carne y considerando que con el
transcurso de los años estas concentraciones
fueron aumentando, para alcanzar el año 1994
niveles de 550 µg/100 gramos y en 1998 niveles
de 99.000 µg/100 gramos en choritos del
estero Quitralco, podemos concluir que esta
toxina se ha mantenido en forma endémica en
la región aunque en niveles más bajos que los
presentados en los últimos años.
Veneno Paralizante de Moluscos (VPM) por
HPLC: Se analizó por HPLC un recurso de cada
estación muestreada para conocer el perfil de
las toxinas paralizantes. Se observa en todas
las muestras, incluida la Est Nº 5 saxitoxina,
neosaxitoxina, gonyautoxinas 1, 2, 3 y 4 (Figs.
2, 3). En todos los casos las concentraciones
encontradas de GTX 2 y GTX 3 fueron más altas
que GTX 1 y GTX 4. Estos resultados concuerdan
con los encontrados por Lagos en choritos
recolectados en canal Errázuriz, XI Región, en
1994.
Detección de toxinas en mariscos de la XI Región
39
Veneno Diarreico de Moluscos (VDM) por
bioensayo en raton: Para analizar el veneno
diarreico de los moluscos se usó el método
Yasumoto 1984 modificado ya que en el área
estudiada estaba presente la toxina paralizante,
por lo que se tuvo que eliminar esta toxina
previo a la inyección intraperitoneal a los ratones.
No se detectó veneno diarreico en ninguna
de las muestras analizadas.
Veneno Diarreico de Moluscos (VDM) por
HPLC: En cuanto al análisis de ácido okadaico
(OA) y dinofisistoxina-1 (DTX-1) por HPLC, se detectó
la toxina solamente en la muestra procedente
de la Estación Nº 5 (Melinka) y en niveles
trazas.
Yesotoxina (YTX): Posteriormente y aunque
no estaba en los objetivos de este trabajo se
analizaron tres recursos correspondientes a
las estaciones 5, 27 y 35 para detectar esta
toxina considerada componente del VDM, encontrándola
solamente en la Estación Nº 5
(Fig. 4).
Veneno Amnésico de Moluscos (VAM) por
HPLC: No se detectó la toxina amnésica en ninguna
de las muestras analizadas.
Lamentablemente no se pudieron obtener las
muestras correspondientes al canal Puyuhuapi
y canal Yacaf localidades presumiblemente contaminadas
con toxina diarreica y que se habían
programado en este crucero.
CONCLUSIONES
Se encontró toxina paralizante en todas las estaciones
del área geográfica estudiada por HPLC.
Se detectó toxina diarreica (ácido okadaico y
dinophysis toxina-1) solamente en la estación Nº
5 (Melinka) y en niveles trazas.
No se detectó toxina amnésica en el período
de muestreo realizado entre el 25 de febrero y el
09 de marzo en la región de Aysén.
El perfil de las toxinas paralizantes evidenció
la presencia de saxitoxina, neosaxitoxina y
gonyautoxinas 1, 2, 3 y 4.
Los niveles de toxina paralizante fueron inferiores
a los reportados con anterioridad por el
Servicio de Salud Aysén.
Se detectó yesotoxina en la estación Nº 5.

40 Revista Ciencia y Tecnología del Mar, Vol. 27 (2) - 2004
40
35
30
25
20
15
10
5
0
0
2,25
2,98
3,38
3,87
5,42
6,05
2 4 6 8 10
Retention Time (min)
12 14 16 18 20
Fig. 2: Cromatograma por HPLC de STX y neoSTX en una muestra de Aulacomya ater.
Fig. 2: HPLC chromatogram of STX and neoSTX in a sample of Aulacomya ater.
150
140
130
120
110
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
2,73
3,31
4,61 4,81
5,32
5,97
7,64, GTX 4
9,07, GTX 1
8,26
10,47
11,81
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
Retention Time (min)
Fig. 3: Cromatograma por HPLC de GTXs en una muestra de Aulacomya ater.
Fig. 3: HPLC chromatogram of GTXs in a sample of Aulacomya ater.
12,97, GTX 3
12,17
13,50, NEOSAXITOXINA
17,00, GTX 2
15,80, SAXITOXINA

