TESIS FICOTOXINAS MARINAS EVA FONFRIA

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26 Introducción En el campo de la seguridad alimentaria, esta técnica se utiliza para la detección de micotoxinas [179], ficotoxinas [96, 180], bacterias [181], antibióticos [182], aditivos [183] y drogas veterinarias [184], entre otros analitos. Equipo instrumental En la presente tesis se utilizaron dos biosensores distintos de la casa comercial Biacore: Biacore Q y Biacore X. Ambos aparatos comparten los elementos esenciales de los dispositivos Biacore: el chip sensor, el sistema de microfluidos y el sistema óptico [173, 174] pero difieren en sensibilidad, automaticidad y otras características instrumentales, como se describe a continuación. Chip sensor El chip sensor presenta dos elementos fundamentales: una superficie de cristal recubierta por una fina lámina de oro (común en todos los chips e imprescindible para generar el fenómeno de SPR) y por encima de ésta, un recubrimiento especial (diferente en función del tipo chip (tabla 1) capaz de proporcionar un entorno adecuado para distintos tipos de interacción. Para facilitar su manejo y protección, estos elementos se encuentran insertados en una estructura de plástico rectangular capaz de deslizarse al interior de una funda (figura 17). Figura 17. Ilustración esquemática de la estructura de un chip sensor CM5.
Chip sensor Tipo de superficie Uso/aplicación CM5 Matriz de carboximetil dextrano Uso general CM4 Matriz de carboximetil dextrano con niveles de carboximetilación menores que CM5 CM3 Matriz de carboximetil dextrano con cadenas de dextrano más cortas que CM5 27 Introducción Niveles de inmovilización bajos Moléculas grandes C1 Carboxilada, sin matriz de dextrano Aplicaciones donde la matriz SA Matriz de carboximetil dextrano con estreptavidina inmovilizada NTA Matriz de carboximetil dextrano con ácido nitrilotriacético inmovilizado L1 Matriz de carboximetil dextrano con modificaciones lipofílicas interfiere. Captura de ligandos marcados con biotina. Captura de ligandos marcados con polihistidina Captura de liposomas HPA Hidrofóbica Captura de lípidos monocapa Au Sin recubrimiento Diseño propio de superficies Tabla 1. Características principales de los distintos tipos de chips sensores comercializados por la empresa Biacore. Para cada diseño experimental, en función del tipo de chip y de las características del ligando, la estrategia de inmovilización es distinta, y aunque existen protocolos de inmovilización pre-establecidos [173], este procedimiento debe optimizarse para cada tipo de ensayo. En la presente tesis se utilizaron chips CM5 en los que se inmovilizaron directamente por medio de una unión amina dos clases de fosfodiesterasas distintas y chips CM5 con saxitoxina inmovilizada mediante un brazo espaciador de jeffamina (ver sección Publicaciones). Sistema de microfluidos Cuando el chip sensor es insertado por primera vez en el biosensor, la cara de cristal es presionada contra el prisma cristalino de la unidad óptica, mientras que la cara que contiene la matriz, entra en contacto con un cartucho de microfluidos integrado (IFC). De esta manera, se forman varias celdas de flujo (el número de celdas depende del modelo Biacore), con un volumen que varia en función del biosensor entre los 20
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