Detección de toxinas en mariscos de la XI Región
CH. I C. S 2.50 ATT 3 OFFS 10 08/09/00 01:38
A-21 STANDARD YESSOTOXINA
5
10
15
20
25
30
ESCAPE
CH. I C. S 20.00 ATT 3
NOISE 33
9.07
23.94
17.23
3.44
7.91
14.96
11.00
14.16
YTX
CH. I C. S 2 .50 ATT 3 OFFS 10 08/09/00 05:57
A-21 ESTACIONES ESTACIÓN
MELINKA CHOLGAS
5
10
15
20
25
30
S .P A00
S .P 1600
8.99
10.07
Fig. 4: Cromatograma por HPLC de YTX en una muestra de Aulacomya ater.
Fig. 4: HPLC chromatogram of YTX in a sample of Aulacomya ater.
9.63
4.93
YTX
7.42
1.04
3.52
1.94
4.59
41

42 Revista Ciencia y Tecnología del Mar, Vol. 27 (2) - 2004
AGRADECIMIENTOS
Se agradece al Comité Oceanográfico Nacional,
al personal del AGOR “Vidal Gormaz”. Se agradece
también la colaboración de la Srta. Valeria
Fuentealba y Sr. Luis Molina en los análisis de
laboratorio y la cooperación de la Unidad de Mantención
de Animales del ISP, en especial al Dr.
Julio Maldonado y Sr. Humberto Domenech. (Proyecto
Cona-C4F 98-14).
REFERENCIAS
AOAC. 1990. Paralytic shellfish poison. Biological
method. Sec. 959.08. pp. 881-882 En:
Official Methods of Analysis. 15 th Edition.
Association of Official Analytical Chemists,
Arlington, Virginia, USA.
MANUAL DE MÉTODOS DE ANÁLISIS FISICO-
QUIMICOS DE ALIMENTOS, AGUAS Y SUE-
LOS. 1998. Instituto de Salud Pública de
Chile.
OSHIMA, Y. 1995. Post-column derivatization HPLC
methods for paralytic shellfish poisons. Pp.
81-94 En: Hallegraeff, G. M., D. M. Anderson
and A. D. Cembella (eds.) Manual on Harmful
Marine Microalgae, IOC Manuals and Guides
Nº 33, UNESCO.
QUILLIAM, M. A. 1995. Analysis of diarrhetic
shellfish poisoning toxins in shellfish tissue
by liquid chromatography with fluorometric
and mass spectrometric detection. J. AOAC
Int. 78(2): 555-570
QUILLIAM et al., 1995. Rapid extraction and cleanup
for liquid chromatographic determination
of domoic acid in unsalted seafood. J.
AOAC International Vol. 78, Nº 2: 543-
554.
YASUMOTO, T. 1980. Bulletin of the Japanese
Society of Scientific Fisheries. 46 (11), 1.405-
1.411.
YASUMOTO, T. & A. TAKIZAWA. 1997.
Fluorometric measurement of yessotoxins
in shellfish by high pressure liquid
chromatography. Biosci., Biotechnol., and
Biochem. 61 (10): 1.775-1.777
PROGRAMA NACIONAL DE VIGILANCIA Y CONTROL
DE LAS INTOXICACIONES POR MAREA ROJA,
MINISTERIO DE SALUD. 1995.
LAGOS, N. 1996. Paralytic shellfish toxin
composition: a quantitative analysis en Chilean
mussels and dinoflagellate. Pp 121-124. En:
T. Yasumoto, Y. Oshima and Y. Fukuyo (eds.)
Harmful and Toxic Algal Blooms, IOC, UNESCO.